|
Стр. 2
это значит, что в исследованной сыворотке содержатся только
неполные антитела.
Если положительная реакция выявилась при непрямой пробе Кумбса
(или в реакции с применением желатина или полиглюкина) и
одновременно в реакции солевой агглютинации, это значит, что в
сыворотке содержатся как неполные, так и полные антитела. Полные
антитела могут быть тепловыми, тогда положительный результат
выявится при температуре 37° С, или холодовыми, давшими
положительный результат при 20° С или 4° С.
Если сыворотка дала положительный результат только в реакции
солевой агглютинации в пробирках, это значит, что она содержит
только полные антитела - тепловые или холодовые (в зависимости от
того, при какой температуре выявилась агглютинация).
Если агглютинация эритроцитов не наблюдается ни в одной из
этих проб, это говорит об отсутствии как полных, так и неполных
изоиммунных антител к антигенам, содержащимся в стандартных
эритроцитах, которые были использованы при этом исследовании.
Специфичность антител устанавливается в зависимости от
результатов реакции со стандартными эритроцитами, содержащими
разные антигены. Это заключение необходимо сделать для полных и
неполных антител в отдельности.
Большую роль при определении специфичности антител может
сыграть определение антигенной структуры эритроцитов самого
больного. Если такое исследование было возможным, то это очень
облегчит решение вопроса о специфичности антител, так как у
больного могут быть антитела только к тем антигенам, которые не
содержатся в его собственной крови.
Неполные антитела в одной и той же сыворотке могут иметь как
одну, так и различную специфичность.
При одновременном присутствии в сыворотке неполных и полных
антител они также могут быть одной или различной
специфичности.
Полные антитела большей частью бывают моноспецифичными.
Таким образом, исследование сыворотки больного с применением
разных методов при наличии стандартных эритроцитов, типированных
по различным изоантигенам, позволяет решить вопрос о характере
иммунизации.
Если у больного выявлены изоиммунные антитела, то, зная их
специфичность, можно обеспечить совместимость при переливании
крови специальным выбором донора (см. п. 6).
Если у больного выявлены антитела, но определить их
специфичность невозможно, например, из-за недостаточного набора
стандартных эритроцитов, совместимость переливаемой крови можно
обеспечить индивидуальным подбором донора (см. п. 7).
6. Специальный выбор донора.
Специальный выбор донора (донорской крови) производится на СПК
или ОПК в тех случаях, когда установлена форма и специфичность
имеющихся у больного антител, а на СПК или ОПК имеются доноры,
типированные по этим антигенам. Выбор производится из числа лиц
одногруппных по системе АВО и резус-принадлежности.
Если предполагается переливать эритроциты, освобожденные от
плазмы, можно использовать также и разногруппную кровь, но
совместимую в отношении эритроцитов донора.
В этих случаях эритроциты группы 0(I) можно переливать
реципиентам любой группы, а реципиентам группы АВ (IV) -
эритроциты любой группы крови, но в обоих случаях одноименные по
резус-принадлежности.
Далее выбираются доноры, не содержащие в крови антигенов,
против которых у больного обнаружены антитела. После такого
специального выбора донора, эритроциты которого не содержат
антигенов, против которых у больного выявлены изоиммунные
антитела, кровь этого донора следует проверить в пробах на
совместимость с сывороткой больного с обязательным включением того
метода, в котором оказались активными антитела больного. Затем,
при благоприятном результате этих исследований, от донора
заготавливается кровь (или берется кровь, заготовленная от него
ранее) и передается в лечебное учреждение специально для этого
больного.
Несмотря на специальный выбор крови, врач должен перед
трансфузией провести все контрольные исследования, предусмотренные
в разделе 1, 9 и только после этого он может приступить к
переливанию крови, начав его с биологической пробы.
В тех случаях, когда СПК или ОПК не располагают кровью
доноров, типированных как необходимо для конкретного больного,
подбор крови такому сенсибилизированному больному следует
проводить индивидуально.
7. Индивидуальный подбор донора.
Индивидуальный подбор донора (донорской крови) производится по
следующим показаниям:
а) в тех случаях, когда трансфузиолог обнаружил
несовместимость в пробах по группам крови АВО или резус-антигену и
контрольная проверка исключает ошибки в отношении этих антигенов
и если при этом состояние больного позволяет отложить трансфузию,
чтобы дополнительно исследовать кровь на изоиммунные антитела.
Подбор осуществляют, используя ту же реакцию, с помощью
которой обнаружены антитела. Если агглютинация наблюдалась при
проведении пробы на совместимость по группам крови АВО, то подбор
крови следует вести на плоскости при комнатной температуре. Если
агглютинация наблюдалась при проведении пробы на совместимость по
резус-антигену D, то подбор следует проводить, используя непрямую
пробу Кумбса или реакции с использованием коллоидов (разделы IV,
V).
Когда будет подобрана кровь, не дающая агглютинации с
сывороткой больного, следует провести с ней все другие реакции,
предусмотренные при переливании. В тех случаях, когда для
переливания подбиралась кровь из флакончиков-спутников, врач
должен повторить все исследования, взяв кровь непосредственно из
контейнера, подготовленного для трансфузии. При отсутствии
признаков несовместимости врач может приступить к переливанию
крови, начав его с биологической пробы.
Следует учесть, что если несовместимость выявлена только по
группам крови АВО, а контрольные пробы исключают ошибку по этим
антигенам, то это чаще всего бывает за счет антител анти-М или
анти-N и подобрать совместимую кровь в этих случаях удается обычно
уже среди 5-6 образцов. Если несовместимость выявилась из-за
наличия неполных антител, подбор может оказаться более трудным,
но все же, если трансфузия срочная, можно попытаться найти
совместимую кровь.
б) индивидуальный подбор проводится также в тех случаях, когда
определены наличие и специфичность изоиммунных антител в крови
больного, но СПК и ОПК не имеет возможности специально выбрать
кровь из-за отсутствия типированного донора с подходящей для
данного больного антигенной структурой. Подбор в этих случаях
проводится с кровью, взятой из флакончиков-спутников, или с
кровью, полученной непосредственно у доноров из пальца. Начинать
подбор следует, используя ту реакцию, в которой оказались
активными изоиммунные антитела. Если выявлены полные антитела, то
следует учитывать и температуру, при которой они оказались
активными.
Вероятность нахождения совместимой крови в таких случаях
зависит от специфичности антител. При антителах с или е подбор
следует вести из числа резус-положительных доноров. При этом
обычно удается довольно быстро найти с-отрицательную кровь (16%),
но значительно труднее е-отрицательную ввиду редкой встречаемости
лиц, не содержащих этого фактора (2,5%).
Большая или меньшая трудность подбора крови при антителах
другой специфичности будет зависеть также от частоты факторов, к
которым направлены антитела. Особенно затруднен подбор бывает при
наличии антител к фактору Челлано, выявленному у 99,85% лиц, а
также в случае сочетания антител разной специфичности.
После такого индивидуального подбора кровь, заготовленная от
доноров, передается в лечебное учреждение для переливания данному
больному.
в) индивидуальный подбор крови донора следует проводить также
в тех случаях, когда у больного выявлены изоиммунные антитела, но
не установлена их специфичность. Это может быть связано с
ограниченностью на СПК (ОПК) образцов стандартных эритроцитов,
типированных по изосерологическим системам, а также, возможно, с
наличием в крови больного антител к неизвестному до этого времени
антигену. Подбор в таких случаях следует проводить, используя
кровь из флакончиков-спутников или кровь, полученную
непосредственно у донора из пальца, начиная его той же реакцией, с
помощью которой оказались активными антитела больного. В таких
случаях решить заранее вопрос, среди каких доноров легче подобрать
кровь, бывает трудно. После такого индивидуального подбора кровь
передается в лечебное учреждение для переливания данному больному.
8. Использование подобранной крови.
Как специальный, так и индивидуальный подбор крови,
производимой на СПК (ОПК), является предварительной процедурой.
Врач-трансфузиолог, получив флакон с кровью, должен во избежание
ошибки сверить паспортные данные на флаконе с данными о крови
больного в истории болезни, произвести контрольные реакции -
определение группы крови больного и донора и пробы на
совместимость. При совпадении группы крови и резус-принадлежности
больного и донора и отсутствии агглютинации в пробах на
совместимость, врач может приступить к переливанию крови, начав
его с биологической пробы.
9. Особенности пробы на совместимость у больных с
гемотрансфузионными осложнениями.
У больных, перенесших гемотрансфузионное осложнение,
происходят характерные серологических сдвиги, заключающиеся в том,
что в период до 10-20-го дня идет нарастание сенсибилизации,
выражающееся в повышении титра антител, послуживших причиной
осложнения, и в появлении антител другой специфичности. После
20-го дня начинается постепенное снижение титра антител и
исчезновение их в порядке, обратном появлению. Поэтому таким
больным в период нарастания сенсибилизации пробу на совместимость
следует проводить с сывороткой, полученной от них непосредственно
в день проведения трансфузии крови или не далее чем накануне. При
переливании крови после 20-го дня, кроме этой пробы, желательно
дополнительно проводить пробу на совместимость с порцией
сыворотки, заготовленной на высоте сенсибилизации (10-20-й день).
Это дает возможность предупредить переливание больному крови,
содержащей антиген, против которого у него совсем недавно имелись
антитела.
VIII. ЗАПИСИ О ВЫБОРЕ КРОВИ И
ПРОВЕДЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЯХ
Врач, переливающий кровь, обязан записать в истории болезни:
1) паспортные данные с каждого контейнера с кровью - фамилию и
инициалы донора, группу крови, резус-принадлежность, номер
контейнера и дату заготовки крови;
2) результат контрольной проверки групповой принадлежности
крови больного;
3) результат контрольной проверки групповой принадлежности
крови донора, взятой из контейнера;
4) результат пробы на совместимость по группам крови АВО;
5) метод и результат пробы на совместимость по резус-антигену
D.
Записи скрепляются подписью врача.
IX. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Самыми важными показателями, позволяющими судить о
совместимости переливаемой крови (эритроцитов) являются
совместимость по группе крови системы АВО и совместимость по
резус-антигену D.
Для обеспечения совместимости переливаемой крови необходимо на
основании определения группы крови реципиента и записи в истории
болезни, а также документации на контейнере с кровью, правильно
выбрать кровь в отношении групп крови системы АВО и
резус-принадлежности (см.раздел I, п.п. 6,7).
Непосредственно перед переливанием крови, независимо от
проведенных ранее исследований и имеющихся записей, врач обязан
снова проверить групповую принадлежность реципиента и крови донора
(раздел I. 9), сделать пробу на совместимость по группам крови АВО
(раздел III) и одну из проб на совместимость по резус-антигену D
(разделы IV, V, VI, VII).
Врач должен предусмотреть возможную несовместимость
по отношению к другим антигенам и принять меры для ее
предупреждения.
Если кровь (эритроциты) донора оказалась несовместимой с
кровью реципиента в пробе на совместимость по группам АВО или в
пробе на совместимость по резус-антигену D, она не должна быть ему
перелита!
Если кровь (эритроциты) донора оказалась совместимой с кровью
реципиента в пробах на совместимость по группам крови АВО и
резус-антигену D и нет указаний на несовместимость по отношению к
другим антигенам - кровь (эритроциты) может быть перелита.
Переливание начинается с биологической пробы.
Ответственным за выполнение перечисленных требований и
обеспечение совместимости при переливании крови является
врач-специалист, переливающий кровь.
"Инструкцию по предупреждению несовместимости при переливании
крови", утвержденную Министерством здравоохранения СССР 05 декабря
1990 года N 05-14/37-14, считать утратившей силу с момента
утверждения данной инструкции.
Начальник Управления
организации медицинской
помощи населению
Минздрава РФ
А.И.ВЯЛКОВ
Приложение N 2
УТВЕРЖДЕНО
Приказ Минздрава России
от 09.01.1998 г. N 2
ИНСТРУКЦИЯ
ПО ИЗГОТОВЛЕНИЮ СТАНДАРТНЫХ ИЗОГЕМАГГЛЮТИНИРУЮЩИХ
СЫВОРОТОК ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГРУПП КРОВИ СИСТЕМЫ АВО
Стандартными изогемагглютинирующими сыворотками являются
сыворотки, приготовленные из крови людей и некоторых других
жидкостей, содержащие групповые антитела (агглютинины). Сыворотки
предназначаются для определения групповой принадлежности крови
людей по системе АВО.
Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки представляют собой
прозрачную жидкость, окрашенную в соответствии с групповой
принадлежностью, и расфасованную в ампулы или флаконы. На этикетке
указывают названия учреждения, изготовившего сыворотку,
специфичность, титр агглютининов и срок годности.
I. ИСТОЧНИКИ ПОЛУЧЕНИЯ СЫВОРОТОК
Источниками получения стандартных сывороток служат:
а) кровь, заготовленная без консерванта от донора,
предварительно обследованного и содержащего в крови групповые
антитела с титром, достаточным для изготовления стандартных
сывороток;
б) плазма, полученная при проведении плазмафереза или
отделенная из донорской крови, по каким-либо причинам не
использованная для лечебных целей и содержащая групповые антитела
с титром, достаточным для изготовления стандартных сывороток;
в) дополнительный источник - плевральный транссудат,
асцитическая жидкость, если в них содержатся групповые антитела с
титром, достаточным для изготовления стандартных сывороток.
II. УСЛОВИЯ ПРИГОДНОСТИ СТАНДАРТНОЙ
ИЗОГЕМАГГЛЮТИНИРУЮЩЕЙ СЫВОРОТКИ
К стандартной изогемагглютинирующей сыворотке предъявляются
следующие требования:
а) сыворотка должна быть специфичной, то есть содержать
определенные групповые антитела - альфа (анти-А), бета (анти-В)
или оба антитела вместе, и не вызывать неспецифической
агглютинации эритроцитов одноименной группы и группы 0(I).
Сыворотка группы АВ (IV), не содержащая групповых агглютининов, не
должна вызывать агглютинации;
б) должна быть активной, что выражается в наступлении первых
признаков агглютинации со стандартными эритроцитами групп А1 и В
в течение первых 30 секунд и со стандартными эритроцитами группы
А2 в течение первой минуты и титром агглютининов по отношению к
эритроцитам групп А1 и В не ниже, чем 1:32 и группы А2 - не ниже,
чем 1:16;
в) не должна оказывать на эритроциты гемолизирующего действия;
г) должна быть прозрачной. Допускается небольшая опалесценция,
что не влияет на качество сыворотки;
д) должна быть окрашена: группа А (II) в светло-синий цвет,
группа В (III) - в красный цвет, группа АВ (IV) - в желтый цвет.
е) должна быть предохранена от инфицирования прибавлением
консервирующих средств;
ж) должна иметь точную паспортизацию, т. е. обозначение
групповой принадлежности, титра, срока годности, номера серии и
наименования учреждения, ее изготовившего. Все эти сведения должны
быть обозначены на этикетке, наклеиваемой на флакон (ампулу) со
стандартной сывороткой, а также внесены в "Журнал регистрации
изготовленной стандартной сыворотки", в который записывают также
сведения о дате изготовления сыворотки и результатах контрольных
проверок ее качества.
III. ОСНОВНЫЕ ЭТАПЫ РАБОТЫ ПО ПРИГОТОВЛЕНИЮ
СТАНДАРТНОЙ ИЗОГЕМАГГЛЮТИНИРУЮЩЕЙ СЫВОРОТКИ
1. Предварительное определение пригодности крови донора для
изготовления из нее стандартной изогемагглютинирующей сыворотки
путем взятия от него крови и отделения от нее сыворотки или путем
получения плазмы с помощью проведения плазмафереза. Исследования
производятся заранее в пробной порции крови, полученной
непосредственно от донора в небольшом количестве.
2. Взятие крови от донора, отделение от нее сыворотки или
получение плазмы от донора при помощи плазмафереза.
3. Предварительное определение пригодности плазмы,
предполагаемой для передачи в сывороточное отделение для
изготовления из нее стандартной изогемагглютинирующей сыворотки.
4. Обработка плазмы для получения из нее сыворотки.
5. Сбор остатков крови из флакончиков(пробирок)- спутников в
общую емкость, отделение от нее сыворотки (плазмы) и
предварительное определение пригодности для изготовления
стандартной изогемагглютинирующей сыворотки.
6. Получение в лечебных учреждениях асцитической жидкости,
плеврального транссудата, освобождение их от сгустков фибрина и
предварительное определение пригодности этого материала для
изготовления из него стандартной изогемагглютинирующей сыворотки.
7. Определение пригодности сыворотки, плазмы для изготовления
из нее стандартной изогемагглютинирующей сыворотки, включающее:
а) определение групповой принадлежности сыворотки (групповых
агглютининов);
б) определение способности сыворотки вызывать неспецифическую
агглютинацию;
в) определение гемолизирующих свойств сыворотки;
г) определение активности сыворотки;
д) скорость наступления агглютинации;
е) титр агглютининов.
8. Предварительное заключение о пригодности сыворотки.
9. Консервирование сыворотки.
10. Первый контроль сыворотки до розлива.
11. Второй контроль сыворотки до розлива.
12. Фильтрование сыворотки.
13. Окрашивание сыворотки.
14. Окончательное заключение о пригодности сыворотки.
15. Розлив сыворотки.
16. Паспортизация разлитой сыворотки.
17. Контроль разлитой сыворотки.
IV. МЕТОДЫ СЕРОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ
1. Определение групповой принадлежности сыворотки при помощи
стандартных эритроцитов.
Определение производится на белой фарфоровой или любой другой
белой пластинке со смачиваемой поверхностью, на которой
надписываются обозначения: слева "О", в середине "А" и справа "В".
Соответственно каждому обозначению на пластинку наносят по одной
маленькой капле (0,01 мл) стандартных эритроцитов групп 0(I),
А(II), и В (III). На каждую каплю эритроцитов капают одну большую
каплю (0,1 мл) испытуемой сыворотки с тем, чтобы соотношение
количества эритроцитов и сыворотки было приблизительно 1:10.
Эритроциты перемешивают с сывороткой сухой стеклянной палочкой,
пластинку слегка покачивают, затем на 1-2 минуты оставляют в
покое, потом снова покачивают и одновременно наблюдают результат.
Наблюдение проводят в течение 5 минут. Через 3-5 минут в каждую
каплю, в которой наступила агглютинация, добавляют 1 каплю (0,1
мл) изотонического раствора NaCl и снова покачивают пластинку.
Результат учитывают по наличию или отсутствию агглютинации в
каждой капле. При этом возможны четыре варианта:
- агглютинация наступила с эритроцитами групп А(II) и В (III),
но отсутствует с эритроцитами группы 0(I). Это указывает на
наличие в испытуемой сыворотке двух агглютининов альфа (анти-А) и
бета (анти-В), т.е. на принадлежность испытуемой сыворотки к
группе О альфа бета(I);
- агглютинация наступила с эритроцитами группы В(III) и
отсутствует с эритроцитами групп О(I) и А(II). Это указывает на
наличие в испытуемой сыворотке только агглютинина бета (анти-В),
т.е. на принадлежность испытуемой сыворотки к группе А бета(II);
- агглютинация наступила с эритроцитами группы А(II) и
отсутствует с эритроцитами групп О(I) и В(III). Это указывает на
наличие в испытуемой сыворотке только агглютинина альфа (анти-А),
т.е. на принадлежность испытуемой сыворотки к группе В альфа(III);
- агглютинация отсутствует с эритроцитами всех трех групп. Это
указывает на отсутствие групповых агглютининов, т.е. на
принадлежность испытуемой сыворотки к группе АВ (IV).
2. Определение способности сыворотки вызывать неспецифическую
агглютинацию.
Эти исследования можно проводить одновременно с определением
групповой принадлежности при помощи стандартных эритроцитов.
Дополнительно в исследование включают 6-8 образцов эритроцитов
группы О(I) и одногруппных с исследуемой сывороткой.
Наблюдение результатов с эритроцитами одноименной группы и
группы О(I) проводят до 20 минут.
Если испытуемая сыворотка вызывает агглютинацию эритроцитов
одноименной группы и группы О(I), это значит, что она обладает
свойством вызывать неспецифическую агглютинацию. В этих случаях
учитывают скорость ее наступления и интенсивность.
3. Определение гемолизирующих свойств сыворотки.
Гемолизирующие свойства сыворотки выявляются одновременно с
определением групповой принадлежности при помощи стандартных
эритроцитов. Если при смешивании с эритроцитами сыворотка вызывает
их гемолиз, значит сыворотка обладает гемолизирующими свойствами.
4. Определение скорости наступления агглютинации.
Скорость наступления агглютинации определяют так же, как
групповую принадлежность - при помощи стандартных эритроцитов, но
с дополнительным включением в реакцию стандартных эритроцитов
группы А2. Скорость наступления агглютинации учитывают с помощью
секундомера от момента перемешивания сыворотки с эритроцитами до
момента наступления первых признаков агглютинации отдельно по
отношению к эритроцитам групп А1, А2 и В.
5. Определение титра агглютининов.
Для определения титра агглютининов в исследуемой сыворотке
приготавливают разведения ее в изотоническом растворе NaCl. Для
этого в штатив ставят 10 пробирок и в каждую из них вносят
градуированной пипеткой по 1 мл изотонического раствор NaCl. Затем
в первую пробирку той же пипеткой добавляют 1 мл испытуемой
сыворотки и перемешивают ее с изотоническим раствором путем
встряхивания пробирки. Из этой пробирки 1 мл смеси переносят во
вторую и снова перемешивают и так до последней пробирки. В
результате в пробирках образуются разведения сыворотки от 1:2 до
1:1024.
Непосредственно на пластинке можно приготовить разведения
сыворотки в арифметической прогрессии. Для этого следует сделать в
пробирке первое исходное разведение (любое).
Например, к одной капле сыворотки добавить 15 капель
изотонического раствора хлорида натрия, получив таким образом
разведение 1:16. Эту разведенную сыворотку нанести в 6
пронумерованных точек на пластику: в первую точку 2 капли, во
вторую, третью и все последующие - по 1 капле. Затем добавить
изотонический раствор: во вторую точку 1 каплю, в третью - 2
капли, в четвертую - 3 капли, в пятую - 4 капли, в шестую - 5
капель. Капли перемешивают стеклянной палочкой, начиная с
последней точки в направлении к первой. Так получают разведения
сыворотки на пластинке: 1:16, 1:32, 1:48, 1:64, 1, 1:96.
При определении титра агглютинина альфа2 по отношению к
эритроцитам А2 приготавливают дополнительно промежуточное
разведение сыворотки 1:24.
Разведения сыворотки можно приготовить, отмеряя сыворотку и
изотонический раствор NaCl каплями, для чего используют одну и ту
же пипетку.
На пробирках отмечают степень разведения сыворотки. Далее 0,1
мл (одну большую каплю) каждого разведения сыворотки переносят на
пластинку, предварительно надписав на ней обозначения степени
разведения сыворотки 1:2, 1:4 и т.д. до 1:1024.
Разведения сыворотки можно приготавливать также
непосредственно на пластинке. Для этого в десять пронумерованных
точек наносят по одной большой капле (0,1 мл) изотонического
раствора NaCl, в первую точку добавляют одну каплю (0,1 мл)
испытуемой сыворотки, перемешивают капли, затем той же пипеткой
переносят одну каплю смеси во вторую точку и т.д. до десятой,
получая таким образом разведения сыворотки от 1:2 до 1:1024.
На пластинку рядом с каждой каплей разведенной сыворотки
наносят маленькую каплю (0,01 мл) стандартных эритроцитов
соответствующей группы, т.е. эритроциты А, и А2, когда титруют
агглютинины альфа и эритроциты группы В, когда титруют агглютинины
бета. Соотношение эритроцитов и сыворотки должно быть 1:10.
Каждую каплю стандартных эритроцитов тщательно перемешивают с
сывороткой сухой стеклянной палочкой, после чего пластинку
покачивают, затем оставляют на 1-1,5 минуты в покое, снова
покачивают и одновременно наблюдают результат в течение 5 минут.
Наибольшее разведение сыворотки, в котором наступила
агглютинация стандартных эритроцитов до истечения 5 минут,
принимают за титр агглютининов в этой сыворотке.
V. ПРЕДВАРИТЕЛЬНОЕ ЗАКЛЮЧЕНИЕ О ПРИГОДНОСТИ КРОВИ
ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ИЗ НЕЕ СТАНДАРТНОЙ СЫВОРОТКИ
Основным показателем пригодности крови донора для изготовления
из нее стандартной сыворотки является ее активность, т.е. скорость
наступления агглютинации и титр агглютининов.
Скорость наступления агглютинации должна быть не более чем 30
секунд с эритроцитами групп А1 и В и не более 1 минуты с
эритроцитами группы А2.
Титр сыворотки должен быть: для агглютинина альфа не ниже, чем
1:32 по отношению к эритроцитам А1, не ниже, чем 1:16 по отношению
к эритроцитам А2 и для агглютинина бета не ниже, чем 1:32 к
эритроцитам В.
При предварительном исследовании непосредственно взятой
пробной порции крови титр агглютининов должен быть, хотя бы на
одно разведение выше, ввиду возможного его падения в процессе
обработки и консервирования основной порции крови.
Одновременно следует учитывать, не вызывает ли сыворотка крови
неспецифической агглютинации или гемолиза эритроцитов.
Если сыворотка вызывает слабую неспецифическую агглютинацию
эритроцитов, позднее, чем через 2 минуты, то это не является
противопоказанием к использованию этой крови, так как эти свойства
при дальнейшей обработке сыворотки обычно исчезают.
Если сыворотка вызывает неспецифическую агглютинацию ранее 2
минут, то брать у донора кровь для приготовления стандартной
сыворотки не следует.
Гемолизирующих свойств крови у доноров обычно на наблюдается,
но если это имеет место, то брать кровь у донора не следует.
В этом случае так же, как и при выраженной неспецифической
реакции, донора следует подвергнуть дополнительному медицинскому
обследованию.
Доноров, кровь которых соответствует требованиям,
предъявляемым к стандартным сывороткам, следует брать на особый
учет с целью дальнейшего использования их крови для изготовления
стандартных сывороток.
VI. ВЗЯТИЕ КРОВИ У ДОНОРА И ОТДЕЛЕНИЕ ОТ НЕЕ СЫВОРОТКИ
Кровь у донора берут из вены в сухой стерильный сосуд. Через
15-30 минут сосуд с кровью встряхивают для отделения свертка от
стенки и затем помещают на сутки в холодильник при 4-8° С.
Отделившуюся за это время сыворотку отсасывают или сливают в
другой сосуд, а сосуд со свертком оставляют еще на одни сутки при
4-8° С. Обычно через одни сутки из свертка отделяется еще
некоторое количество сыворотки, которую присоединяют в первой
порции. Сыворотку консервируют борной кислотой из расчета 2-3 г на
100 мл сыворотки, или азидом натрия из расчета 1 г на 1 мл
сыворотки.
Для ускорения свертывания крови сосуд можно поставить сначала
на один час в термостат, а затем в холодильник.
Паспортизация. На сосуде с кровью, а затем с сывороткой
надписывают паспортные данные, т.е. фамилию, имя и отчество
донора, групповую принадлежность, дату взятия крови, количество
крови и полученной из нее сыворотки, а также результат
исследования пробной порции крови. Эти же сведения записывают в
"Журнал регистрации материала, поступающего для изготовления
стандартной сыворотки" (Дальнейшая обработка см. пункт IX).
Получение сыворотки из крови, оставшейся во флакончиках
(пробирках) - спутниках после взятия ее у доноров.
Для изготовления сыворотки может быть использована кровь из
флакончиков (пробирок) - спутников. Для этого остатки крови
сливают (каждую группу отдельно) в сухие флаконы. На флаконе
надписывают группу крови и дату заготовки.
VII. ПОЛУЧЕНИЕ СЫВОРОТКИ ИЗ ПЛАЗМЫ
При получении сыворотки из плазмы из последней удаляется
фибрин. Это можно осуществить несколькими способами.
1. К плазме прибавляют раствор хлорида кальция из расчета 3 мл
20% или 6 мл 10% на 100 мл плазмы. Через 30-40 минут во флаконе
образуется сверток. Если сверток пристал к стенке, то флакон
следует встряхнуть, чтобы сверток отделился. Флакон с содержимым
оставляют на двое суток в холодильнике, после чего отделившуюся
сыворотку переливают через воронку с марлей в другой флакон.
Сыворотку консервируют и на флакон переносят паспортные данные.
Иногда во флаконе с сывороткой через некоторое время снова
выпадает сверток фибрина; в этих случаях сыворотку еще раз
переливают через воронку с марлей (с тканью) в другой флакон.
2. К плазме добавляют равный объем одногруппной сыворотки с
титром антител не ниже 1:32. Содержимое флакона перемешивают,
оставляют на одни сутки при комнатной температуре и затем помещают
в холодильник на 10-14 дней. На паспорте флакона дописывают
сведения о дате и количестве добавленной сыворотки.
За 10-14 дней образуется плотный сверток фибрина и, кроме
того, может исчезнуть свойство вызывать гемолиз или
неспецифическую агглютинацию эритроцитов.
Отделившуюся сыворотку сливают в другой флакон через воронку с
тканью, сыворотку консервируют, на флакон наносят паспортные
данные.
Паспортизация. Паспортные записи о плазме переносят с флакона
на флакон по мере отделения сыворотки. К ним добавляют запись о
дате получения сыворотки. Те же сведения записывают в "Журнал
регистрации материала, поступающего для изготовления стандартной
сыворотки системы АВО".
Дальнейшая обработка сыворотки (см. пункт IX).
VIII. ПОЛУЧЕНИЕ СЫВОРОТКИ ИЗ ПЛЕВРАЛЬНОГО ТРАНССУДАТА
И АСЦИТИЧЕСКОЙ ЖИДКОСТИ
В тех случаях, когда в процессе лечения больному делается
пункция грудной или брюшной полости с целью удаления жидкости,
последнюю можно использовать для изготовления стандартной
сыворотки. Для этого жидкость собирают в чистую посуду. По
доставлении в лабораторию жидкость переливают во флакон через
воронку с марлей или тканью для отделения свертка (если он
имеется) и консервируют борной кислотой или азидом натрия, как
указано выше.
Паспортизация. На флаконе надписывают сведения о том, из чего
сыворотка приготовлена, и дату. Те же сведения записывают в
"Журнал регистрации материала, поступившего для изготовления
стандартной сыворотки системы АВО".
IX. ДАЛЬНЕЙШАЯ ОБРАБОТКА И ПРЕДВАРИТЕЛЬНОЕ ЗАКЛЮЧЕНИЕ
О ПРИГОДНОСТИ СЫВОРОТКИ, ПОЛУЧЕННОЙ ИЗ ЛЮБЫХ
ИСТОЧНИКОВ
1. Серологические исследования.
В сыворотке определяют:
а) групповую принадлежность (групповые агглютинины);
б) гемолизирующие свойства;
в) способность вызывать неспецифическую агглютинацию;
г) активность, т.е. скорость наступления агглютинации и ее
выраженность;
д) титр агглютининов.
Методы исследования (см. пункт IV).
На основании этих исследований делают предварительное
заключение о пригодности сыворотки. Основными показателями
являются скорость наступления агглютинации и титр антител.
2. Сыворотку предварительно считают пригодной, если она
вызывает агглютинацию эритроцитов групп А1 и В не позднее, чем
через 30 секунд, а эритроцитов группы А2 не позднее, чем через 1
минуту и если титр агглютининов в ней не ниже, чем 1:32 по
отношению к эритроцитам групп А1 и В, и не ниже, чем 1:16 по
отношению к эритроцитам группы А2.
При этом также следят за тем, чтобы сыворотка не имела красной
или бурой окраски.
Если агглютинация наступает позднее или титр агглютининов
ниже, сыворотку считают непригодной.
Наличие неспецифической агглютинации или гемолизирующих
свойств на этой стадии изготовления сыворотки не делает ее
непригодной, что позволяет сохранить до 1-го контроля (пункт XI).
3. Паспортизация. Результаты всех исследований, перечисленных
в этом разделе, записывают на флаконе с сывороткой и в "Журнал
регистрации материала, поступающего для изготовления стандартной
сыворотки".
X. КОНСЕРВИРОВАНИЕ СЫВОРОТКИ
Сыворотку, полученную из крови, взятой непосредственно у
донора, и сыворотку, полученную из любого другого источника и
признанную предварительно годной, консервируют.
Наиболее пригодным консервантом является борная кислота,
которую прибавляют из расчета 2-3 г на 100 мл сыворотки или азид
натрия 1 г на 1 мл.
После прибавления консерванта сыворотку оставляют на срок
10-12 дней. За этот срок в ней, с одной стороны, может снизиться
титр агглютининов, с другой - исчезнуть свойство вызывать гемолиз
или неспецифическую агглютинацию, если это имело место. Сыворотку,
имеющую высокий титр агглютининов, разрешается разводить
изотоническим раствором NaCl до титра не ниже 1:64 и
соответственно количеству разводителя добавляют борную кислоту или
азид натрия.
XI. ПЕРВЫЙ КОНТРОЛЬ СЫВОРОТКИ ДО РОЗЛИВА И ОЦЕНКА
ПРИГОДНОСТИ ЕЕ ДЛЯ ДАЛЬНЕЙШЕЙ ОБРАБОТКИ
1. Первый контроль производится через 10-12 дней после
поступления сыворотки, ее предварительного испытания и
консервирования. Он заключается в следующем:
а) проверяют правильность паспортизации сыворотки, т.е.
сверяют записи на флаконе и в журнале;
б) определяют групповую принадлежность при помощи стандартных
эритроцитов и результат сверяют с обозначением группы крови на
флаконе и в журнале;
в) одновременно с определением групповой принадлежности
проверяют способность сыворотки вызывать неспецифическую
агглютинацию и гемолиз эритроцитов;
г) проверяют, нет ли в сыворотке признаков инфицирования, не
помутнела и не потемнела ли она;
д) проверяют активность сыворотки, т.е. скорость наступления
агглютинации и титр агглютининов;
е) результаты всех исследований записывают на флаконе и в
журнал.
2. Заключение о пригодности сыворотки для дальнейшей обработки
делается при следующих условиях: если паспортные записи
произведены правильно, в сыворотке нет признаков инфицирования,
если она не помутнела, не потемнела и обладает достаточной
активностью.
Под достаточной активностью при первом контроле понимают
соответствие требованиям, указанным в разделе II, б при условии,
что титр не только соответствует этим требованиям, но и не
снизился более, чем на два разведения по сравнению с исходными
цифрами.
Если сыворотка отвечает этим условиям, ее считают пригодной
для дальнейшей обработки и оставляют еще на 10-12 дней, после чего
производят второй контроль (см. п. XIV).
При снижении титра более, чем на две ступени (даже если титр
сыворотки после снижения остался равным или выше, чем 1:32),
сыворотку считают непригодной.
При наличии признаков инфицирования, значительного потемнения
и помутнения сыворотку считают непригодной.
При первом контроле сыворотки явления неспецифической
агглютинации и гемолизирующие свойства наблюдаются редко, потому
что эти свойства обычно исчезают за время хранения сыворотки с
консервантом. Если эти свойства все же сохранились, это не делает
сыворотку непригодной для дальнейшей обработки, так как при
некоторых условиях они могут быть устранены в течение времени,
предшествующему второму контролю сыворотки.
XII. УСТРАНЕНИЕ СВОЙСТВА СЫВОРОТКИ ВЫЗЫВАТЬ
НЕСПЕЦИФИЧЕСКУЮ АГГЛЮТИНАЦИЮ
Устранение свойства сыворотки вызывать неспецифическую
агглютинацию может быть достигнуто путем разбавления ее
изотоническим раствором NaCl. Это допускается только для сыворотки
групп О(I), А(II) и В(III) и только при высоком титре агглютининов
в ней - не ниже, чем 1:64 - и при этом титре не более, чем
половинным объемом изотонического раствора по отношению к объему
сыворотки (с добавлением соответствующего количества борной
кислоты или азида натрия). Предварительно испытывают ряд пробных
разведений сыворотки, приготовленных в небольших количествах.
Наблюдение проводят в течение 20 мин. После подбора разведения,
устраняющего неспецифическую агглютинацию, разводят всю сыворотку.
Если разведение изотоническим раствором NaCl не устраняет
неспецифическую агглютинацию, сыворотку считают непригодной.
Разведение сыворотки группы АВ(IV) не допускается. Сыворотку,
вызывающую хотя бы незначительную неспецифическую агглютинацию,
считают непригодной.
XIII. УСТРАНЕНИЕ ГЕМОЛИЗИРУЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ СЫВОРОТКИ
Для устранения гемолизирующего действия сыворотки ее
прогревают при 56° С в течение одного часа. Если такое прогревание
не устраняет гемолизирующего действия, сыворотку считают
непригодной.
XIV. ВТОРОЙ КОНТРОЛЬ СЫВОРОТКИ ДО РОЗЛИВА И ОЦЕНКА ЕЕ
ПРИГОДНОСТИ ДЛЯ ДАЛЬНЕЙШЕЙ ОБРАБОТКИ
1. Второй контроль производят через 10-12 дней после первого
(приблизительно через 20-24 дня после начала обработки сыворотки)
и проводят так же, как первый контроль (см. раздел XI).
2. Заключение о пригодности сыворотки для дальнейшей
обработки делают при следующих условиях: если паспортные записи
сделаны правильно, сыворотка не инфицирована, не помутнела, не
потемнела, не вызывает неспецифической агглютинации и гемолиза
эритроцитов и достаточно активна.
Под достаточной активностью при втором контроле понимают
соответствие требованиям, указанным в разделе II, б, при условии,
что титр не только соответствует этим требованиям, но и не
снизился по сравнению с цифрами, полученными при первом контроле.
В других случаях сыворотку считают непригодной.
XV. СМЕШИВАНИЕ СЫВОРОТОК
Для максимального использования сырья и упрощения контроля за
образцами разлитой сыворотки допускается смешивание нескольких
порций одногруппных сывороток после второго контроля их, до
розлива (раздел XIX). Предварительно из каждой порции берут по 1-2
мл сыворотки и в смеси их определяют титр агглютининов. Затем титр
проверяют еще раз через 2-3 дня и, если он не изменился, то
смешивают основные сыворотки. Сыворотку-смесь обозначают новым
номером и ее снова испытывают, аналогично второму контролю (раздел
XIV).
XVI. ОКРАШИВАНИЕ СЫВОРОТКИ
Дополнительным условием, предупреждающим ошибки при
определении группы крови, является окрашивание сывороток.
Окрашивание можно производить до фильтрации, если
предполагается фильтровать сыворотку через бумажный фильтр. При
использовании фильтра Зейтца сыворотку окрашивают после
фильтрации.
Сыворотку группы А(II) окрашивают в синий (или сине-зеленый)
цвет,
сыворотку группы В (III) - в красный цвет,
сыворотку группы АВ (IV) - в желтый цвет (см. дополнение п.
XXX).
XVII. ФИЛЬТРОВАНИЕ СЫВОРОТКИ
Сыворотку, признанную пригодной, фильтруют. Сыворотку,
полученную из крови, взятой непосредственно у донора, обычно
достаточно профильтровать через бумажный фильтр. Сыворотку,
полученную из других источников, необходимо фильтровать через
фильтр Зейтца со стерилизующей прокладкой. Такое фильтрование
просветляет сыворотку и предупреждает развитие инфекции.
Немедленно после фильтрования сыворотку окрашивают (см. Дополнение
2).
XVIII. ОКОНЧАТЕЛЬНОЕ ЗАКЛЮЧЕНИЕ О ПРИГОДНОСТИ
СЫВОРОТКИ
Окончательное заключение о пригодности сыворотки делают после
ее фильтрования.
Сыворотку считают пригодной, если она:
а) специфична, т.е. содержит агглютинины альфа или бета, или
оба вместе и не вызывает неспецифической агглютинации эритроцитов;
б) активна, т.е. вызывает первые признаки агглютинации в
течение первых 30 секунд с эритроцитами групп А1 и В, и в течение
одной минуты с эритроцитами группы А2 и имеет титр агглютининов не
ниже, чем 1:32 по отношению к эритроцитам А1 и В и не ниже, чем
1:16 по отношению к эритроцитам А2.
Для окончательного заключения о пригодности сыворотки, кроме
абсолютной величины титра, принимают во внимание его динамику (см.
раздел XI, первый контроль и раздел XIV, второй контроль);
|
