|
Стр. 6
При наличии в составе среды мочевины (среда Олькеницкого и ее
модификации) окраска столбика среды не меняется в случаях
выделения энтеробактерий, гидролизующих мочевину (многие
представители родов Citrobacter, Klebsiella, Proteus, вида
Е. cloacae, кроме P. inconstans, Y. enterocolitica,
Y. pseudotuberculosis, иногда S. marcescens). В этих случаях
кислые продукты ферментации глюкозы нейтрализуются щелочными
продуктами гидролиза мочевины.
Особенности гидролиза мочевины клебсиеллами и иерсиниями не
всегда позволяют выявить этот признак при включении мочевины в
комбинированную среду. Более надежным для них является определение
уреазной активности в средах с мочевиной по Кристенсену или по
Преусу, для чего параллельно с посевом в комбинированную среду
делают посев в пробирку со средой Кристенсена.
Неизменная окраска столбика среды, не содержащей мочевины
(среда Клиглера), свидетельствует о выделении микробов, не
относящихся к семейству Enterobacteriaceae <*>.
--------------------------------
<*> - Для подтверждения такого заключения используют тест на
цитохромоксидазу (отрицательный у энтеробактерий), а при
необходимости и другие в соответствии с "Определителем Берги",
1980.
Кроме кислотообразования, по наличию разрывов (отслаиванию
среды от стенок или дна пробирки) в столбике комбинированной среды
судят об образовании при ферментации глюкозы газообразных
продуктов (газообразование характерно для большинства эшерихий,
эдвардсиелл, цитробактеров, подавляющего большинства сальмонелл,
представителей трибы клебсиелл, отдельных видов протея).
Почернение среды, появляющееся в средней или нижней части
столбика, происходит при образовании выделенным микробом
сероводорода, что свойственно, представителям рода Salmonella,
видов С. freundii, Р. vulgaris, Р. mirabilis, Edwardsiella и
некоторым представителям рода Erwinia.
Способность ферментировать лактозу (а в трех-сахарной среде и
сахарозу) оценивают по изменению окраски скошенной части
комбинированной среды. Обычно лактозоположительными бывают
представители родов Escherichia, Klebsiella, Citrobacter,
Enterobacter. Ферментация лактозы нередко коррелирует с
ферментацией сахарозы. В неясных случаях следует проверить эти
свойства путем посева культур в среды Гисса с соответствующими
углеводами.
Таким образом, через 18-20 часов инкубации посева в
комбинированную среду и одновременно в среду с мочевиной по
Кристенсену или по Преусу возможен учет 4-5 признаков,
характеризующих выделенную культуру, что позволяет значительно
сузить диапазон подозреваемых родовых групп.
Сходное сочетание биохимических реакций (отношение к лактозе,
глюкозе, мочевине, образование сероводорода) может наблюдаться
одновременно у нескольких родовых групп семейства
Enterobacteriaceae, и для их дифференциации необходимо
использовать дополнительные тесты, минимально необходимые для
установления родовой, а, в ряде случаев, и видовой принадлежности.
Известно немало рекомендаций по составу таких минимальных наборов
дифференциальных тестов для определения рода в семействе
Enterobacteriaceae. В таблице 13 (нижняя часть) представлены
тесты, наиболее остро необходимые и относительно более доступные
практическим бактериологическим лабораториям.
Второй день завершают посевами на среды минимального
дифференцирующего ряда и скошенный питательный агар (таблица 13).
Посев в среду с мочевиной по Кристенсену или по Преусу не
повторяют, если он был сделан на этапе отбора колоний.
Для большей четкости и надежности результатов полезно
учитывать следующее:
а) при "скашивании" среды Кристенсена с мочевиной высота
столбика должна превышать длину скошенной части. Посев делают
штрихом по скошенной части. С культурами протеев (кроме P.
inconstans) положительные результаты могут быть получены в течение
дня, но окончательный учет производят через 18-24 часа;
б) для определения индола используют индикаторные бумажки,
пропитанные реактивом Эрлиха или Ковача;
в) для воспроизведения тестов с метиловым красным и
Фогеса-Проскауэра кроме классического метода с жидкой средой
Кларка можно использовать полужидкую среду Кларка, что позволит в
этой же пробирке определить подвижность изучаемого микроба;
г) при испытании подвижности культуры в полужидком агаре
следует делать укол петлей на глубину 1-1,5 см, а не до дна
пробирки;
д) при выделении лактозоотрицательных, безгазовых культур, не
образующих сероводород и не гидролизующих мочевину, к числу
дополнительных родовых тестов следует добавить ацетатный (или
цитратный по Кристенсену) для более надежной дифференциации шигелл
(не растущих на ацетатной среде и цитратной среде Кристенсена) от
эшерихий, вырастающих обычно на первые, иногда вторые сутки.
Третий день.
Проводится регистрация результатов испытываемой культуры в
минимальном ряду тестов. В соответствии с таблицей 13 делают
заключение о родовой принадлежности выделенной культуры.
В клинической микробиологии идентификация энтеробактерий
завершается обычно определением рода и вида выделенной культуры и,
лишь при наличии эпидемиологических показаний, и иногда для
утверждения этиологической значимости, она дополняется
определением биоваров (по старой терминологии биотипов), а в
некоторых родовых группах условно патогенных энтеробактерий -
определением сероваров (по старому серотипов) (Escherichia,
Citrobacter, Р. vulgaris, Р. mirabilis). Определение рода и вида
энтеробактерий основывается на изучении совокупности биохимических
тестов. Попытки пренебрегать определением минимального ряда
родовых биохимических тестов неизбежно влекут за собой ошибочную
диагностику, исключают возможность выявления всего многообразия
условно-патогенных энтеробактерий, связываемых в настоящее время с
патологией у человека.
Определение по минимальному набору тестов родов Esherichia,
Edwardsiella, Hafnia, Serratia (включающих, согласно "Краткого
определителя бактерий Берги", по одному виду) позволяет
одновременно делать заключение о выделении соответствующих видов
E. coli, E. tarda, H. alvei или S. marcescens.
Наличие фуксиновокрасного или розового пигмента может
подтверждать принадлежность выделенной культуры к виду S.
marcescens, но отсутствие пигмента не исключает такого заключения.
Если по предварительным данным не исключена принадлежность
культуры к родам Hafnia или Yersinia, целесообразно сделать посев
в 2 пробирки со средой Кларка, одну из которых оставить до
следующего дня при комнатной температуре, а другую - при 37°С, с
последующим воспроизведением тестов с метиловым красным и
Фогеса-Проскауэра (см. табл. 13). Дополнительным признаком в
пользу выделения Hafnia может быть особенно бурное (в сравнении с
другими энтеробактериями) выделение кислорода в пробе с 3% Н2О2 на
предметном стекле (тест на каталазу).
На III день идентификации культуры, отнесенные по данным учета
минимального ряда к родам Salmonella, Citrobakter, Klebsiella,
Enterobaсter, Proteus, Yersinia подвергают дальнейшему изучению с
целью определения вида (подрода).
При внутриродовой дифференциации требуются различные наборы
биохимических тестов для разных родов. Соответствующие сведения
приведены в таблице 14.
В связи с неразработанностью внутривидовой идентификации
Erwinia ответ ограничивают определением группы Herbicola (см.
табл. 13).
При наличии показаний и возможностей в этот же день культуры,
отнесенные к родам Shigella, Salmonella, Citrobakter, Proteus,
Eseherichia, испытывают в реакциях агглютинации с родовыми и
групповыми агглютинирующими сыворотками согласно существующим
наставлениям.
Для серологического изучения используют суточные культуры на
скошенном питательном агаре, засеваемом одновременно с посевами на
минимальный ряд родовых тестов. (2 день идентификации).
Четвертый день.
Учет результатов внутриродовой дифференциации (табл. 14).
Выдача ответа.
Таблица 13
Основные признаки межродовой дифференциации семейства Enterobacteriaceae
(родовые группы даны в соответствии с Берги, 1980)
-------------T---------------T------T-----T-------T------T------T------T-------T-------T-----T-------T-------T---------¬
¦ ¦ Тест или ¦Eshe- ¦Shi- ¦Edward-¦Salmo-¦Citro-¦Kleb- ¦Entero-¦Hafnia ¦Ser- ¦Proteus¦Yersi- ¦Erwinia ¦
¦ ¦ субстрат ¦richia¦gella¦siella ¦nella ¦bakter¦siella¦bakter ¦ ¦ratia¦ ¦nia <*>¦herbicola¦
+------------+---------------+------+-----+-------+------+------+------+-------+-------+-----+-------+-------+---------+
¦ 1 ¦ 2 ¦ 3 ¦ 4 ¦ 5 ¦ 6 ¦ 7 ¦ 8 ¦ 9 ¦ 10 ¦ 11 ¦ 12 ¦ 13 ¦ 14 ¦
+------------+---------------+------+-----+-------+------+------+------+-------+-------+-----+-------+-------+---------+
¦По результа-¦Лактоза ¦ +,- ¦ - ¦ - ¦ - ¦ +,х ¦ + ¦ + ¦ -,+ ¦ -,+ ¦ - ¦ - ¦ х ¦
¦там посева+---------------+------+-----+-------+------+------+------+-------+-------+-----+-------+-------+---------+
¦на комбини-¦Глюкоза (газ) ¦ +,- ¦ - ¦ + ¦ +,- ¦ + ¦ + ¦ + ¦ х ¦ х ¦ х ¦ - ¦ - ¦
¦рованную +---------------+------+-----+-------+------+------+------+-------+-------+-----+-------+-------+---------+
¦среду (Оль-¦Сероводород ¦ - ¦ - ¦ + ¦ +,- ¦ +,- ¦ - ¦ - ¦ - ¦ - ¦ +,- ¦ - ¦ -,+ ¦
¦кеницкого +---------------+------+-----+-------+------+------+------+-------+-------+-----+-------+-------+---------+
¦или сходную)¦Мочевина (ори-¦ - ¦ - ¦ - ¦ - ¦ х ¦ х,- ¦ - ¦ - ¦ - ¦ +,- ¦ + ¦ - ¦
¦ ¦ентир.) ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+------------+---------------+------+-----+-------+------+------+------+-------+-------+-----+-------+-------+---------+
¦Дополнитель-¦Цитрат Симмонса¦ - ¦ - ¦ - ¦ +,- ¦ + ¦ + ¦ + ¦ х ¦ + ¦ х ¦ - ¦ + ¦
¦ные тесты+---------------+------+-----+-------+------+------+------+-------+-------+-----+-------+-------+---------+
¦для опреде-¦Мочевина (по¦ - ¦ - ¦ - ¦ - ¦ -,х ¦ + ¦ (+),- ¦ - ¦ х ¦ +,- ¦ + (+) ¦ - ¦
¦ления родо-¦Кристенсену или¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦вой принад-¦Преусу) ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦лежности +---------------+------+-----+-------+------+------+------+-------+-------+-----+-------+-------+---------+
¦ ¦Индол ¦ +,- ¦ +,- ¦ + ¦ - ¦ -,+ ¦ -,+ ¦ - ¦ - ¦ - ¦ +,- ¦ - ¦ - ¦
¦ +---------------+------+-----+-------+------+------+------+-------+-------+-----+-------+-------+---------+
¦ ¦Тест с метило-¦ + ¦ + ¦ + ¦ + ¦ + ¦ -,+ ¦ - ¦ +37° ¦ х ¦ + ¦ + ¦ - ¦
¦ ¦вым красным ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ -22° ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ +---------------+------+-----+-------+------+------+------+-------+-------+-----+-------+-------+---------+
¦ ¦Тест Фогеса-¦ - ¦ - ¦ - ¦ - ¦ - ¦ +,- ¦ + ¦ +,- ¦ х ¦ - ¦ -37° ¦ х ¦
¦ ¦Проскауэра ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ +---------------+------+-----+-------+------+------+------+-------+-------+-----+-------+-------+---------+
¦ ¦Фенилаланинде- ¦ - ¦ - ¦ - ¦ - ¦ - ¦ - ¦ - ¦ - ¦ - ¦ + ¦ - ¦ х ¦
¦ ¦заминаза ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ +---------------+------+-----+-------+------+------+------+-------+-------+-----+-------+-------+---------+
¦ ¦Лизиндекарбок- ¦ +,- ¦ - ¦ + ¦ +,- ¦ - ¦ + ¦ -,+ ¦ + ¦ + ¦ - ¦ - ¦ - ¦
¦ ¦силаза ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ +---------------+------+-----+-------+------+------+------+-------+-------+-----+-------+-------+---------+
¦ ¦Подвижность ¦ +,- ¦ - ¦ + ¦ + ¦ + ¦ - ¦ + ¦ +,- ¦ + ¦ +,- ¦ -37° ¦ +,- ¦
¦ +---------------+------+-----+-------+------+------+------+-------+-------+-----+-------+-------+---------+
¦ ¦Ацетат ¦ + (+)¦ - ¦ х ¦ х ¦ х ¦ + ¦ + ¦ -,(+) ¦ х ¦ х ¦ х ¦ х ¦
L------------+---------------+------+-----+-------+------+------+------+-------+-------+-----+-------+-------+----------
+ 90% и более положительных реакций.
(+) Замедленно положительные реакции (через двое и более суток).
- 90% и более отрицательных реакций.
+,- чаще положительные, реже отрицательные реакции.
х различные биохимические реакции.
В таблице даны свойства типичных штаммов.
--------------------------------
<*> - Без учета свойств Y. pestis.
Таблица 14
Основные признаки внутриродовой дифференциации семейства Enterobacteriaceae <*>
---------T--------------------T-------------T---------T----------------T----------T-------------------------T----------¬
¦Тест или¦ Shigella ¦ Salmonella ¦ Citro- ¦ Klebsiella ¦ Entero- ¦ Proteus ¦ Yersinia ¦
¦субстрат¦ ¦ ¦ bac- ¦ ¦ bacter ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ter <**> ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ +----T-----T----T----+-------------+----T----+----T-----T-----+-----T----+----T----T----T-----T----+-----T----+
¦ ¦dys-¦flex-¦boy-¦son-¦ подроды ¦fre-¦in- ¦pne-¦ozae-¦rhi- ¦cloa-¦ae- ¦vul-¦mi- ¦mor-¦rett-¦in- ¦ en- ¦pse-¦
¦ ¦ent.¦ner. ¦dii ¦nei +-T---T---T---+un- ¦ter-¦um- ¦nae ¦nosc.¦cae ¦ro- ¦ga- ¦ra- ¦ga- ¦geri ¦con-¦ te- ¦udo-¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦I¦II ¦III¦IV ¦dii ¦med.¦on. ¦ ¦ ¦ ¦gen.¦ris ¦bil.¦nii ¦ ¦st. ¦ roc.¦tu- ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ber.¦
+--------+----+-----+----+----+-+---+---+---+----+----+----+-----+-----+-----+----+----+----+----+-----+----+-----+----+
¦ 1 ¦ 2 ¦ 3 ¦ 4 ¦ 5 ¦6¦ 7 ¦ 8 ¦ 9 ¦ 10 ¦ 11 ¦ 12 ¦ 13 ¦ 14 ¦ 15 ¦ 16 ¦ 17 ¦ 18 ¦ 19 ¦ 20 ¦ 21 ¦ 22 ¦ 23 ¦
+--------+----+-----+----+----+-+---+---+---+----+----+----+-----+-----+-----+----+----+----+----+-----+----+-----+----+
¦Адонит ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ - ¦ + ¦ ¦ ¦ ¦ -,+ ¦ + ¦ - ¦ - ¦ - ¦ +,- ¦ х ¦ ¦ ¦
+--------+----+-----+----+----+-+---+---+---+----+----+----+-----+-----+-----+----+----+----+----+-----+----+-----+----+
¦Дульцит ¦ ¦ ¦ ¦ ¦+¦ + ¦ - ¦ - ¦ ¦ ¦-,+ ¦ - ¦ - ¦ -,+ ¦ - ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+--------+----+-----+----+----+-+---+---+---+----+----+----+-----+-----+-----+----+----+----+----+-----+----+-----+----+
¦Инозит ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ + ¦ ¦ ¦ х ¦ + ¦ - ¦ - ¦ - ¦ + ¦ х ¦ ¦ ¦
+--------+----+-----+----+----+-+---+---+---+----+----+----+-----+-----+-----+----+----+----+----+-----+----+-----+----+
¦Маннит ¦ - ¦ + ¦ + ¦ + ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ - ¦ - ¦ - ¦ +,- ¦ х ¦ (+) ¦(+) ¦
+--------+----+-----+----+----+-+---+---+---+----+----+----+-----+-----+-----+----+----+----+----+-----+----+-----+----+
¦Салицин ¦ - ¦ - ¦ - ¦ - ¦-¦ - ¦ - ¦ - ¦ ¦ ¦ + ¦ + ¦ + ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ + ¦
+--------+----+-----+----+----+-+---+---+---+----+----+----+-----+-----+-----+----+----+----+----+-----+----+-----+----+
¦Сорбит ¦ х ¦ х ¦ х ¦ - ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ + ¦ - ¦
+--------+----+-----+----+----+-+---+---+---+----+----+----+-----+-----+-----+----+----+----+----+-----+----+-----+----+
¦Сахароза¦ - ¦ - ¦ - ¦(+) ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ + ¦ - ¦
+--------+----+-----+----+----+-+---+---+---+----+----+----+-----+-----+-----+----+----+----+----+-----+----+-----+----+
¦Мальтоза¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ + ¦ - ¦ - ¦ - ¦ - ¦ ¦ ¦
+--------+----+-----+----+----+-+---+---+---+----+----+----+-----+-----+-----+----+----+----+----+-----+----+-----+----+
¦Малонат ¦ ¦ ¦ ¦ ¦-¦ + ¦ + ¦ - ¦ - ¦ х ¦ + ¦ - ¦ +,- ¦ + ¦+,- ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+--------+----+-----+----+----+-+---+---+---+----+----+----+-----+-----+-----+----+----+----+----+-----+----+-----+----+
¦Желатин ¦ ¦ ¦ ¦ ¦-¦(+)¦(+)¦(+)¦-,+ ¦+,- ¦ ¦ ¦ ¦ + ¦+,- ¦ +, ¦ + ¦ - ¦ - ¦ - ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦(+) ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+--------+----+-----+----+----+-+---+---+---+----+----+----+-----+-----+-----+----+----+----+----+-----+----+-----+----+
¦Орнитин-¦ - ¦ - ¦ - ¦ + ¦ ¦ ¦ ¦ ¦-,+ ¦ + ¦ - ¦ ¦ ¦ + ¦ + ¦ - ¦ + ¦ + ¦ - ¦ - ¦ + ¦ - ¦
¦декар- ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦боксила-¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦за ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+--------+----+-----+----+----+-+---+---+---+----+----+----+-----+-----+-----+----+----+----+----+-----+----+-----+----+
¦Лактоза ¦ - ¦ - ¦ - ¦(+) ¦-¦ - ¦+,х¦ - ¦ ¦ ¦ + ¦ х ¦ (х) ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+--------+----+-----+----+----+-+---+---+---+----+----+----+-----+-----+-----+----+----+----+----+-----+----+-----+----+
¦Глюкоза ¦ - ¦ -,+ ¦ - ¦ - ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ + ¦ х ¦ - ¦ ¦ ¦+,- ¦ + ¦+,- ¦ -,+ ¦ х ¦ ¦ ¦
¦(газ) ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+--------+----+-----+----+----+-+---+---+---+----+----+----+-----+-----+-----+----+----+----+----+-----+----+-----+----+
¦Серово- ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ + ¦ - ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ + ¦ + ¦ - ¦ - ¦ - ¦ ¦ ¦
¦дород ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+--------+----+-----+----+----+-+---+---+---+----+----+----+-----+-----+-----+----+----+----+----+-----+----+-----+----+
¦Мочевина¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ х ¦ +, ¦ + ¦ х ¦ - ¦ +,- ¦ - ¦ + ¦ + ¦ + ¦ + ¦ - ¦ (+) ¦(+) ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦(+) ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+--------+----+-----+----+----+-+---+---+---+----+----+----+-----+-----+-----+----+----+----+----+-----+----+-----+----+
¦Цитрат ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ + ¦ х ¦ - ¦ ¦ ¦ х ¦ +, ¦ - ¦ + ¦ + ¦ ¦ ¦
¦Симмонса¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦(+) ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+--------+----+-----+----+----+-+---+---+---+----+----+----+-----+-----+-----+----+----+----+----+-----+----+-----+----+
¦Индол ¦ ¦ ¦ ¦ - ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ - ¦ + ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ + ¦ - ¦ + ¦ + ¦ + ¦ ¦ ¦
+--------+----+-----+----+----+-+---+---+---+----+----+----+-----+-----+-----+----+----+----+----+-----+----+-----+----+
¦Лизинде-¦ - ¦ - ¦ - ¦ - ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ + ¦ -,+ ¦ - ¦ - ¦ + ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦карбок- ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦силаза ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+--------+----+-----+----+----+-+---+---+---+----+----+----+-----+-----+-----+----+----+----+----+-----+----+-----+----+
¦Реакция ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦-,+ ¦ + ¦ + ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦с мети- ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ловым ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦красным ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+--------+----+-----+----+----+-+---+---+---+----+----+----+-----+-----+-----+----+----+----+----+-----+----+-----+----+
¦Реакция ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ + ¦ - ¦ - ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Фогеса- ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Пр. ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+--------+----+-----+----+----+-+---+---+---+----+----+----+-----+-----+-----+----+----+----+----+-----+----+-----+----+
¦Подвиж- ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ - ¦ - ¦ - ¦ + ¦ + ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦-37° ¦ - ¦
¦ность ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦+-25°¦ ¦
L--------+----+-----+----+----+-+---+---+---+----+----+----+-----+-----+-----+----+----+----+----+-----+----+-----+-----
--------------------------------
<*> - В таблицу не включены роды (Escherichia, Edvardsiella,
Hafnia, Serratia), представленные одним видом, и род Ervinia, для
которого заканчивают идентификацию определением группы Ervinia
herbicola.
<**> - В вид Сitrobacter intermedius входит как биовар
Сitrobacter divepsus (вид - по Ewingy, 1973-1975 г.г.), см.
обозначение таблицы 13.
Питательные среды
1. Трехсахарная среда Олькеницкого
Ингредиенты
Питательный агар, рН 7,2-7,4 - 1000 мл
Лактоза - 1,0 г
Аммоний-железо (II) сульфат (Соль Мора) - 0,2 г
Натрий тиосульфат (Гипосульфит) - 0,3 г
Сахароза - 10,0 г
Глюкоза - 1,0 г
Мочевина - 10,0 г
Феноловый красный, 0,4% водн. р-р - 4,0 мл
Приготовление раствора индикатора: феноловый красный - 0,1 г
растворяют в 25,0 мл стерильной дистиллированной воды. Раствор
можно хранить в холодильнике до 10 дней.
Приготовление среды. Соль Мора и гипосульфит растворяют
предварительно в дистиллированной воде в пробирках, углеводы и
мочевину также растворяют отдельно в дистиллированной воде в колбе
на водяной бане. Все ингредиенты добавляют к расплавленному агару,
размешивают и фильтруют через стерильную марлю, устанавливают рН
7,2-7,4; вносят индикатор и разливают по 5-6 мл в пробирки.
Стерилизуют при 0,5 атм. 20 минут или текучим паром 3 дня
подряд по 20 минут. Среду охлаждают в скошенном положении для
получения столбика высотой 2,5 см и косяка длиной 4 см. Готовая
среда - бледно-розового цвета.
Ход исследования
Сеют уколом в столбик и штрихом по скошенной поверхности.
Инкубируют при 37°С 18-20 часов.
Кислотообразование вызывает появление желтой окраски,
разложение мочевины (увеличение рН) - покраснение; образование
сероводорода приводит к почернению в столбике.
2. Трехсахарная среда с мочевиной
(Модификация среды Олькеницкого)
Ингредиенты
Среда Гисса с лактозой и индикатором - 45,0 г
ВР (сухая)
Глюкоза - 1,1 г
Сахароза - 10,0 г
Мочевина - 10,0 г
Натрий тиосульфат (гипосульфит) - 1,0 г
Аммоний-железо (II) сульфат (Соль Мора) - 0,2 г
Дистиллированная вода - до 1000 мл.
Приготовление. Среду разливают в пробирки по 5-7 мл,
стерилизуют при 0,5 атм. 15 минут.
Ход исследования
Посев и инкубацию проводят как для среды Олькеницкого.
Кислотообразование изменяет цвет среды на голубой (до интенсивного
синего); культуры, гидролизующие мочевину, не изменяют окраски
среды или придают ей розовато - красный цвет; образование
сероводорода вызывает почернение среды в столбике.
3. Среда Кристенсена с мочевиной
Ингредиенты
Раствор I.
Пептон - 1,0 г
Натрий хлористый - 5,0 г
Глюкоза - 1,0 г
Калий фосфорнокислый однозамещенный - 2,0 г
Феноловый красный (раствор 1:500) - 6,0 мл
Мочевина - 20,0 г
Дистиллированная вода - 100,0 мл
рН 6,8-6,9, стерилизуют фильтрованием через фильтр Зейтца.
Раствор II.
Агар-агар - 15,0 г
Дистиллированная вода - 900,0 мл
Стерилизуют при 0,5 атм. 15 минут.
Приготовление. К охлажденному до 50-55°С раствору II добавляют
100 мл раствора I, перемешивают, разливают асептически в
стерильные пробирки, среду охлаждают в наклонном положении для
получения столбика и косяка. Готовая среда желтого цвета.
Ход исследования
Делают массивный посев по всей поверхности косяка. Инкубируют
при 37°С. Производят учет через 2, 4, 6 часов и на следующий день.
В отдельных случаях при отрицательных результатах наблюдают до 4-7
дней (возможны замедленные реакции). Положительный результат -
красное окрашивание.
4. Среда для выявления декарбоксилаз аминокислот
Ингредиенты
Пептон - 5,0 г
Дрожжевой экстракт - 3,0 г
или
Аутолизат дрожжей - 12,0-15,0 мл
или
Диализат дрожжей - 12,0-15,0 мл
Глюкоза - 1,0 г
Бромтимоловый синий, 1,6% спиртовой раствор - 1,0 мл
Дистиллированная вода - 1000 мл
Приготовление. Основу среды делят на 3 части, к одной из них
добавляют 1% L-лизина, ко второй части - 1% L-орнитина; третью
часть используют как контрольную (без добавления аминокислот). При
использовании DL-аминокислот их добавляют в концентрации 2%, так
как энтеробактерии проявляют активность в отношении L-изомеров.
Все порции среды разливают по 2-3 мл в серологические
пробирки. Стерилизуют при 0,5 атм. 30 минут. Готовая среда имеет
светло-зеленый цвет.
Ход исследования
Посев производят минимальными дозами с косяка 16-18-часовой
агаровой культуры в среды с аминокислотами и в контрольную среду.
После посева во все пробирки вносят стерильное вазелиновое масло
(слоем 4-5 мм) для получения более надежных и четких результатов.
Инкубируют при 37°С. Большинство положительных реакций у
энтеробактерий выявляется на первые-вторые сутки, предельный срок
наблюдения 4 суток.
При декарбоксилировании аминокислот, положительном результате,
среда приобретает синий цвет за счет накопления щелочных
продуктов. При отрицательном результате цвет среды желтый; в
контрольной пробирке должна быть желтая окраска среды (в
результате подкисления среды за счет ферментации глюкозы).
5. Среда для определения фенилаланиндезаминазы
Ингредиенты
Дрожжевой экстракт - 3,0 г
L-фенилаланин - 1,0 г
или
DL-фенилаланин - 2,0 г
Натрий фосфорнокислый двузамещенный - 1,0 г
Натрий хлористый - 15,0 г
Агар-агар - 12,0 г
Дистиллированная вода - 1000,0 мл
Приготовление. Среду разливают по 3-4 мл в серологические
пробирки, стерилизуют при 1 атм. 10 минут и скашивают обычным
образом.
Ход исследования
Посев испытуемых культур производят массивной дозой,
инкубируют при 37°С 20-24 часа. Для оценки результатов на
поверхность выросшей культуры наносят 4-5 капель 10% раствора
хлористого железа.
Положительная реакция - от интенсивного зеленого до
светло-зеленого окрашивания косяка и свободной жидкости
(характерна для представителей рода Proteus), отрицательная
реакция - без изменения окраски.
6. Среда Симмонса
Ингредиенты
Натрий-аммоний фосфорнокислый двузамещенный - 1,5 г
Магний сернокислый - 0,2 г
Калий фосфорнокислый однозамещенный - 1,0 г
Натрий лимоннокислый трехзамещенный - 3,0 г
Дистиллированная вода - до 1000,0 мл
Агар-агар - 20,0 г
1,5% спиртовой раствор бромтимолового - 10,0 мл
синего (индикатор)
Приготовление. Все соли растворяют сначала в небольшом объеме
дистиллированной воды,соединяют с расплавленным предварительно в
дистиллированной воде агар-агаром, доводят объем до 1000 мл,
устанавливают рН 7,2.
Добавляют в соответствии с прописью раствор индикатора,
который придает готовой среде зеленую окраску, фильтруют и
разливают по 5-7 мл в пробирки. Стерилизуют при 1 атм. (120°С) -
15 минут. Скашивание среды производят таким образом, чтобы
получить столбик высотой 2,5 см и скошенную поверхность (косяк)
длиной 4 см. Это имеет значение для сроков учета результатов
посева.
Ход исследования
Посев производят минимальной дозой культуры (16-18-часовой
агаровой культуры или суспензии ее в изотоническом растворе
хлористого натрия). Массивный посев может приводить к
ложноположительным результатам. Инкубируют при 37°С. Учитывают
через 18-20 часов, при отрицательных результатах - до 4 суток.
Положительный результат - рост культуры и изменение окраски
среды в синий цвет (при индикаторе бромтимоловом синем).
7. Среда Кларка
(для постановки тестов
с метиловым красным и Фогеса-Проскауэра)
Ингредиенты
Пептон - 5,0 г
Глюкоза - 5,0 г
Калий фосфорнокислый двузамещенный - 5,0 г
Дистиллированная вода - до 1000 мл
Приготовление. Все ингредиенты растворяют в небольшом
количестве (80-100 мл) дистиллированной воды при подогревании на
водяной бане в течение ў 20 мин. Раствор охлаждают до 20°С,
фильтруют, доводят дистиллированной водой объем до 1000 мл и
разливают в бактериологические пробирки по 5 мл. Стерилизуют
дробно, 3 дня подряд, текучим паром.
Ход исследования
Посев - обычным порядком, инкубируют при 37°С от 1 до 5 суток.
Среда Кларка
(для определения подвижности микробов)
Приготовление. К 100 мл жидкой среды Кларка добавляют 0,3 г
агара и разливают в бактериологические пробирки по 5 мл.
Стерилизуют дробно, 3 дня подряд, текучим паром.
Ход исследования
Посев проводят уколом в столбик 0,3% агара в пробирке.
Подвижные микробы растут в толще среды по ходу укола.
Тест с метиловым красным
Принцип. Определение интенсивности кислотообразования за счет
глюкозы.
Реактив. Раствор метилового красного (0,01 г метилового
красного растворяют в 30,0 мл этилового спирта 96%, затем
дистиллированной водой доводят до 50,0 мл).
Ход исследования. К 5 мл 3-5 суточной испытуемой культуры на
среде Кларка добавляют 5 капель раствора метилового красного.
Положительная реакция - красное окрашивание, при сдвиге рН в
кислую зону ниже 6; отрицательная реакция - желтое окрашивание,
при рН в зоне 6,0-7,0; слабоположительная реакция
- красновато-оранжевый цвет.
Тест Фогеса-Проскауэра
Принцип. Определение ацетилметилкарбинола-ацетоина.
Реактив. 20% раствор едкого калия (КОН).
Ход исследования. К определенному объему суточной__испытуемой
культуры на среде Кларка добавляют такой же объем (aa) 20%
раствора едкого калия. Встряхивают и помещают в термостат при
37°С, желательно в наклонном положении для большей аэрации. Учет
проводят через 3-4 часа и на следующий день. Положительная реакция
- оранжево-розовое окрашивание верхнего слоя жидкости;
отрицательная реакция - неизмененная окраска.
Модификация Баррита - (более чувствительная)
К 5 мл 1-3-суточной испытуемой культуры на среде Кларка
добавляют 3 мл 5% альфа-нафтола в абсолютном спирте и 1 мл 40%
КОН. В течение 5-15 мин. при положительном результате на
поверхности жидкости появляется розовое или красное окрашивание.
8. Питательные среды, выпускаемые промышленностью
(см. раздел 3.2.)
Биохимические методы исследования
1. Системы индикаторные бумажные (СИБ) для межродовой
дифференциации энтеробактерий (см. раздел 3.3.).
2. Системы индикаторные бумажные (СИБ) для полной
идентификации энтеробактерий (до вида), (см. раздел 3.3.).
2.7. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИДЕНТИФИКАЦИИ
МИКРОБОВ РОДА ПСЕВДОМОНАС
(Pseudomonas)
Род Pseudomonas относится к семейству Pseudomonadaceae. Среди
достаточно большого числа микроорганизмов, входящих в этот род,
наибольшее значение для медицины и ветеринарии представляют виды
Pseudomonas aeruginosa (синегнойная палочка) и P. mallei.
Кроме того, сейчас все чаще можно выделить из различного
патологического материала и другие псевдомонады, такие как P.
fluorescens, P. putida, P. cepacia, которые являются возбудителями
различных гнойных поражений. Инфекции, вызываемые представителями
рода Pseudomonas, часто имеют госпитальный характер.
Характерной особенностью большинства штаммов, принадлежащих к
данному роду, является положительный тест на образование
цитохромоксидазы, а также образование различных пигментов
(сине-зеленого, зеленовато-желтого, флюоресцирующего, фиолетового,
красного и др.). В зависимости от условий роста и состава
питательной среды пигменты образуются в различных количественных
соотношениях, и поэтому окраска культуральной среды может
меняться, иногда какой-либо из пигментов может утрачиваться
совсем.
Все виды, входящие в этот род, каталазо-положительны, дают
отрицательные реакции на индол, не реагируют с метиловым красным и
не образуют ацетилметилкарбинола.
Ход микробиологического исследования
Первый день. При целенаправленном исследовании на псевдомонады
в случае госпитальной вспышки инфекции, вызванной синегнойной
палочкой, посев производят на селективную среду ЦПХ-агар
бактериологической петлей или ватным тампоном. В случае
исследования воздуха при определении обсемененности больничных
помещений синегнойной палочкой седиментационным методом экспозиция
открытых чашек с агаром составляет 2-3 часа.
Если исследование не является целенаправленным в отношении
выявления псевдомонад, то посев производят на любую из
общепринятых питательных сред: 1,5% питательный агар, 5% кровяной
агар, агар Эндо. Все посевы инкубируют в термостате при 37°С в
течение 18-24 часов.
Второй день. Засеянные накануне исследуемым материалом
агаровые чашки просматривают и отмечают колонии, подлежащие
дальнейшему изучению. Различают 5 морфологических типов колоний:
1) плоские колонии неправильной формы; 2) колонии, напоминающие
кишечную палочку; 3) складчатые ("цветок маргаритки"); 4)
слизистые, редко дающие пигментацию при первичном выделении,
образующие слизистый налет, со временем приобретающий зеленую
окраску; 5) карликовые, которые появляются только через 18 часов.
На кровяном агаре вокруг колоний видны зоны гемолиза. Очень часто
можно наблюдать феномен "радужного лизиса" культур, который
характеризуется наличием нежного блестящего металлического налета
и зон лизиса. На среде Эндо культуры синегнойной палочки образуют
бледно-розовые колонии небольших размеров. Культуры синегнойной
палочки образуют синий или зеленовато-синий или фиолетовый
пигменты, проникающие в субстраты. Один из них - пиоцианин, дающий
синюю или сине-зеленую окраску. Другой - флюоресцеин - дает
зеленовато-желтое окрашивание, флюоресцирующее в проходящем свете
в УФ-лучах.
Пиоцианин образуют только штаммы синегнойной палочки, другие
представители рода Pseudomonas могут образовывать флюоресцеин.
При просмотре мазков, окрашенных по Граму, выявляются
грамотрицательные палочки размером 1,5-3,0 х 0,4-0,6 мкм,
располагающиеся одиночно, парами или короткими цепочками, не
образующими спор, но продуцирующие слизь, окружающую микробную
клетку тонким слоем.
Таким образом, уже на второй день можно идентифицировать
примерно 75% выделенных культур синегнойной палочки по наличию
роста на селективной среде, морфологии колоний, образованию
сине-зеленого пигмента (пиоцианина) и специфическому запаху
жасмина или земляничного мыла.
Беспигментные колонии, выросшие на селективной среде, и
колонии, подозрительные на псевдомонады, с других сред исследуют
на способность образовывать цитохромоксидазу. Для этого можно
использовать индикаторные бумажки СИБ.
Исследуемую культуру наносят на смоченную физиологическим
раствором индикаторную бумажку. При положительной реакции на месте
нанесения культуры появляется синее окрашивание бумаги в течение
30 секунд.
Беспигментные колонии, давшие положительный цитохромоксидазный
тест, отбирают и суспендируют в 0,5 мл физиологического раствора,
а затем отсеивают на следующие питательные среды.
Среда Кинг А используется для усиления способности синегнойной
палочки продуцировать сине-зеленый пигмент пиоцианин. Некоторые
штаммы синегнойной палочки образуют на этой среде другой пигмент -
пиорубин, дающий красное окрашивание.
Среда Хью-Лейфсена с глюкозой. Применяют для определения
способности псевдомонад окислять глюкозу до глюконовой кислоты
только в аэробных условиях. Посев производят уколом в 2 столбика
агара, один из которых заливают 1 мл стерильного вазелинового
масла. Посевы инкубируют в термостате в течение 18-24 часов при
температуре 37°С. При положительной реакции происходит порозовение
среды в столбике без вазелина, а при отсутствии роста в анаэробных
условиях цвет среды не меняется.
Ацетамидный агар является дифференциальной средой для
синегнойной палочки, поскольку она обладает способностью
использовать ацетамид в качестве единственного источника азота и
углерода.
2 косяка с питательным агаром для определения способности
культур к росту при 42°С и 5°С.
Все засеянные среды инкубируют в течение 18-24 часов при
температуре 37°С, кроме последних, которые ставят соответственно в
термостат при 42°С и в холодильный шкаф.
Третий день. Просматривают результаты посевов второго дня. На
среде Кинг А в случае высева синегнойной палочки вокруг выросших
колоний можно видеть сине-зеленое окрашивание, однако, оно может и
отсутствовать, если штамм не образует пиоцианина. Если данный
микроорганизм принадлежит к роду Pseudomonas, то окисление глюкозы
происходит только в аэробных условиях. Рост культур на
ацетамидном агаре, способность культур расти при температуре 42°С
и отсутствие роста при 5°С позволяет отнести выделенную культуру к
виду P. aeruginosa. Если культура выросла на ацетамидном агаре, но
не выросла при 42°С, то она принадлежит к виду P. putida. P.
fluorescens характеризуется неспособностью утилизировать ацетамид
и расти при 42°С, но хорошо растет при 5°С. Основные
дифференциальные признаки флуоресцирующих псевдомонад приведены в
табл. 15.
Таблица 15
Основные дифференцирующие признаки флуоресцирующих
псевдомонад (Pseudomonas)
----------------------T------------------------------------------¬
¦ ¦ Вид ¦
¦ Тест или субстрат +--------------T---------------T-----------+
¦ ¦Ps. aeruginosa¦Ps. fluorescens¦Ps. putida ¦
+---------------------+--------------+---------------+-----------+
¦ 1 ¦ 2 ¦ 3 ¦ 4 ¦
+---------------------+--------------+---------------+-----------+
¦Цитохромоксидаза ¦ + ¦ + ¦ + ¦
+---------------------+--------------+---------------+-----------+
¦Пигмент пиоцианин ¦ + ¦ - ¦ - ¦
+---------------------+--------------+---------------+-----------+
¦Флуоресценция ¦ + ¦ + ¦ + ¦
+---------------------+--------------+---------------+-----------+
¦Глюкоза ¦ + ¦ + ¦ + ¦
+---------------------+--------------+---------------+-----------+
¦Рост на ацетамидном¦ + ¦ - ¦ + ¦
¦агаре ¦ ¦ ¦ ¦
+---------------------+--------------+---------------+-----------+
¦Рост при 5°С ¦ - ¦ + ¦ - ¦
+---------------------+--------------+---------------+-----------+
¦Рост при 42°С ¦ + ¦ - ¦ - ¦
+---------------------+--------------+---------------+-----------+
¦Желатиназа ¦ + ¦ + ¦ - ¦
L---------------------+--------------+---------------+------------
Типирование штаммов P. aeruginosa
1. Серологическое типирование культур P. aeruginosa. Этот
метод используется, главным образом, для следующих целей: 1)
выявления наличия или отсутствия штаммов синегнойной палочки
преобладающих серологических типов; 2) обнаружения идентичности
штаммов, выделенных от больных и из окружающей среды; 3) выявления
доминирования штаммов специфических серотипов в определенный
период времени. Серологическое типирование культур синегнойной
палочки производят методом агглютинации на стекле с использованием
набора, состоящего из поливалентных сывороток к 12 групповым
О-антигенам или с 23 адсорбированными моноспецифическими
сыворотками к 23 факторам О-антигена. Серологическое типирование
культур - достаточно легко и четко воспроизводимый метод, и
дифференциация с его помощью достаточно стабильна из-за
моноспецифичности серологических типов.
2. Пиоцино- и фаготипирование клинических штаммов синегнойной
палочки являются вспомогательными методами, позволяющими более
детально дифференцировать эти культуры при проведении
эпидемиологического анализа вспышек инфекции и изучения
эпидобстановки в стационаре. Эти методы, однако, пока еще не нашли
широкого распространения из-за отсутствия стандартных фагов и
пиоцинов.
Питательные среды
1. ЦПХ-агар
Принцип. К питательной основе добавляют 0,2% N-цетилпиридиния
хлорида - катионного поверхностно-активного вещества, подавляющего
рост 24 видов микроорганизмов, возможных ассоциантов псевдомонад в
клиническом материале (особенно в отделяемом ран, мокроте,
фекалиях).
Ингредиенты
Пептон ферментативный - 20,0 г
Калий сернокислый - 7,0 г
Магний хлористый - 1,5 г
Магний сернокислый - 1,5 г
N-цетилпиридиний хлорид - 2,0 г
Агар-агар - 10,0 г
Вода дистиллированная - 1000,0 мл
рН среды 6,8-7,0
Приготовление. Все ингредиенты смешивают, среду доводят до
кипения, кипятят 2-3 минуты до расплавления агара и разливают в
чашки Петри. Активность среды сохраняется в течение 1 месяца при
хранении при 4°С.
2. Среда Кинг А
Ингредиенты
Пептон - 20,0 г
Глицерин - 10,0 г
Калий сернокислый - 10,0 г
Магний хлористый - 1,4 г
Вода дистиллированная - 1000 мл
Агар-агар 20,0 г
Приготовление. Все ингредиенты смешивают,кипятят до
расплавления агар-агара, разливают во флаконы и стерилизуют в
автоклаве при 0,5 атм. в течение 20 минут.
3. Среда Хью-Лейфсона (см. раздел 3.2.)
4. Среда с ацетамидом
Ингредиенты
Натрий хлористый - 5,0 г
Магний сернокислый - 0,2 г
Аммоний фосфорнокислый однозамещенный - 1,0 г
Калий фосфорнокислый двузамещенный - 1,0 г
Ацетамид - 20,0 г
Агар-агар - 15,0 г
Вода дистиллированная - 1000 мл
рН среды 6,7-6,8
Приготовление. Все ингредиенты смешивают,кипятят до
расплавления агар-агара, разливают во флаконы и стерилизуют в
автоклаве при 1 атм.
20 минут.
5. Питательная желатина
Ингредиенты
Питательный бульон - 100 мл
Желатина - 12,0 г
Натрий двууглекислый 10% раствор
рН 7,0
Приготовление. К 100 мл питательного бульона добавляют 12 г
измельченной желатины. Ставят для набухания на 1 час при комнатной
температуре, затем на водяную баню при температуре 40-45°С для
|
