|
Стр. 13
Для ряда лекарственных средств (антибиотиков, мягких
лекарственных форм и др.) отбирают от каждой серии среднюю пробу
не менее 15 г, состоящую из равных разовых проб, взятых из не
менее чем 10 разных упаковок. Для одного анализа используют
образцы по 3 г (мл) для каждого раздела исследования. Всего для
проведения одного анализа используют по 9 г (мл) лекарственного
средства. При повторении испытания по одному из разделов
исследования используют образец в количестве 3 г (мл).
Для лекарственных средств в аэрозольной упаковке, пленок
полимерных лекарственных и др. отбор и приготовление проб проводят
согласно указанию в частных статьях.
В зависимости от физических свойств лекарственной формы
образец для анализа готовят в виде раствора, суспензии или
эмульсии:
- твердые лекарственные формы, которые трудно растворяются,
измельчают с помощью соответствующего оборудования и суспендируют
в фосфатном буферном растворе рН 7,0 или соответствующей жидкой
питательной среде, рекомендованной для определенного вида
испытания;
- жидкие лекарственные формы, а также твердые формы, которые
быстро и практически полностью растворяются в фосфатном буферном
растворе рН 7,0 или соответствующей питательной среде в разведении
1:10, готовят в виде растворов или суспензий;
- мягкие лекарственные формы, нерастворимые в воде,
эмульгируют в фосфатном буферном растворе рН 7,0 с помощью
стеклянных бус и минимального количества подходящего стерильного
эмульгатора, указанного в соответствующей статье (например,
твин-80), применяя механическое встряхивание и нагревание до
температуры не более 45 град. С в случае необходимости.
Приготовленные разведения образцов используют для определения
общего числа бактерий и грибов в 1 г (мл) лекарственного средства
и установления отсутствия бактерий семейств Еnterobacteriaceae,
Pseudomonas aeruginosa и Staphylococcus aureus.
Количественное определение микроорганизмов
Испытание проводят двухслойным агаровым методом в чашках Петри
диаметром 90-100 мм. Образец лекарственного средства в количестве
10 г (мл) растворяют, суспендируют или эмульгируют в фосфатном
буферном растворе рН 7,0 так, чтобы конечный объем раствора
(суспензии, эмульсии) был 100 мл. Посевы просматривают ежедневно.
Определение общего числа бактерий. Приготовленный раствор
(суспензию, эмульсию) образца вносят по 1 мл в каждую из двух
пробирок с 4 мл расплавленной и охлажденной до температуры от 45
до 50 град. С среды N 1. Быстро перемешивают содержимое пробирки и
переносят в чашку Петри, содержащую 15-20 мл застывшей питательной
среды N 1. Быстрым покачиванием чашки Петри равномерно
распределяют верхний слой агара. После застывания среды чашки
переворачивают и инкубируют в течение 5 сут при температуре от 30
до 35 град. С. Через 48 ч и окончательно через 5 сут подсчитывают
число бактериальных колоний на двух чашках, находят среднее
значение и, умножая его на показатель разведения, вычисляют число
бактерий в 1 г (мл) образца.
Для получения достоверных результатов учитывают только те
чашки, на которых выросло от 30 до 300 колоний. Если при
разведении образца 1:10 нет роста, результаты отмечают следующим
образом: "В 1 г (мл) лекарственного средства (сырья) менее 10
бактерий".
Если число колоний на чашке превышает 300, делают ряд
дальнейших последовательных разведений образца (1:100, 1:1000 и
т.д.), выбирая для посева разведение, наиболее соответствующее
указанному выше уровню.
Определение общего числа грибов. Испытание проводят
двухслойным агаровым методом, описанным выше, используя среду N 2.
Посевы инкубируют в течение 5 сут при температуре от 20 до 25
град. С. Через 72 ч и окончательно через 5 сут подсчитывают общее
число колоний дрожжевых и плесневых грибов на двух чашках, находят
среднее значение и, умножая его на показатель разведения, т.е. на
10, вычисляют число грибов в 1 г (мл) образца. В случае, если
число колоний грибов на чашке превышает 300, делают ряд дальнейших
разведений образца. На чашке учитывают все колонии грибов, даже
если их число менее 30.
ВЫЯВЛЕНИЕ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ
СЕМЕЙСТВА ENTEROBACTERIACEAE
Образец в количестве 10 г (мл) вносят в 100 мл питательной
среды N 3, перемешивают и инкубируют при температуре от 30 до 35
град. С в течение 24-48 ч. При наличии роста делают пересев петлей
на среды N 4 и N 5, разлитые в чашки Петри. Посевы инкубируют при
температуре от 30 до 35 град. С в течение 24-48 ч. Если после
инкубации на средах N 4 и N 5 не будет колоний, соответствующих
морфологической характеристике, данной в табл. 14, считают, что в
образце нет бактерий семейства Enterobacteriaceae.
Колонии, подозрительные по морфологии на принадлежность к
семейству Enterobacteriaceae, пересевают каждую отдельно со сред N
4 и N 5 на скошенную в пробирках среду N 1 и выращивают при
температуре от 30 до 35 град. С в течение 18-20 ч. Из каждой
пробирки с чистой культурой через сутки делают пересевы на среды N
6 и N 7. После посева в половину пробирок со средой N 6 вносят по
0,5 мл стерильного вазелинового масла. Все посевы инкубируют при
температуре от 30 до 35 град. С в течение 18-20 ч. При наличии
роста ферментацию глюкозы устанавливают по изменению цвета среды N
6 из красного в желтый в пробирках с маслом и без него. О наличии
нитритов в среде N 7 судят по появлению красного окрашивания при
внесении в среду реактива Грисса. Параллельно исследуют чистые
культуры на наличие фермента цитохромоксидазы.
Если в образце обнаружены грамотрицательные неспорообразующие
палочки, которые дают отрицательную оксидазную реакцию,
ферментируют глюкозу с образованием кислоты (или кислоты и газа) и
восстанавливают нитраты в нитриты, лекарственное средство
контаминировано бактериями семейства Enterobacteriaceae.
Таблица 14
Морфологическая характеристика бактерий
семейства Enterobacteriaceae
на диагностических средах
-------------------T--------------------------T------------------¬
¦ Диагностическая ¦ N 4 ¦ N 5 ¦
¦ среда ¦ агар Эндо ¦висмутсульфит агар¦
+------------------+--------------------------+------------------+
¦Характерная ¦Колонии круглые, малиновые¦Черные колонии с¦
¦морфология колоний¦с металлическим блеском¦характерным метал-¦
¦ ¦или без него; розовые,¦лическим блеском,¦
¦ ¦бесцветные, блестящие,¦участки среды под¦
¦ ¦выпуклые диаметром 2-4 мм ¦колониями окрашены¦
¦ ¦ ¦в черный цвет; ¦
¦ ¦ ¦зеленовато - бурые¦
¦ ¦ ¦колонии, светло -¦
¦ ¦ ¦зеленые, бурые ¦
¦Окраска по Граму ¦Грамотрицательные неспорообразующие палочки ¦
L------------------+----------------------------------------------
ВЫЯВЛЕНИЕ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ
PSEUDOMONAS AERUGINOSA И STAPHYLOCOCCUS AUREUS
Образец в количестве 10 г (мл) вносят в 100 мл питательной
среды N 8, перемешивают и инкубируют при температуре от 30 до 35
град. С в течение 24-48 ч. При наличии роста делают пересев петлей
на среды N 9 и N 10, разлитые в чашки Петри. Посевы инкубируют при
температуре от 30 до 35 град. С в течение 24-48 ч.
Если после инкубации на средах N 9 и N 10 не обнаружены
колонии микроорганизмов, соответствующих морфологической
характеристике, данной в табл. 15 и 16, считают, что в
лекарственном средстве нет Pseudomonas aeruginosa и Staphylococcus
aureus. При наличии на среде N 9 характерных для Pseudomonas
aeruginosa колоний грамотрицательных неспорообразующих палочек,
обладающих специфическим запахом и выделяющих сине - зеленый
пигмент пиоцианин в питательный агар, культуру исследуют на
наличие фермента цитохромоксидазы.
Таблица 15
Морфологическая характеристика Pseudomonas
aeruginosa на диагностической среде N 9
---------------------------T-------------------------------------¬
¦ Характерная морфология ¦ Окраска по Граму ¦
¦ колоний ¦ ¦
+--------------------------+-------------------------------------+
¦Зеленоватые, как правило,¦Грамотрицательные неспорообразующие¦
¦флюоресцирующие колонии,¦палочки ¦
¦голубые в ультрафиолетовом¦ ¦
¦свете ¦ ¦
L--------------------------+--------------------------------------
Таблица 16
Морфологическая характеристика Staphylococcus
aureus на диагностической среде N 10
-----------------------T-----------------------------------------¬
¦Характерная морфология¦ Окраска по Граму ¦
¦ колоний ¦ ¦
+----------------------+-----------------------------------------+
¦Золотисто - желтые ко-¦Грамположительные кокки, расположенные¦
¦лонии, окруженные жел-¦гроздьями ¦
¦тыми зонами ¦ ¦
L----------------------+------------------------------------------
Если в образце обнаружены грамотрицательные неспорообразующие
палочки, которые дают положительную оксидазную реакцию и образуют
сине - зеленый пигмент, лекарственное средство контаминировано
Pseudomonas aeruginosa.
Наличие на среде N 10 золотисто - желтых колоний
грамположительных кокков, окруженных желтыми зонами,
свидетельствует о ферментации маннита. Чистую культуру
стафилококка исследуют на наличие фермента плазмокоагулазы.
Если в образце обнаружены грамположительные кокки, которые
ферментируют маннит и дают положительную реакцию плазмокоагуляции,
лекарственное средство контаминировано Staphylococcus aureus.
В нестерильных лекарственных средствах не допускается наличие
бактерий семейства Enterobacteriaceae, Pseudomonas aeruginosa и
Staphylococcus aureus.
В 1 г (мл) лекарственного средства для приема внутрь
допускается наличие не более 1000 бактерий и 100 дрожжевых и
плесневых грибов (суммарно).
В 1 г (мл) лекарственного средства для применения в полости
уха, носа, для интравагинального использования и для местного
употребления допускается наличие не более 100 микроорганизмов, в
том числе и грибов.
Тест на наличие нитритов. К суточной исследуемой культуре
бактерий на среде N 7 приливают 0,2-0,3 мл реактива Грисса,
погружая пипетку до дна пробирки. Появление красного окрашивания
свидетельствует о наличии нитритов.
Тест на наличие цитохромоксидазы. Полоску фильтровальной
бумаги смачивают реактивом и наносят платиновой петлей или
стеклянной палочкой суточную чистую культуру исследуемых бактерий
со скошенной среды N 1. Синее окрашивание, появляющееся через 2-5
мин, свидетельствует о положительной оксидазной реакции.
Тест на наличие плазмокоагулазы (реакция плазмокоагуляции).
Кровь, взятую стерильным шприцем из сердца кролика, помещают в 5%
стерильный раствор натрия цитрата, отсасывают плазму, разводят 1:5
0,9% стерильным раствором натрия хлорида изотоническим и разливают
по 0,5 мл в стерильные пробирки. В каждую пробирку помещают 1
петлю суточной культуры стафилококка и инкубируют при температуре
от 30 до 35 град. С в течение 4-6 ч. Если в течение этого времени
не наблюдают свертывание плазмы, реакцию плазмокоагуляции считают
отрицательной. Обязательно наличие двух контролей: 1) контроль
раствора плазмы, 2) контроль культуры стафилококка, обладающего
ферментом коагулазой.
Для удобства постановки реакции плазмокоагуляции можно
использовать сухую кроличью цитратную плазму промышленного
производства, которую разводят согласно наставлению по применению.
Питательные среды
Питательные среды должны обеспечивать рост и развитие
определенных микроорганизмов. Готовить питательные среды следует,
строго придерживаясь приведенной рецептуры. Компоненты питательных
сред должны соответствовать ГОСТ и ТУ.
Состав и приготовление питательных сред. Среда N 1 - для
выращивания бактерий:
пептона ферментативного сухого 10 г
натрия хлорида 5 >>
глюкозы 1 >>
агара микробиологического <*> 13 >>
мясной воды (1:2) 1000 мл
рН после стерилизации 7,3 +/-0,2.
К мясной воде прибавляют пептон и натрия хлорид, растворяют
при нагревании, вносят глюкозу, устанавливают рН, кипятят в
течение 1 мин, прибавляют замоченный заранее агар, нагревают до
полного его расплавления, фильтруют через ватно - марлевый фильтр.
Стерилизуют в паровом стерилизаторе насыщенным паром под давлением
при температуре 121 град. С в течение 15 мин.
Среда N 2 - для выращивания грибов (Сабуро):
пептона ферментативного сухого 10 г
глюкозы 40 >>
агара микробиологического <*> 13 >>
воды дистиллированной 1000 мл
рН после стерилизации 5,6 +/-0,2.
Все ингредиенты растворяют в воде, прибавляют замоченный
заранее агар, нагревают до полного его расплавления, фильтруют
через ватно - марлевый фильтр. Стерилизуют в паровом стерилизаторе
насыщенным паром под давлением при температуре 121 град. С в
течение 15 мин. Для подавления роста бактерий после стерилизации
насыщенным паром под давлением прибавляют 100 мг бензилпенициллина
и 100 мг тетрациклина (либо перед стерилизацией насыщенным паром
под давлением - 50 мг левомицетина) на 1000 мл среды.
--------------------------------
<*> Жидкие среды N 1 и N 2 не содержат агара.
Среда N 3 - среда обогащения для бактерий семейства
Enterobacteriaceae:
пептона ферментативного сухого 10,0 г
натрия фосфата двузамещенного 7,5 >>
калия фосфата однозамещенного 2,5 >>
глюкозы 10,0 >>
фенолового красного 0,08 >>
малахитового зеленого 0,015 >>
мясной воды (1:2) 1000 мл
рН после стерилизации 7,3 +/-0,2.
Пептон и соли растворяют в мясной воде при нагревании, вносят
глюкозу, прибавляют 8 мл 1% раствора фенолового красного и 3 мл
0,5% раствора малахитового зеленого, устанавливают рН, кипятят 1
мин, фильтруют через бумажный фильтр. Стерилизуют насыщенным паром
под давлением при температуре 121 град. С в течение 15 мин в
паровом стерилизаторе.
Среда N 4 (агар Эндо сухой) -для выделения прописи семейства
Enterobacteriaceae - готовят согласно бактерий на этикетке.
Среда N 5 (висмутсульфит агар сухой) - для выделения бактерий
семейства Enterobacteriaceae - готовят согласно прописи на
этикетке.
Среда N 6 - для определения ферментации глюкозы:
пептона ферментативного сухого 10,0 г
натрия хлорида 5,0 >>
глюкозы 40,0 >>
фенолового красного 0,08 >>
мясной воды (1:2) 1000 мл
рН после стерилизации 7,2 +/-0,2.
Пептон и натрия хлорид растворяют в мясной воде при
нагревании, вносят глюкозу, прибавляют 8 мл 1% раствора
фенолового красного, устанавливают рН, кипятят 1 мин, фильтруют
через бумажный фильтр и разливают в пробирки с поплавками по 4-5
мл. Стерилизуют в паровом стерилизаторе насыщенным паром под
давлением при температуре 121 град. С в течение 15 мин. По
окончании стерилизации следует как можно быстрее охладить среду.
Среда N 7 - для определения восстановления нитратов в нитриты:
пептона ферментативного сухого 5,0 г
натрия хлорида 5,0 >>
калия нитрата 1,5 >>
воды дистиллированной 1000 мл
рН после стерилизации 7,2 +/-0,2.
Все компоненты растворяют в воде при нагревании, устанавливают
рН, кипятят 1 мин, фильтруют через бумажный фильтр, разливают в
пробирки по 4-5 мл. Стерилизуют в паровом стерилизаторе насыщенным
паром под давлением при температуре 121 град. С в течение 15 мин.
Таблица 17
Тест - микроорганизмы и условия для биологического
определения активности антибиотиков
---------------T---------------T----------------T----------T-----------------¬
¦ ¦ ¦ Среда для ¦Количество¦ ¦
¦ ¦ ¦ определения ¦ среды на ¦ ¦
¦ ¦ ¦ активности ¦ каждую ¦ ¦
¦Антибиотик <1>¦Тест - микро- ¦ <3, 4> ¦ чашку, ¦ Посевная ¦
¦ ¦организмы <2> ¦ ¦ мл <5> ¦ доза <6> ¦
¦ ¦ +----T-----------+----T-----+ ¦
¦ ¦ ¦ниж-¦ верхний ¦ниж-¦верх-¦ ¦
¦ ¦ ¦ний ¦ лой ¦ний ¦ ний ¦ ¦
¦ ¦ ¦слой¦ ¦слой¦слой ¦ ¦
+--------------+---------------+----+-----------+----+-----+-----------------+
¦Ампициллин ¦Staphylococcus ¦N 11¦N 7 + 0,1% ¦ 10 ¦ 5 ¦40 млн микробных¦
¦ ¦aureus 209 Р ¦ ¦глюкозы ¦ ¦ ¦клеток на 1 мл¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦среды ¦
¦Амфотерицин В ¦Candida utilis ¦ ¦N 16 + 0,1%¦ ¦ 15 ¦3 мл рабочей¦
¦ ¦ЛИА-01 ¦ ¦глюкозы ¦ ¦ ¦взвеси на 100 мл¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦среды ¦
¦Бензилпеницил-¦Staphylococcus ¦N 11¦N 7 + 0,1% ¦ 10 ¦ 5 ¦40 млн микробных¦
¦лин ¦aureus 209 Р ¦ ¦глюкозы ¦ ¦ ¦клеток на 1 мл¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦среды ¦
¦Гелиомицин ¦Вас. subtilis ¦N 17¦ N 17 ¦ ¦ 15 ¦100 млн спор на 1¦
¦ ¦ATCC 6633 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦мл среды ¦
¦Гентамицин ¦Вас. pumilus ¦ ¦ N 9 ¦ 20 ¦ 5 ¦50 млн спор на 1¦
¦ ¦NCTC 8241 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦мл среды ¦
¦Грамицидин С ¦Вас.cereus ¦ ¦ N 13 ¦ ¦ 10 ¦8 млн спор на 1¦
¦ ¦var. mycoides ¦ ¦ ¦ ¦ ¦мл среды ¦
¦ ¦537 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Дактиномицин ¦Вас. cereus, ¦ ¦ N 14 ¦ ¦ 10 ¦20 млн спор на 1¦
¦ ¦var. mycoides ¦ ¦ ¦ ¦ ¦мл среды ¦
¦ ¦HB ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Дигидростреп- ¦Вас. cereus, ¦ ¦ N 9 ¦ ¦ 10 ¦20 млн спор на 1¦
¦томицин ¦var. mycoides ¦ ¦ ¦ ¦ ¦мл среды ¦
¦ ¦537 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Диклоксациллин¦Staphylococcus ¦N 11¦N 7 + 0,1% ¦ 10 ¦ 5 ¦40 млн микробных¦
¦ ¦aureus ¦ ¦глюкозы ¦ ¦ ¦клеток на 1 мл¦
¦ ¦209 P ¦ ¦ ¦ ¦ ¦среды ¦
¦Доксициклин ¦Вас. subtilis, ¦ ¦N 6 + 1% ¦ ¦ 10 ¦30 млн спор на 1¦
¦ ¦var Л2 ¦ ¦глюкозы ¦ ¦ ¦мл среды ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Канамицин В10 ¦Вас. subtilis ¦N 12¦ N 8 ¦ 10 ¦ 5 ¦100 млн спор на 1¦
¦ ¦ATCC 6633 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦мл среды ¦
¦Канамицин ¦Вас. pumilus ¦N 8 ¦ N 8 ¦ 15 ¦ 5 ¦40 млн спор на 1¦
¦ ¦NCTC 8241 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦мл среды ¦
¦Карбенициллин ¦Pseudomonas ¦ ¦ N 7 ¦ ¦ 15 ¦10 мл бульонной¦
¦ ¦aeruginosa ¦ ¦ ¦ ¦ ¦культуры на 100¦
¦ ¦NCTC 2134 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦мл среды ¦
¦Карминомицин ¦Вас. cereus, ¦ ¦ N 5 ¦ ¦ 15 ¦100 млн спор на 1¦
¦ ¦var. mycoides ¦ ¦ ¦ ¦ ¦мл среды ¦
¦ ¦537 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Леворин ¦Candida utilis ¦ ¦N 16 + 1% ¦ ¦ 15 ¦2-2,5 мл рабочей¦
¦ ¦ЛИА-01 ¦ ¦глюкозы ¦ ¦ ¦взвеси на 100 мл¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦среды ¦
¦Линкомицин ¦Вас. subtilis ¦ ¦ N 8 ¦ ¦ 10 ¦100 млн спор на 1¦
¦ ¦ATCC 6633 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦мл среды ¦
¦Метациклин ¦Вас. subtilis, ¦ ¦N 6 + 1% ¦ ¦ 10 ¦30 млн спор на 1¦
¦ ¦var. Л2 ¦ ¦глюкозы ¦ ¦ ¦мл среды ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Метициллин ¦Staphylococcus ¦ ¦N 7 + 0,1% ¦ 10 ¦ 5 ¦40 млн микробных¦
¦ ¦N 11 aureus ¦ ¦глюкозы ¦ ¦ ¦клеток на 1 мл¦
¦ ¦209 P ¦ ¦ ¦ ¦ ¦среды ¦
¦Микогептин ¦Candida utilis ¦ ¦N 16 + 1% ¦ ¦ 15 ¦2,5-3 мл рабочей¦
¦ ¦ЛИА-01 ¦ ¦глюкозы ¦ ¦ ¦взвеси на 100 мл ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Мономицин ¦Вас. cereus, ¦ ¦ N 9 ¦ ¦ 10 ¦20 млн спор на 1¦
¦ ¦var. mycoides ¦ ¦ ¦ ¦ ¦мл среды ¦
¦ ¦537 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Неомицин ¦То же ¦N 9 ¦ ¦ 20 ¦ 5 ¦20 млн спор на 1¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦мл среды ¦
¦Нистатин ¦Candida utilis ¦ ¦N 16 + 1% ¦ ¦ 15 ¦3-3,5 мл рабочей¦
¦ ¦ЛИА-01 ¦ ¦глюкозы ¦ ¦ ¦взвеси на 100 мл¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦среды ¦
¦Оксациллин ¦Staphylococcus ¦N 11¦N 7 + 0,1% ¦ 10 ¦ 5 ¦40 млн микробных¦
¦ ¦aureus 209 Р ¦ ¦глюкозы ¦ ¦ ¦клеток на 1 мл¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦среды ¦
¦Окситетра- ¦Вас. subtilis ¦ ¦N 6 + 1% ¦ ¦ 10 ¦30 млн спор на 1¦
¦циклин ¦var. Л2 ¦ ¦глюкозы ¦ ¦ ¦мл среды ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Олеандомицин ¦Вас. cereus, ¦ ¦ N 9 ¦ ¦ 10 ¦20 млн спор на 1¦
¦ ¦var. mycoides ¦ ¦ ¦ ¦ ¦мл среды ¦
¦ ¦HB ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Оливомицин ¦Вас. subtilis ¦N 11¦ N 18 ¦ 10 ¦ 5 ¦10 млн спор на 1¦
¦ ¦АТСС 6633 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦мл среды ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Полимиксин В ¦Bordetella ¦ ¦ N 15 ¦ ¦ 10 ¦40-60 млн микроб-¦
¦ ¦bronchiseptica ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ных клеток на 1¦
¦ ¦АТСС 4617 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦мл среды ¦
¦Полимиксин М ¦Bordetella ¦ ¦ N 15 ¦ ¦ 10 ¦40-60 млн микроб-¦
¦ ¦bronchiseptica ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ных клеток на 1¦
¦ ¦АТСС 4617 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦мл среды ¦
¦Рифампицин ¦Вас. subtilis ¦ ¦N 10 + 0,1%¦ ¦ 10 ¦40 млн спор на 1¦
¦ ¦АТСС 6633 ¦ ¦глюкозы ¦ ¦ ¦мл среды ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Рубомицин ¦Вас. cereus, ¦ ¦ N 5 ¦ ¦ 15 ¦10 млн спор на 1¦
¦ ¦var. mycoides ¦ ¦ ¦ ¦ ¦мл среды ¦
¦ ¦537 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Сизомицин ¦Вас. pumilus ¦N 12¦ N 8 ¦ 20 ¦ 5 ¦50 млн спор на 1¦
¦ ¦NCTC 8241 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦мл среды ¦
¦Стрептомицин ¦Вас. cereus, ¦ ¦ N 9 ¦ ¦ 10 ¦20 млн спор на 1¦
¦ ¦var. mycoides ¦ ¦ ¦ ¦ ¦мл среды ¦
¦ ¦537 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Тетрациклин ¦Вас. subtilis ¦ ¦N 6 + 1% ¦ ¦ 10 ¦30 млн спор на 1¦
¦ ¦var Л2 ¦ ¦глюкозы ¦ ¦ ¦мл среды ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Феноксиметил- ¦Staphylococcus ¦N 11¦N 7 + 0,1% ¦ 10 ¦ 5 ¦40 млн микробных¦
¦пенициллин ¦aureus 209 P ¦ ¦глюкозы ¦ ¦ ¦клеток на 1 мл¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦среды ¦
¦Флоримицин ¦Вас. subtilis ¦ ¦ N 8 ¦ ¦ 10 ¦20 млн спор на 1¦
¦ ¦ATCC 6633 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦мл среды ¦
¦Фузидин ¦Вас. cereus, ¦ ¦N 10 + 1% ¦ ¦ 10 ¦50 млн спор на 1¦
¦ ¦var. mycoides ¦ ¦глюкозы ¦ ¦ ¦мл среды ¦
¦ ¦HB ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Цефалексин ¦Вас. subtilis ¦N 11¦N 7 + 0,1% ¦ 10 ¦ 5 ¦100 млн спор на 1¦
¦ ¦ATCC 6633 ¦ ¦глюкозы ¦ ¦ ¦мл среды ¦
¦Цефалотин ¦Вас. subtilis ¦N 11¦N 7 + 0,1% ¦ 10 ¦ 5 ¦40 млн спор на 1¦
¦ ¦ATCC 6633 ¦ ¦глюкозы ¦ ¦ ¦мл среды ¦
¦Хлортетраци- ¦Вас. subtilis, ¦ ¦N 6 + 1% ¦ ¦ 10 ¦30 млн спор на 1¦
¦клин ¦var Л2 ¦ ¦глюкозы ¦ ¦ ¦мл среды ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Эритромицин ¦Вас. cereus, ¦ ¦ N 9 ¦ ¦ 10 ¦20 млн спор на 1¦
¦ ¦var. mycoides ¦ ¦ ¦ ¦ ¦мл среды ¦
¦ ¦HB ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
L--------------+---------------+----+-----------+----+-----+------------------
Продолжение таблицы
-----------------T--------------------------------T---------------T--------------¬
¦ ¦Растворитель для приготовления ¦ Срок годности ¦ Контрольная ¦
¦ ¦ растворов стандартного и ¦ основного ¦ концентрация ¦
¦ ¦ испытуемого образцов ¦ раствора ¦ раствора ¦
¦ Стандартный +----------------T---------------+ стандартного ¦ стандартного ¦
¦ образец ¦основной раствор¦рабочий раствор¦ образца при ¦образца <7, 8>¦
¦ ¦ ¦ ¦температуре от ¦в мкг/мл акт. ¦
¦ ¦ ¦ ¦4 до 10 град.С,¦ вещества или ¦
¦ ¦ ¦ ¦ сут ¦ ЕД/ мл ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+----------------+----------------+---------------+---------------+--------------+
¦Ампициллина ¦Буфер N 1 ¦Буфер N 1 ¦ 3 ¦ 1 мкг/мл ¦
¦тригидрат ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Амфотерицин В ¦Диметилсульфок- ¦Буфер N 1<11> ¦ 1 ¦ 0,5 мкг/мл ¦
¦ ¦сид ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Бензилпеницил- ¦Буфер N 1 ¦Буфер N 1 ¦ 3 ¦ 1 ЕД/мл ¦
¦лина натриевая ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦соль ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Гелиомицин ¦0,1 н. раствор¦0,1 н. раствор¦ 10 ¦ 4 мкг/мл ¦
¦ ¦едкого натра<13>¦едкого натра ¦ ¦ ¦
¦Гентамицина ¦Буфер N 4 ¦Буфер N 4 ¦ 14 ¦ 2 мкг/мл ¦
¦сульфат ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Грамицидин С ¦Этиловый ¦Дистиллирован- ¦ 30 ¦100 мкг/мл ¦
¦ ¦спирт 95% ¦ная вода ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Дактиномицин ¦Дистиллированная¦Буфер N 4 ¦ 15 ¦ 4 мкг/мл ¦
¦ ¦вода <9> ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Дигидрострепто- ¦Буфер N 3 ¦Буфер N 4 ¦ 30 ¦ 2 мкг/мл ¦
¦мицина сульфат ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Диклоксациллина ¦Буфер N 1 ¦Буфер N 1 ¦ 6 ¦ 8 мкг/мл ¦
¦натриевая соль ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Доксициклина ¦0,01 н. раствор¦Буфер N 2 ¦ 7 ¦ 0,5 мкг/мл ¦
¦гидрохлорид ¦хлористоводо- ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦родной кислоты ¦ ¦ ¦ ¦
¦Канамицина ¦Дистиллированная¦Буфер N 4 ¦ 30 ¦ 1 мкг/мл ¦
¦моносульфат ¦вода ¦ ¦ ¦ ¦
¦Канамицина ¦Дистиллированная¦Буфер N 4 ¦ 30 ¦ 10 мкг/мл ¦
¦моносульфат ¦вода ¦ ¦ ¦ ¦
¦Карбенициллина ¦Буфер N 1 ¦Буфер N 2 ¦ 3 ¦ 10 мкг/мл ¦
¦динатриевая ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦соль ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Карминомицина ¦Дистиллированная¦Буфер N 4 ¦ 10 ¦ 15 мкг/мл ¦
¦гидрохлорид ¦вода ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Леворин ¦Диметилсульфок- ¦Диметилсульфок-¦ 3(10) ¦ 0,5 мкг/мл ¦
¦ ¦сид ¦сид до концен- ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦трации 100 мкг ¦ ¦ ¦
¦Линкомицина ¦Дистиллированная¦Буфер N 4 ¦ 30 ¦100 мкг/мл ¦
¦гидрохлорид ¦вода ¦ ¦ ¦ ¦
¦Метациклина ¦0,01 н. раствор ¦Буфер N 2 ¦ 7 ¦ 0,5 мкг/мл ¦
¦гидрохлорид ¦хлористоводород-¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ной кислоты ¦ ¦ ¦ ¦
¦Метициллина ¦Буфер N 1 ¦Буфер N 1 ¦ 3 ¦ 20 мкг/мл ¦
¦натриевая ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦соль ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Микогептин ¦Диметилсульфок- ¦Диметилсульфок-¦ 3 <12> ¦ 1 мкг/мл ¦
¦ ¦сид ¦сид до концен-¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦трации 50 мкг/¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦мл, а затем бу-¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦фер N 4 <11> ¦ ¦ ¦
¦Мономицин ¦Дистиллированная¦3% раствор ¦ 30 ¦ 2 мкг/мл ¦
¦ ¦вода ¦хлорида калия ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Неомицина ¦Буфер N 4 ¦Буфер N 4 ¦ 30 ¦ 4 мкг/мл ¦
¦сульфат ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Нистатин ¦Диметилформамид ¦Буфер N 3 ¦ 3 ¦ 20 ЕД/мл ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Оксациллина ¦Буфер N 1 ¦Буфер N 1 ¦ 3 ¦ 4 мкг/мл ¦
¦натриевая соль ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Окситетрацикли- ¦0,01 н. раствор¦Буфер N 2 ¦ 7 ¦ 1 мкг/мл ¦
¦на гидрохлорид ¦хлористоводород-¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ной кислоты ¦ ¦ ¦ ¦
¦Олеандомицина ¦Буфер N 3 ¦Буфер N 4 ¦ 7 ¦ 4 мкг/мл ¦
¦фосфат ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Оливомицин- ¦Стандартный ¦Буфер N 1 ¦ 14 ¦ 2 мкг/мл ¦
¦кислота ¦образец в этило-¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦вом спирте из¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦расчета 5 мг в 1¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦мл, затем буфер¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦N 1, испытуемый¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦образец в дисти-¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ллированной воде¦ ¦ ¦ ¦
¦Полимиксин В ¦Буфер N 3 ¦Буфер N 5 ¦ 14 ¦100 ЕД/мл ¦
¦сульфат ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Полимиксин М ¦Буфер N 3 ¦Буфер N 5 ¦ 14 ¦100 ЕД/мл ¦
¦сульфат ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Рифампицин ¦1 мл диметилфор-¦Буфер N 3 ¦ 4 ¦ 5 мкг/мл ¦
¦ ¦мамида на 10 мг¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦навески, затем¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦дистиллированная¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦вода ¦ ¦ ¦ ¦
¦Рубомицина ¦Дистиллированная¦Буфер N 4 ¦ 10 ¦ 20 мкг/мл ¦
¦гидрохлорид ¦вода ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Сизомицина ¦Буфер N 4 ¦Буфер N 4 ¦ 14 ¦ 2 мкг/мл ¦
¦сульфат ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Стрептомицина ¦Буфер N 3 ¦Буфер N 4 ¦ 30 ¦ 2 мкг/мл ¦
¦сульфат ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Тетрациклина ¦0,01 н. раствор¦Буфер N 2 ¦ 7 ¦ 2 мкг/мл ¦
¦гидрохлорид ¦хлористоводород-¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ной кислоты ¦ ¦ ¦ ¦
¦Феноксиметилпе- ¦Буфер N 1 ¦Буфер N 1 ¦ 7 ¦ 1 ЕД/мл ¦
¦нициллин ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Флоримицина ¦Дистиллированная¦Буфер N 4 ¦ 7 ¦ 10 мкг/мл ¦
¦сульфат ¦вода ¦ ¦ ¦ ¦
¦Фузидиевая ¦Стандартный ¦Буфер N 3 ¦ 7 ¦ 5 мкг/мл ¦
¦кислота ¦образец - в эти-¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ловом спирте из¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦расчета 10 мг/мл¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦затем буфер N 4;¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦испытуемый обра-¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦зец - в буфере¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦N 4 ¦ ¦ ¦ ¦
¦Цефалексин ¦Буфер N 1 ¦Буфер N 1 ¦ 3 ¦ 5 мкг/мл ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Цефалотина нат- ¦Буфер N 1 ¦Буфер N 1 ¦ 3 ¦ 0,5 мкг/мл ¦
¦риевая соль ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Хлортетрацикли- ¦0,01 н. раствор¦Буфер N 2 ¦ 7 ¦ 1 мкг/мл ¦
¦на гидрохлорид ¦хлористоводород-¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ной кислоты ¦ ¦ ¦ ¦
¦Эритромицин ¦1 мл этилового¦Буфер N 4 ¦ 7 ¦ 2 мкг/мл ¦
¦ ¦спирта на 10 мг ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦навески, затем¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦буфер N 4 до¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦1000 ЕД/мл ¦ ¦ ¦ ¦
L----------------+----------------+---------------+---------------+---------------
--------------------------------
<1> Условия определения антимикробной активности антибиотиков
указанных наименований распространяются и на их лекарственные
формы.
<2> ATCC - Американская типовая коллекция культур, NCTC -
Национальная коллекция типовых культур.
<3> Состав, приготовление сред и буферных смесей см. табл. 19
и 20.
<4> Глюкозу добавляют в расплавленный агар в виде 40%
стерильного раствора.
<5> Объемы сред указаны для чашек размером 20 х 100 мм. При
использовании лунок количество среды для нижнего или одного слоя
удваивается.
<6> Допускается уменьшение или увеличение посевной дозы
тест - микроба в зависимости от плотности получаемого газона и
четкости очертания зон.
<7> В таблице указана контрольная концентрация раствора
стандартного образца для метода с использованием стандартной
кривой.
<8> Допускается при необходимости уменьшение или увеличение
контрольной концентрации раствора стандартного образца.
<9> Для полного растворения препарата раствор помещают в
холодильник при температуре от 4 до 10 град. С.
<10> Активность канамицина В определяется после гидролиза по
стандартному образцу канамицина А.
<11> Срок годности рабочих растворов в буфере при комнатной
температуре не более 30 мин.
<12> Срок годности основного раствора стандартного образца
микогептина при комнатной температуре не более 4-5 ч.
<13> Основной раствор готовят в концентрации 1 мг в 5 мл
раствора натра едкого (0,1 моль/л).
Среда N 8 - для выращивания Pseudomonas aeruginosa и
Staphylococcus aureus:
пептона ферментативного сухого 10,0 г
натрия хлорида 5,0 >>
калия фосфата двузамещенного 2,5 >>
глюкозы 2,5 >>
воды дистиллированной 1000 мл
рН после стерилизации 7,3 +/-0,2.
Пептон и соли растворяют в воде при нагревании, вносят
глюкозу, устанавливают рН, кипятят 1 мин, фильтруют через бумажный
фильтр. Стерилизуют в паровом стерилизаторе насыщенным паром под
давлением при температуре 121 град. С в течение 15 мин.
Среда N 9 - для выявления пигмента пиоцианина:
пептона ферментативного сухого 20,0 г
магния хлорида безводного 1,4 >>
калия сульфата безводного 10,0 >>
глицерина 10,0 мл
агара микробиологического 15,0 г
воды дистиллированной 1000 мл
рН после стерилизации 7,2 +/-0,2.
Все компоненты, кроме глицерина, растворяют в воде и оставляют
на 15 мин. Затем вносят глицерин, тщательно перемешивают,
растворяют при нагревании, устанавливают рН, кипятят 1 мин,
прибавляют замоченный заранее агар, нагревают до полного его
расплавления, фильтруют через ватно - марлевый фильтр. Стерилизуют
в паровом стерилизаторе насыщенным паром под давлением при
температуре 121 град. С в течение 15 мин.
Среда N 10 - для идентификации Staphylococcus aureus:
пептона ферментативного сухого 10,0 г
натрия хлорида 75,0 >>
маннита 10,0 >>
фенолового красного 0,025 >>
агара микробиологического 15,0 >>
воды дистиллированной 1000 мл
рН после стерилизации 7,4 +/-0,2.
Все компоненты растворяют в воде, вносят 2,5 мл 1% раствора
фенолового красного, устанавливают рН, кипятят 1 мин, прибавляют
замоченный заранее агар, нагревают до полного его расплавления,
фильтруют через ватно - марлевый фильтр. Стерилизуют в паровом
стерилизаторе насыщенным паром под давлением при температуре 121
град. С в течение 15 мин.
Требования к ростовым свойствам питательных сред. Используемые
питательные среды должны обеспечивать рост соответствующих
тест - штаммов бактерий и грибов, указанных в табл. 17, при посеве
их в количестве менее 100 жизнеспособных клеток: для сред N 1, 3,
6 - 10 не позднее 48 ч инкубации при температуре от 30 до 35 град.
С и для среды N 2 - не позднее 72 ч инкубации при температуре от
20 до 25 град. С.
Растворы, реактивы
Фосфатный буферный раствор с натрия хлоридом и пептоном (1/15
мол):
рН 7,0
калия фосфата однозамещенного 3,56 г
натрия фосфата двузамещенного 7,23 >>
натрия хлорида 4,3 >>
пептона ферментативного сухого 1,0 >>
воды дистиллированной до 1000 мл
Стерилизуют в паровом стерилизаторе насыщенным паром под
давлением при температуре 121 град. С в течение 15 мин. Раствор
хранят при температуре от 4 до 10 град. С.
Феноловый красный - 1% раствор:
фенолового красного 1,0 г
раствора едкого натра 0,1 (моль/л) 28,2 мл
воды дистиллированной до 100 мл
Навеску индикатора растирают в ступке, прибавляя небольшими
порциями едкий натр. Полученный раствор переносят в мерную колбу
вместимостью 100 мл и доводят объем раствора водой до метки.
Хранят во флаконе нейтрального светозащитного стекла при
температуре от 4 до 10 град. С.
Малахитовый зеленый - 0,5% раствор:
малахитового зеленого 0,5 г
воды дистиллированной до 100 мл
Навеску красителя переносят в стеклянный флакон, прибавляют
стерильную горячую воду, помещают на сутки в термостат,
периодически встряхивая.
Реактив Грисса. Раствор N 1: 0,5 г сульфаниловой кислоты
растворяют в 30 мл ледяной уксусной кислоты, прибавляют 100 мл
воды, фильтруют. Раствор годен в течение месяца.
Раствор N 2: 0,1 г 1-нафтиламина растворяют в 100 мл кипящей
воды, охлаждают, прибавляют 30 мл ледяной уксусной кислоты,
фильтруют. Раствор годен в течение 7 сут.
Перед употреблением смешивают равные объемы растворов N 1 и
N 2.
Реактив на цитохромоксидазу. Раствор N 1: 1% спиртовой раствор
нафтола-1.
Раствор N 2: 1% раствор N, N - диметил - р - фенилендиамина
дигидрохлорида.
Перед употреблением смешивают растворы N 1 и N 2 в соотношении
2:3.
Растворы годны в течение 14 сут при хранении при температуре
от 4 до 10 град. С во флаконах нейтрального светозащитного стекла.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ АНТИМИКРОБНОЙ АКТИВНОСТИ
АНТИБИОТИКОВ МЕТОДОМ ДИФФУЗИИ В АГАР
Определение антимикробной активности антибиотиков основано на
их способности угнетать рост микроорганизмов. Определение проводят
методом диффузии в агар на плотной питательной среде путем
сравнения размеров зон угнетения роста тест - микробов,
образующихся при испытании растворов определенных концентраций
Государственного стандартного образца <*> и испытуемого препарата.
--------------------------------
<*> Далее "стандартный образец" следует читать
"Государственный стандартный образец".
Антимикробная активность антибиотиков выражается в единицах
действия - ЕД или "мгк". Для большинства антибиотиков 1 ЕД или
"мкг" соответствуют 1 мкг активного вещества (кислоты или
основания); для антибиотиков, имеющих иное количественное
выражение единицы, соответствующие указания даются в частных
статьях.
При определении антимикробной активности антибиотиков
используют стандартные образцы, активность которых, как правило,
устанавливают в соответствии с Международными биологическими
стандартами. При отсутствии последних для указанных целей могут
быть использованы международные химические стандарты,
антимикробную активность которых рассчитывают на основании
показателей качества, установленных физико - химическими методами.
Антимикробную активность стандартных образцов антибиотиков, не
имеющих аналогов в международной коллекции стандартов,
рассчитывают также на основании показателей качества,
установленных физико - химическими методами.
Стандартные образцы антибиотиков утверждаются и рассылаются
Государственным научно - исследовательским институтом по
стандартизации и контролю лекарственных средств Минздрава СССР,
хранятся и используются в соответствии с рекомендациями,
указанными на этикетке стандартного образца.
Метод определения. Тест - микробы, растворители, буферные
растворы, питательные среды и прочие условия проведения испытания
указаны в табл. 18.
В чашки Петри (стеклянные или пластмассовые), установленные на
столиках со строго горизонтальной поверхностью, разливают
расплавленные питательные среды определенного состава в один или
два слоя. Для нижнего слоя используют незасеянные среды, для
верхнего или одного слоя - агаровую среду, предварительно
засеянную соответствующим тест - микробом. Если культура
представляет собой суспензию вегетативных клеток, то температура
расплавленной среды, в которую вносят тест - микроб, должна быть
(49 +/-1) град. С, при использовании суспензии спор - 65-70 град.
С. К среде следует добавить такое количество суспензии
вегетативных клеток или спор, которое обеспечивает оптимальный
рост тест - микроба и четкость зон угнетения его роста.
Таблица 18
Характеристика культуральных свойств тест - микроба
-----------------T------------------------------T----------------------------T----------------------¬
¦ ¦ При росте на плотной ¦ При росте на жидкой ¦ ¦
¦ Название ¦ питательной среде ¦ питательной среде ¦ При микроскопическом ¦
¦ тест - микроба +-----------T------------------+----------T-----------------+ изучении мазка ¦
¦ ¦ условия ¦описание культуры ¦ условия ¦описание культуры¦ агаровой культуры, ¦
¦ ¦выращивания¦ ¦выращива- ¦ ¦ окрашенной по Граму ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ния ¦ ¦ ¦
+----------------+-----------+------------------+----------+-----------------+----------------------+
¦Staphylococcus ¦Среда N 1,¦Гладкие с ровными¦Мясо - ¦Равномерное по-¦Однородные по величине¦
¦aureus 209 Р ¦Т град.¦краями колонии, с¦пептонный ¦мутнение бульона¦и расположению в виде ¦
¦ ¦(36 +/-1)¦равномерной золо-¦бульон, ¦без пленки и сли-¦гроздьев кокки с хоро-¦
¦ ¦град. С,¦тистой пигмента-¦рН 7,2-7,4¦зистого осадка на¦шо выраженной грампо-¦
¦ ¦18 - 20 ч ¦цией ¦18-20 ч ¦дне ¦ложительной окраской ¦
¦ ¦затем при¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦комнатной ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦температуре¦ ¦ ¦ ¦ ¦
|
