|
Стр. 5
¦ ¦следует использовать ¦Fasciola hepatica; ¦
¦ ¦антидиарейные препараты, ¦Metagonimus jokogawai; ¦
¦ ¦минеральное масло, висмут, ¦Nanophyetus ¦
¦ ¦барий, активированный ¦shikhobalowi; ¦
¦ ¦уголь, т.к. эти вещества ¦Necator americanus; ¦
¦ ¦влияют на процесс ¦Opisthorchis felineus; ¦
¦ ¦идентификации паразитов. ¦Paragonimus spp. - ¦
¦ ¦Барий окрашивает фекалии в ¦можно обнаружить ¦
¦ ¦светлые тона или белый ¦Shistostoma mansoni a. ¦
¦ ¦цвет; железо, ¦spp.; Strongyloides ¦
¦ ¦активированный уголь и ¦stercoralis, ¦
¦ ¦некоторые антидиарейные ¦fuellebomi ¦
¦ ¦препараты могут приводить к¦ ¦
¦ ¦появлению темных или черных¦ ¦
¦ ¦(дегтеобразных) фекалий и ¦ ¦
¦ ¦маскировать кровотечение в ¦ ¦
¦ ¦верхних отделах желудочно- ¦ ¦
¦ ¦кишечного тракта; ¦ ¦
¦ ¦желтоватые фекалии - ¦ ¦
¦ ¦показатель мальабсорбции и ¦ ¦
¦ ¦часто метка присутствия ¦ ¦
¦ ¦Giardia lamblia ¦ ¦
+------------+---------------------------+-----------------------+
¦ ¦Посуду для сбора пробы ¦Tominx aerophilus; ¦
¦ ¦получают в лаборатории. Это¦Trichostrongylidae ¦
¦ ¦- чистая (прокипяченная) ¦spp.; ¦
¦ ¦сухая стеклянная банка или ¦Balantidium coli; ¦
¦ ¦одноразовая с широким ¦Cryptosporidium parvum;¦
¦ ¦горлом и плотно ¦Entamoeba coli, ¦
¦ ¦закрывающимися крышками. ¦hartmanni, histolytica;¦
¦ ¦Стерильная посуда требуется¦Isospora spp.; ¦
¦ ¦для исследования на ¦Lamblia intestinalis ¦
¦ ¦амебиаз. ¦ ¦
¦ ¦Фекалии - утреннюю порцию -¦ ¦
¦ ¦после дефекации собирают в ¦ ¦
¦ ¦посуду из разных участков в¦ ¦
¦ ¦объеме от чайной до ¦ ¦
¦ ¦столовой ложки (не менее 50¦ ¦
¦ ¦г). Избегают контаминации ¦ ¦
¦ ¦пробы мочой и/или водой. ¦ ¦
¦ ¦Пробы доставляют в ¦ ¦
¦ ¦лабораторию в ¦ ¦
¦ ¦полиэтиленовом мешке не ¦ ¦
¦ ¦позднее 1-2 ч. после ¦ ¦
¦ ¦дефекации. При отсутствии ¦ ¦
¦ ¦возможности доставки пробы ¦ ¦
¦ ¦в лабораторию в указанные ¦ ¦
¦ ¦сроки или ее исследования в¦ ¦
¦ ¦день дефекации получают ¦ ¦
¦ ¦посуду с консервантом, в ¦ ¦
¦ ¦которую собирают пробу. ¦ ¦
¦ ¦Материал хранят при ¦ ¦
¦ ¦температуре 4-8 град. С ¦ ¦
+------------+---------------------------+-----------------------+
¦Перианальная¦В подготовку обследуемого ¦Enterobios vermicu- ¦
¦область ¦включают инструктаж (если ¦laris; ¦
¦ ¦обследуют ребенка, то ¦Entamoeba histolytica -¦
¦ ¦инструктируют родителей) по¦в соскобах с язв ¦
¦ ¦правилам сбора материала и ¦перианальной области ¦
¦ ¦доставке его в лабораторию,¦ ¦
¦ ¦предупреждение о ¦ ¦
¦ ¦необходимости сбора проб ¦ ¦
¦ ¦рано утром, когда пациент ¦ ¦
¦ ¦только проснулся, до ¦ ¦
¦ ¦дефекации и душа ¦ ¦
¦ ¦(обследуемому не следует ¦ ¦
¦ ¦подмываться или принимать ¦ ¦
¦ ¦душ и вечером накануне ¦ ¦
¦ ¦отбора пробы - соскоба с ¦ ¦
¦ ¦перианальных складок), т.к.¦ ¦
¦ ¦паразиты откладывают яйца ¦ ¦
¦ ¦на коже в течение ночи. ¦ ¦
¦ ¦Посуду накануне получают в ¦ ¦
¦ ¦лаборатории: одноразовую ¦ ¦
¦ ¦пробирку с тампоном ¦ ¦
¦ ¦(тубсером) или чистую ¦ ¦
¦ ¦специально смонтированную ¦ ¦
¦ ¦стеклянную пробирку с ¦ ¦
¦ ¦ватным тампоном, смоченным ¦ ¦
¦ ¦в глицерине; или тампоном ¦ ¦
¦ ¦на шпателе, смоченным в ¦ ¦
¦ ¦глицерине; или другую ¦ ¦
¦ ¦специально подготовленную ¦ ¦
¦ ¦чистую стеклянную посуду; ¦ ¦
¦ ¦или (особенно при массовых ¦ ¦
¦ ¦обследованиях населения, в ¦ ¦
¦ ¦основном, детского) чистые ¦ ¦
¦ ¦предметные стекла с липкой ¦ ¦
¦ ¦лентой. ¦ ¦
¦ ¦Утром собирают соскоб с ¦ ¦
¦ ¦перианальных складок вокруг¦ ¦
¦ ¦ануса методом "смыва" ¦ ¦
¦ ¦указанными выше тубсерами, ¦ ¦
¦ ¦тампонами, шпателями или ¦ ¦
¦ ¦методом "отпечатка" с ¦ ¦
¦ ¦помощью липкой ленты. В ¦ ¦
¦ ¦последнем случае перед ¦ ¦
¦ ¦взятием соскоба отклеивают ¦ ¦
¦ ¦полоски липкой ленты от ¦ ¦
¦ ¦предметного стекла; держа ¦ ¦
¦ ¦полоску за концы, плотно ¦ ¦
¦ ¦прижимают всей липкой ¦ ¦
¦ ¦поверхностью к анусу и ¦ ¦
¦ ¦саясь пальцами перианальной¦ ¦
¦ ¦области. Отклеивают полоску¦ ¦
¦ ¦от кожи перианальной ¦ ¦
¦ ¦области и переносят на ¦ ¦
¦ ¦предметное стекло липким ¦ ¦
¦ ¦слоем вниз, приклеивают к ¦ ¦
¦ ¦стеклу равномерно для ¦ ¦
¦ ¦избежания образования ¦ ¦
¦ ¦пузырьков воздуха, мешающих¦ ¦
¦ ¦микроскопии. Концы ленты, ¦ ¦
¦ ¦выходящие за края стекла, ¦ ¦
¦ ¦отрезают. После сбора пробы¦ ¦
¦ ¦тубсеры, тампоны и шпатели ¦ ¦
¦ ¦помещают обратно в ¦ ¦
¦ ¦соответствующие пробирки ¦ ¦
¦ ¦или во флаконы. Пробирки, ¦ ¦
¦ ¦флаконы, предметные стекла ¦ ¦
¦ ¦маркируют и передают в ¦ ¦
¦ ¦лабораторию ¦ ¦
+------------+---------------------------+-----------------------+
¦Содержимое ¦Подготовку обследуемого ¦Ancylostoma duodenale, ¦
¦12-перстной ¦осуществляют в соответствии¦Clonorchis sinensis - ¦
¦кишки ¦с правилами проведения ¦очень редко; ¦
¦ ¦инвазивных мероприятий. ¦Dicrocaelium dentricum;¦
¦ ¦Материал (дуоденальное ¦Fasciola spp.; ¦
¦ ¦содержимое) получают в ¦Necator americanus; ¦
¦ ¦результате зондирования. ¦Opisthorchis felineus; ¦
¦ ¦Пробы каждой из трех ¦Strongyloides ¦
¦ ¦фракций ("А", "В", "С") ¦stercoralis; ¦
¦ ¦собирают в отдельные чистые¦Trichostrongylus ¦
¦ ¦стеклянные химические или ¦colimbriformis; ¦
¦ ¦центрифужные пробирки, ¦Giardia lamblia; ¦
¦ ¦плотно закрывающиеся ¦Lamblia intestinalis; ¦
¦ ¦резиновой или ватно- ¦Cryptosporidium ¦
¦ ¦марлевой пробкой; в ¦parvum; ¦
¦ ¦одноразовую посуду с ¦Isospora spp. ¦
¦ ¦завинчивающейся крышкой. ¦ ¦
¦ ¦При использовании ¦ ¦
¦ ¦стеклянной посуды ¦ ¦
¦ ¦с ватно-марлевой пробкой ¦ ¦
¦ ¦следят за тем, чтобы не ¦ ¦
¦ ¦замочить пробку ¦ ¦
¦ ¦биоматериалом в процессе ¦ ¦
¦ ¦заполнения и ¦ ¦
¦ ¦транспортирования проб в ¦ ¦
¦ ¦лабораторию. Доставляют в ¦ ¦
¦ ¦лабораторию в ¦ ¦
¦ ¦полиэтиленовом пакете. ¦ ¦
¦ ¦Рекомендуется собирать ¦ ¦
¦ ¦материал методом менее ¦ ¦
¦ ¦инвазивным - Entero-Test ¦ ¦
¦ ¦Capsula (String Test - ¦ ¦
¦ ¦струнный тест): обследуемый¦ ¦
¦ ¦заглатывает желатиновую ¦ ¦
¦ ¦капсулу, внутри которой ¦ ¦
¦ ¦находится нейлоновая струна¦ ¦
¦ ¦и грузик; отдыхает 4 ч., ¦ ¦
¦ ¦после чего струну с ¦ ¦
¦ ¦адгезированными слизистой и¦ ¦
¦ ¦паразитами извлекают. ¦ ¦
¦ ¦Материал помещают в плотно ¦ ¦
¦ ¦закрывающийся ¦ ¦
¦ ¦завинчивающейся крышкой ¦ ¦
¦ ¦одноразовый контейнер (как ¦ ¦
¦ ¦правило, для сбора мочи), ¦ ¦
¦ ¦который немедленно ¦ ¦
¦ ¦доставляют в лабораторию в ¦ ¦
¦ ¦пластиковом пакете. ¦ ¦
¦ ¦При невозможности ¦ ¦
¦ ¦транспортировать материал в¦ ¦
¦ ¦лабораторию в контейнер ¦ ¦
¦ ¦добавляют около 1 мл ¦ ¦
¦ ¦физиологического раствора ¦ ¦
¦ ¦для предотвращения пробы от¦ ¦
¦ ¦высыхания ¦ ¦
+------------+---------------------------+-----------------------+
¦Аспират из ¦Собирают при наличии ¦Strongyloides ¦
¦12-перстной ¦эзофагоскопа, или Entero- ¦stercoralis, ¦
¦ кишки ¦Test Capsule (String Test -¦Giardia lamblia; ¦
¦ ¦струнный тест) ¦Cryptosporidium parvum;¦
¦ ¦немедлено направляют в ¦Isospora belli. ¦
¦ ¦лабораторию в плотно ¦В редких случаях - ¦
¦ ¦закрытом завинчивающейся ¦Clonorchis sinensis ¦
¦ ¦крышкой одноразовом ¦ ¦
¦ ¦контейнере (для сбора мочи)¦ ¦
¦ ¦или одноразовой плотно ¦ ¦
¦ ¦закрытой центрифужной ¦ ¦
¦ ¦пробирке, или определенным ¦ ¦
¦ ¦образом смонтированной ¦ ¦
¦ ¦стеклянной емкости. Емкости¦ ¦
¦ ¦с материалом помещают в ¦ ¦
¦ ¦пластиковый пакет ¦ ¦
+------------+---------------------------+-----------------------+
¦Слизь, ¦Собирают в процессе ¦Вышеперечисленные ¦
¦слизистая, ¦проведения ¦возбудители, ¦
¦фекалии ¦ректороманоскопии у постели¦преимущественно ¦
¦и/или комби-¦больного (в процедурном ¦Entamoeba histolytica, ¦
¦нация всех ¦кабинете) для немедленного ¦а также Shistostoma ¦
¦трех ¦просмотра (влажный мазок на¦mansoni; ¦
¦образцов; ¦чистом обезжиренном или ¦Balantidium coli; ¦
¦язвы ¦новом предметном стекле). ¦Trichomonas hominis; ¦
¦сигмовидной ¦Если пробу доставляют в ¦Trichinella spp. ¦
¦и ободочной ¦лабораторию, ее помещают в ¦ ¦
¦кишки ¦одноразовую емкость или ¦ ¦
¦ ¦специально смонтированную ¦ ¦
¦ ¦стеклянную с добавлением ¦ ¦
¦ ¦0,5-1,0 мл физиологического¦ ¦
¦ ¦раствора для предотвращения¦ ¦
¦ ¦от высыхания ¦ ¦
+------------+---------------------------+-----------------------+
¦Ткани - ¦Пробы тонкого кишечника. ¦Cryptosporidium parvum;¦
¦биоптаты ¦ ¦ ¦
¦рекомендует-¦Пробы тощей кишки. ¦Enterocytozoon ¦
¦ся ¦ ¦bieneusi; ¦
¦использовать¦ ¦ ¦
¦для ¦Толстая кишка. ¦Entamoeba histolytica; ¦
¦диагностики ¦ ¦Shistostoma mansoni и ¦
¦тканевых ¦ ¦spp.; ¦
¦паразитов ¦ ¦ ¦
¦ ¦Пробы 12-перстной кишки. ¦Giardia lamblia; ¦
¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦Биоптат прямой кишки ¦Entamoeba histolytica; ¦
¦ ¦ ¦Balantidium coli; ¦
¦ ¦ ¦Cryptosporidium parvum ¦
+------------+---------------------------+-----------------------+
¦Печень, ¦Аспираты и биоптаты органов¦Echinococcus spp.; ¦
¦селезенка ¦собирают в 4 (от каждого ¦Clonorchis spp., ¦
¦ ¦органа) отдельных ¦Opisthorchis spp.; ¦
¦ ¦одноразовых стерильных ¦Toxoplasma gondii; ¦
¦ ¦контейнера или другие ¦Leishmania donovani; ¦
¦ ¦стерильные емкости с ¦Cryptosporidium parvum;¦
¦ ¦герметично закрывающимися ¦Pneumocystis carinii; ¦
¦ ¦крышками, в которых ¦Entamoeba histolytica; ¦
¦ ¦доставляют в лабораторию. ¦Fasciola hepatica ¦
¦ ¦Пробы аспирата печени ¦ ¦
¦ ¦собирают с краев абсцесса, ¦ ¦
¦ ¦а не из некротического ¦ ¦
¦ ¦центра ¦ ¦
+------------+---------------------------+-----------------------+
¦Мочеполовая система: ¦
+------------T---------------------------T-----------------------+
¦Отделяемое ¦Собирают материал ¦Trichmonas vaginalis; ¦
¦влагалища, ¦платиновой петлей, ¦Shistostoma haemotobium¦
¦уретры, ¦хлопковым, вискозным или ¦ ¦
¦очага на ¦дакроновым зондом-тампоном,¦ ¦
¦пенисе, ¦или непосредственно с ¦ ¦
¦соскоб со ¦зеркала; готовят мазок на ¦ ¦
¦слизистой ¦предметном стекле, зонд- ¦ ¦
¦уретры, ¦тампон, смоченный ¦ ¦
¦эякулят ¦физиологическим раствором, ¦ ¦
¦ ¦помещают в пробирку пустую ¦ ¦
¦ ¦или со средами без угля ¦ ¦
¦ ¦(типа Эймса или Стюарта или¦ ¦
¦ ¦др.), отдельные высушенные ¦ ¦
¦ ¦на воздухе мазки - для ¦ ¦
¦ ¦исследования методом ¦ ¦
¦ ¦иммунофлуоресценции ¦ ¦
+------------+---------------------------+-----------------------+
¦Моча ¦Собирают первую порцию ¦Trichmonas vaginalis; ¦
¦ ¦свободно истекающей мочи в ¦ ¦
¦ ¦одноразовые контейнер или ¦ ¦
¦ ¦пробирку, у мужчин - после ¦ ¦
¦ ¦массажа простаты. ¦ ¦
¦ ¦Собирают среднюю порцию ¦Shistostoma haemotobium¦
¦ ¦свободно истекающей мочи, ¦ ¦
¦ ¦или пробу из суточной мочи,¦ ¦
¦ ¦собранной в одноразовые ¦ ¦
¦ ¦контейнер или пробирку. ¦ ¦
¦ ¦Среднюю порцию мочи ¦ ¦
¦ ¦собирают при мочеиспускании¦ ¦
¦ ¦с 12 до 15 ч. дня, т.к. на ¦ ¦
¦ ¦это время приходится пик ¦ ¦
¦ ¦выделения личинок паразита,¦ ¦
¦ ¦желательно собрать мочу ¦ ¦
¦ ¦после физической нагрузки ¦ ¦
¦ ¦(например, 20-30 ¦ ¦
¦ ¦приседаний). ¦ ¦
¦ ¦Собирают также последнюю ¦ ¦
¦ ¦порцию свободно истекающей ¦ ¦
¦ ¦мочи при наличии гематурии ¦ ¦
¦ ¦и обилия слизи. ¦ ¦
¦ ¦Паразиты определяют у ¦Микрофилярии, филярии ¦
¦ ¦больных с хилурией, с очень¦ ¦
¦ ¦тяжелой инфекцией, а также ¦ ¦
¦ ¦у пациентов, лечившихся ¦ ¦
¦ ¦диэтилкарбамазином ¦ ¦
+------------+---------------------------+-----------------------+
¦Биоптат ¦Пробу ткани собирают в ¦Microsporidia ¦
¦почки ¦стерильную одноразовую ¦ ¦
¦ ¦емкость с помощью ¦ ¦
¦ ¦стерильного тампона, ¦ ¦
¦ ¦пропитанного ¦ ¦
¦ ¦физиологическим раствором, ¦ ¦
¦ ¦после того, как этим же ¦ ¦
¦ ¦тампоном на стерильных ¦ ¦
¦ ¦предметных стеклах были ¦ ¦
¦ ¦приготовлены мазки для ¦ ¦
¦ ¦исследования ¦ ¦
+------------+---------------------------+-----------------------+
¦Центральная нервная система: ¦
+------------T---------------------------T-----------------------+
¦Ликвор ¦Пробы ликвора собирают в ¦Naegleria fowleri; ¦
¦ ¦стерильные одноразовые ¦Acanthamoeba и ¦
¦ ¦контейнер или стеклянную ¦Hartmanella spp.; ¦
¦ ¦пробирку. Передают материал¦Eshinococcus sp; ¦
¦ ¦в лабораторию ¦Toxoplasma gondii; ¦
¦ ¦ ¦Trypanosoma spp.; ¦
¦ ¦ ¦Tienia soleum ¦
+------------+---------------------------+-----------------------+
¦Биоптаты ¦Биоптаты мозга у больных и ¦Naegleria fowleri; ¦
¦ ¦кусочки ткани, полученные ¦Entamoeba histolytica; ¦
¦ ¦при аутопсии собирают в ¦Toxoplasma gondii; ¦
¦ ¦стерильные одноразовые ¦Microsporidia; ¦
¦ ¦(стеклянные) контейнер или ¦(Encephalitazoon ¦
¦ ¦пробирку, для ¦cuniculi) ¦
¦ ¦предотвращения от высыхания¦ ¦
¦ ¦добавляют несколько капель ¦ ¦
¦ ¦стерильного ¦ ¦
¦ ¦физиологического раствора и¦ ¦
¦ ¦направляют в лабораторию ¦ ¦
+------------+---------------------------+-----------------------+
¦Кровь ¦Для микроскопического ¦Plasmodium малярии; ¦
¦ ¦определения возбудителя ¦Babesia spp.; ¦
¦ ¦получают пробы крови из ¦Leishmania donovani; ¦
¦ ¦пальца, сразу же готовят ¦Toxonlasma gondii; ¦
¦ ¦толстый и тонкий мазки на ¦Trypanosoma cruzi; ¦
¦ ¦чистом, обезжиренном или ¦Microfilariae ¦
¦ ¦новом предметном стекле. ¦Echinococcus sp; ¦
¦ ¦Кровь, собранную у пациента¦Toxocara sp; ¦
¦ ¦натощак при венопункции, ¦Opistorchis felineus; ¦
¦ ¦помещают в 2 стерильные ¦Trichinella sp; ¦
¦ ¦пробирки по 5-7 мл в каждую¦Toxoplasma sp; ¦
¦ ¦(стеклянные, закрывающиеся ¦Cistecercos sp ¦
¦ ¦резиновой пробкой, или ¦ ¦
¦ ¦одноразовые с плотно ¦ ¦
¦ ¦закрывающейся пробкой): ¦ ¦
¦ ¦- в одну пробирку с ¦ ¦
¦ ¦антикоагулянтом (ЭДТА, ¦ ¦
¦ ¦гепарин, цитрат натрия); ¦ ¦
¦ ¦- во вторую пробирку без ¦ ¦
¦ ¦антикоагулянта для ¦ ¦
¦ ¦определения антител к ¦ ¦
¦ ¦антигенам гельминтов. ¦ ¦
¦ ¦Емкости с пробами маркируют¦ ¦
¦ ¦и направляют в лабораторию ¦ ¦
+------------+---------------------------+-----------------------+
¦Костный мозг¦Аспират собирают в ¦Leishmania donovani; ¦
¦ ¦стерильные одноразовые ¦Trypanosoma cruzi ¦
¦ ¦(стеклянные) контейнер или ¦ ¦
¦ ¦пробирку и направляют в ¦ ¦
¦ ¦лабораторию ¦ ¦
+------------+---------------------------+-----------------------+
¦Нижние дыхательные пути: ¦
+------------T---------------------------T-----------------------+
¦Мокрота ¦Пробу собирают после ¦Paragonismus sp; ¦
¦откашливае- ¦объяснения пациенту ¦Stronguloides ¦
¦мая ¦необходимости почистить ¦stercoralis; ¦
¦ ¦зубы, прополоскать рот ¦Cryptosporidium parvum;¦
¦ ¦теплой кипяченой водой и не¦Pneumocystis carinii; ¦
¦ ¦собирать слюну. В пробу ¦Ascaris lumbricoides; ¦
¦ ¦включают любые кровянистые ¦Tominx aerophylus; ¦
¦ ¦прожилки, включения, слизь.¦Ancylostoma sp; ¦
¦ ¦Доставляют в лабораторию в ¦Necator sp ¦
¦ ¦чистом одноразовом ¦ ¦
¦ ¦контейнере с ¦ ¦
¦ ¦завинчивающейся крышкой или¦ ¦
¦ ¦в соответствующим образом ¦ ¦
¦ ¦смонтированной стеклянной ¦ ¦
¦ ¦емкости ¦ ¦
+------------+---------------------------+-----------------------+
¦Мокрота ¦Индуцирование необходимо, ¦Pneumocystis carinii - ¦
¦индуцирован-¦так как у больных с ¦наиболее полезны у ВИЧ-¦
¦ная ¦пневмоцистной пневмонией ¦инфицированных, у ¦
¦ ¦обычно сухой, ¦других даже при наличии¦
¦ ¦непродуктивный кашель. ¦лихорадки, пневмоцисты ¦
¦ ¦Пробу собирают после ¦определяют существенно ¦
¦ ¦проведения пациентом ¦реже ¦
¦ ¦гигиены рта - см. выше. ¦ ¦
¦ ¦Доставляют в лабораторию - ¦ ¦
¦ ¦см. выше ¦ ¦
+------------+---------------------------+-----------------------+
¦Лаваж, ¦Пробы собирают с помощью ¦Pneumocystis carinii; ¦
¦альвеолярная¦бронхоскопа ¦Toxoplasma gondii; ¦
¦жидкость, ¦(предпочтительнее лаваж) в ¦Cryptosporidium parvum;¦
¦смывы с ¦специальный стерильный ¦Paragonismus ¦
¦бронхов ¦одноразовый контейнер с ¦westermanii; ¦
¦ ¦завинчивающейся крышкой или¦Trichinella spp. ¦
¦ ¦специально смонтированную ¦ ¦
¦ ¦стерильную стеклянную ¦ ¦
¦ ¦посуду ¦ ¦
+------------+---------------------------+-----------------------+
¦Аспираты ¦Пробы, собранные тонкой ¦Pneumocystis carinii; ¦
¦трансброн- ¦иглой, наносят на чистое, ¦Toxoplasma gondii; ¦
¦хиальные, ¦обезжиренное или новое ¦Paragonismus ¦
¦трахеоброн- ¦предметное стекло, готовят ¦westermanii; ¦
¦хиальные, ¦мазки, высушивают на ¦Trichinella spp.; ¦
¦легких ¦воздухе, упаковывают и ¦Cryptosporidium parvum;¦
¦ ¦направляют в лабораторию ¦Entamoeba histolytica ¦
+------------+---------------------------+-----------------------+
¦Биоптаты ¦Пробы бронхов, полученные ¦Полезны для диагностики¦
¦ ¦специальной щеточкой, или ¦тканевых паразитов как ¦
¦ ¦легкого, полученные во ¦дополнение к ¦
¦ ¦время операции, наносят на ¦стандартным ¦
¦ ¦чистое обезжиренное или ¦гистологическим ¦
¦ ¦новое предметное стекло, ¦исследованиям: ¦
¦ ¦готовят мазки, высушивают ¦Pneumocystis carinii; ¦
¦ ¦на воздухе, упаковывают и ¦Toxoplasma gondii; ¦
¦ ¦доставляют в лабораторию. ¦Paragonismus ¦
¦ ¦Для культивирования ¦westermanii; ¦
¦ ¦паразитов пробы собирают в ¦Entamoeba histolytica; ¦
¦ ¦специальные контейнеры ¦Echinococcus sp; ¦
¦ ¦(консультируйтесь с ¦Strongoloides ¦
¦ ¦паразитологом!) ¦stercoralis; ¦
¦ ¦ ¦Trichinella spiralis ¦
+------------+---------------------------+-----------------------+
¦Глаза: ¦
+------------T---------------------------T-----------------------+
¦Биоптаты, ¦Пробы собирают в стерильные¦Acanthamoeba spp.; ¦
¦соскобы с ¦емкости одноразовые или ¦Naegleria fowleri; ¦
¦роговицы и ¦стеклянные, специально ¦Microsporidium spp.; ¦
¦конъюнктивы;¦смонтированные, герметично ¦Филярии; ¦
¦линзы ¦закрывающиеся. ¦Toxoplasma gondii; ¦
¦ ¦Для предотвращения ¦Nosema sp ¦
¦ ¦высыхания добавляют ¦ ¦
¦ ¦несколько капель ¦ ¦
¦ ¦стерильного ¦ ¦
¦ ¦физиологического раствора. ¦ ¦
¦ ¦Доставляют в лабораторию. ¦ ¦
+------------+---------------------------+-----------------------+
¦Смыв с линзы¦Собирают в стерильные ¦ ¦
¦ ¦емкости одноразовые или ¦ ¦
¦ ¦специально смонтированные ¦ ¦
¦ ¦стеклянные, герметично ¦ ¦
¦ ¦закрывающиеся. Доставляют в¦ ¦
¦ ¦лабораторию ¦ ¦
+------------+---------------------------+-----------------------+
¦Кожа, ткани: ¦
+------------T---------------------------T-----------------------+
¦Основание ¦Аспират собирают в ¦Leishmania spp. ¦
¦(дно) язвы ¦стерильные емкости; ¦ ¦
¦ ¦параллельно готовят ¦ ¦
¦ ¦мазки на чистом ¦ ¦
¦ ¦обезжиренном или новом ¦ ¦
¦ ¦предметном стекле; материал¦ ¦
¦ ¦передают в лабораторию ¦ ¦
+------------+---------------------------+-----------------------+
¦Биоптаты ¦Собирают в стерильные ¦Leishmania sp; ¦
¦тканей ¦емкости одноразовые или ¦Onchocerca volvulus; ¦
¦(подкожные ¦стеклянные, специально ¦Mansonella ¦
¦узлы, ¦смонтированные, герметично ¦streptocerca; ¦
¦клетчатка; ¦закрывающиеся; для ¦Trichinella spiralis; ¦
¦фасции; ¦предотвращения от высыхания¦Paragonismus ¦
¦икроножные, ¦добавляют стерильный ¦westermanii; ¦
¦дельтовидные¦физиологический раствор. ¦ ¦
¦мышцы; ¦Доставляют материал в ¦Trypanosoma cruzi; ¦
¦диафрагма; ¦лабораторию ¦Tienia solium ¦
¦кожа) ¦ ¦ ¦
+------------+---------------------------+-----------------------+
¦Соскоб с ¦Собирают асептически в ¦Onchocerca vulvulus; ¦
¦поверхност- ¦специальную стерильную ¦Mansonella ¦
¦ных ¦емкость одноразовую или ¦streptocerca ¦
¦поражений ¦стеклянную, специально ¦ ¦
¦кожи ¦смонтированную, герметично ¦ ¦
¦ ¦закрывающуюся; добавляют ¦ ¦
¦ ¦стерильный физиологический ¦ ¦
¦ ¦раствор для предотвращения ¦ ¦
¦ ¦высыхания; параллельно ¦ ¦
¦ ¦готовят мазки на чистом, ¦ ¦
¦ ¦обезжиренном или новом ¦ ¦
¦ ¦предметном стекле. ¦ ¦
¦ ¦Доставляют материал в ¦ ¦
¦ ¦лабораторию ¦ ¦
L------------+---------------------------+------------------------
8. Пробы биоматериала и иммуносерологические методы
определения возбудителей инфекционно-воспалительных процессов
8.1. Общие положения
Проведение иммуносерологических исследований основано на
применении технологических приемов (методик), позволяющих
определять специфические антигены возбудителей инфекционных, и
инфекционно-воспалительных заболеваний, и/или вводимых при
вакцинации, и ответной реакции на них организма образованием
антител. Это необходимо для объективизации клинического диагноза,
результатов терапии, оценки качества вакцинации, своевременной
организации и проведения противоэпидемических мероприятий.
Тест-системы, предназначенные для определения специфических
антигенов, используются для идентификации конкретного
микроорганизма в пробе клинического материала или выращенного in
vitro.
С помощью методов, предназначенных для определения антител,
дается характеристика ответа организма (человека) на конкретный
антиген без учета или с учетом специфического класса
иммуноглобулинов (Ig), в котором они находятся. IgM-ранние
антитела (4-7 сут. от первичного инфицирования микроорганизмами),
IgG-поздние антитела, которые (в зависимости от антигена) могут
находиться в организме от 5-7 суток до 3-4 недель (период
реконвалесценции) и даже всю жизнь. Сывороточные IgA при всей их
вариабельности по срокам образования (11-15 суток) и персистенции
в организме (до 30 суток) отражают не столько реакцию на
конкретный бактериальный антиген, сколько на деструкцию органа,
обусловленную воспалительным процессом микробной этиологии.
Уровень секреторного IgA - прогностический признак вероятности
развития инфекции на слизистых оболочках при нарушениях
микроэкологии, т.е. микробиологического аспекта системы
антиинфекционной резистентности (САИР), а также вероятности
проникновения (транслокации) возбудителя в другие органы и ткани.
Уровень IgE антител увеличивается в ответ на паразитарные
инфекции, но специфическая реакция на другие инфекционные агенты в
этом классе Ig отсутствует.
Возникновение инфекционного и инфекционно-воспалительного
заболевания, течение патологического процесса и эффективность
терапии в большой степени зависят от состояния защитных сил
организма, т.е. от факторов системы антиинфекционной
резистентности, в частности, в ее иммунологическом аспекте.
Нарушения в синтезе и функциональной активности терминальных
компонентов каскада комплемента (мембран-атакующего комплекса) -
фактор, предрасполагающий к развитию рецидивирующих нейссериальных
(N. gonorrhoeae) инфекций. Мутация в рецепторе гамма-интерферона -
основа тяжелейшей диссеминированной микобактериальной инфекции и
фатального исхода от Mycobacterium bovis - основы
противотуберкулезной вакцины Кальмет-Герена. Полиморфизм генов
человека - основа устойчивости к малярии, а врожденное отсутствие
некоторых эритроцитарных антигенов среди определенной человеческой
субпопуляции определяет их абсолютную устойчивость к парвовирусам.
Недостаточность или нарушения в функционировании бактерицидных
систем в клетке нейтрофила и/или в целом в процессе фагоцитоза -
основа развития воспалительного процесса, вызванного условно-
патогенными микроорганизмами. В настоящее время имеется
возможность определения и подсчета количества В-лимфоцитов,
активирующих плазменные клетки, образующие антитела, с
паралллельным определением специфических антигенов. Для этого
используют пробу периферической крови, в которой также определяют
вирусы лихорадки Денге, гриппа, респираторно-сенсициального,
вируса иммунодефицита человека (ВИЧ).
Учитывая важность иммунологического и микробиологического
аспектов системы антиинфекционной резистентности организма в
развитии и течении инфекционно-воспалительных процессов, в т.ч.
внутрибольничной природы, в научно-практических лабораториях
рекомендуется проводить комплексные клинико-микробиологические и
иммуносерологические обследования.
8.2. Иммуносерологическое обследование
Иммуносерологическое обследование включает определение:
- антител к эндо- и экзотоксинам, клеточной стенке и ее
компонентам микробов-возбудителей воспалительных процессов;
- С-реактивного белка (СРБ) и других белков острой фазы как
показателей наличия и активности воспаления инфекционной природы;
- бактерицидной активности сыворотки (БАС) и/или других
жидкостей тела с аутоштаммами пациента; этот тест до назначения
антибактериальной терапии свидетельствует о состоянии комплекса
гуморальных факторов защиты организма, при наличии
антибактериальной терапии позволяет проводить мониторинг ее
активности;
- иммуноглобулинов М, G, А классов в сыворотке крови и других
жидкостях организма как показателя остроты и длительности
инфекционно-воспалительного процесса, способности обследованного
реагировать на возбудитель, а также как необходимых компонентов,
участвующих в фагоцитозе нейтрофилов в качестве опсонинов (IgM,
IgG) и показателя наличия деструкции органа (IgA) в результате
воспаления;
- активности комплемента и его компонентов в качестве
субстанции, приводящей к лизису клетки микроорганизма, если
комплекс антиген-антитело находится на ее поверхности, и как
инициатора выброса нейтрофилов, если комплекс находится в тканях,
а также как опсонина;
- лизоцима как показателя состояния лейкоцитов, способности
организма к лизису грамположительных кокков и в крови - Е. coli;
- фагоцитарной функции нейтрофилов в незавершенном и
завершенном вариантах с контрольными и аутоштаммами, выделенными
из очага воспаления;
- В-лимфоцитов, учитывая их способность к дифференциации в
плазменные клетки и образованию специфических антител в различных
классах иммуноглобулинов;
- Т-лимфоцитов и их субпопуляций как контролирующих активность
В-лимфоцитов и реагирующих с клетками с более низкой степенью
специфичности, чем те, с которыми реагируют цитотоксические Т-
лимфоциты.
Стерильную посуду для сбора проб и их транспортирования (кровь
и другие жидкости организма обследованных) накануне получают в
лаборатории.
Иммуносерологические исследования проводят параллельно с
микробиологическими, анализирующими материал из очага воспаления,
обсемененность слизистой верхних дыхательных путей (нос, зев),
гениталий и содержимого кишечника.
Все пробы готовят в один и тот же день: при поступлении,
накануне операции или с операционного стола (до операции), на 3-4-
е сутки после операции (2-3-е сутки после госпитализации у
терапевтических больных), на 14-16-е сутки после операции (после
госпитализации терапевтических больных), перед выпиской из
стационара или в сроки, оговоренные клиницистами.
Комплексные исследования с анализом проводят с целью изучения
патогенеза воспалительного процесса определенной локализации,
вызванного условно-патогенной микрофлорой, которые позволяют
установить нарушения в системе антиинфекционной резистентности
организма, определить возможность развития внутрибольничной
инфекции и реакцию на нее конкретного больного, а также
способность пациента реагировать на определенный возбудитель
(возбудители), проводить мониторинг эффективности
антибактериальной и специфической иммунотерапии и других лечебных
мероприятий.
8.3. Методы исследования, применяемые в иммуносерологии
Выбор оптимального метода определения антигенов и антител
зависит от соответствия собранной пробы целям и задачам
исследования (сроки от начала заболевания, отсутствие гемолиза и
липолиза пробы, контаминации посторонней микрофлорой) и требований
к спектру исследований, которые могут быть выполнены в конкретной
лаборатории.
Используют следующие методы исследования:
Реакция агглютинации - используют для подтверждения наличия
инфекции, вызванной определенным бактериальным антигеном.
Непрямая (пассивная) гемагглютинация (РПГА) с латексными
частицами или эритроцитами барана - используют для определения
наличия антител к возбудителям кишечных инфекций, в модификации с
использованием латексных частиц (диагностикумов) - для диагностики
бактериальных менингитов, определения антигенов Candida,
гонококков, гемофильной палочки.
Ингибиция гемагглютинации - модифицированная РПГА, используют
для определения антител к вирусам краснухи, гриппа, парагриппа,
респираторно-синцитиального.
Преципитация - реакция между растворимыми антигенами и
антителами, используют метод диффузии в геле.
Радиальная иммунодиффузия - определение анигенов или антител в
моноспецифической системе с чувствительностью 1-10 мг/л,
используют для сравнения антигенов (чувствительность - несколько
наннограмм/мл).
Электроиммунодиффузия - подобна радиальной, но миграция
реагентов направляется электрическим полем, и ее чувствительность
в 5-10 раз выше, чем в радиальной иммунодиффузии.
Быстрые методы определения антигена и антител (15-20 мин.) -
основаны на использовании коллоидных, меченых золотом антител.
Определяют антитела к ВИЧ и антиген хламидии трахоматис.
Диагностику лихорадки Денге осуществляют с помощью
иммунохроматографического определения сывороточных IgM и IgG.
Методы с меченными антителами - специфичные
высокочувствительные методы для определения антигенов в клетках и
тканях: прямая (ПИФ) и непрямая (НИФ) иммунофлуоресценция, а
также антигенов микроорганизмов. Используют для определения
кластеров дифференциации и антигенов на поверхности лимфоцитов.
Можно определять антигены в мазке материала (инфекции,
передаваемые половым путем). С использованием прямой
иммунофлуоресценции определяют антиген в количестве не менее
5
10 микробных тел. Непрямая иммунофлюоресценция в 5-10 раз
чувствительнее, чем прямая.
125
Радиоиммунологические (метка - I) исследования (РИА) и
ELISA-ИФА (метка-фермент: пероксидаза хрена) - каждый из методов
используют для количественного определения конкретного антигена в
растворе даже при наличии смеси антигенов. Применяют для
идентификации вирусов (герпес симплекс, ЦМВ, герпес зостер),
возбудителей коклюша (Bordetella pertussis), бруцеллеза (Brucella
abortus) в мазке материала - пневмонии (Legionella pneumophyliae,
Mycoplasma pneumoniae), болезни Лайма (Borrelia burgdoferi),
сифилиса (Т. pallidum), ИППП (Chlamidia spp., Ureaplasma spp.),
кишечных инфекций (Salmonella spp., Shigella spp.), Streptococcus
rp. A, Toxoplasma gondii, Helicobacter pylori - в крови.
Чувствительность методов - 1-2 нг/мл. Альтернативный метод -
иммуноблоттинг, используемый для мониторирования инфекций,
вызванных ВИЧ, вирусами гепатита, Т. pallidum, Borrelia burgdoferi
(чувствительность - 1-2 нг/мл) и других.
Мечеными конъюгатами определяют и мониторируют ответ (выработка
антител) на антигены вирусов (ВИЧ, ЦМВ, герпес симплекс, герпес
зостер), Т. pallidum, В. burgdoferi.
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) и различные модификации на ее
основе (методы гибридизации ДНК и РНК) - основана на замене
биологической амплификации (накопление клеток микроорганизма при
культивировании in vitro) на ферментативную (энзиматическую)
амплификацию специфических последовательностей нуклеиновых кислот
возбудителя. Гибридизация нуклеиновых кислот возбудителя позволяет
определять гены, ответственные за антибиотикорезистентность,
наличие в биопробе медленно растущих и требующих особых условий
культивирования микроорганизмов (например, легионеллы и
микобактерии), тех, которые невозможно культивировать in vitro
(возбудитель болезни Уиппла-Tropheryma whippelii и др.).
8.4. Сбор и хранение образцов для ПЦР-диагностики
Материалом для исследования служат: соскоб из уретры,
цервикального канала, заднего свода влагалища, секрет
предстательной железы, сперма, моча, мазки с конъюнктивы.
8.4.1. Сбор материала (соскоб из урогенитального тракта) у
женщин. Соскобы производят из трех различных точек: цервикальный
канал, уретра, задний свод влагалища. При необходимости материал
для исследования берут из эрозивно-язвенных поражений. Сбор
материала производят отдельными одноразовыми стерильными зондами.
8.4.1.1. Сбор материала из цервикального канала. Удаляют слизь
с поверхности шейки матки тампоном, вводят зонд в цервикальный
канал на 1,0-1,5 см и вращают его в течение 3-5 с. Извлекают зонд,
избегая касания стенок влагалища, и помещают его в стерильную
одноразовую пробирку с транспортировочной средой (0,3 мл).
Погрузив рабочую часть зонда в транспортировочную среду, вращают
зонд в течение 10-15 с., избегая разбрызгивания раствора. Вынимают
зонд из раствора, прижимая его к стенке пробирки и, отжав избыток
жидкости, удаляют зонд и закрывают пробирку.
8.4.1.2. Сбор материала из уретры. Перед забором соскоба из
уретры необходимо обработать ее наружное отверстие тампоном,
смоченным стерильным физиологическим раствором. Производят массаж
уретры пальцем со стороны влагалища, прижимая ее к лобковой кости.
Вводят зонд в уретру на глубину 1,0-1,5 см и аккуратно, не поранив
слизистую, несколькими вращательными движениями производят соскоб
эпителиальных клеток и переносят зонд в пробирку с
транспортировочной средой (0,3 мл). Погрузив рабочую часть зонда в
транспортировочную среду, вращают зонд в течение 1,0-15 с.,
избегая разбрызгивания раствора. Вынимают зонд из раствора,
прижимая его к стенке пробирки и, отжав избыток жидкости, удаляют
зонд и закрывают пробирку.
8.4.1.3. Сбор материала из заднего свода влагалища. В случае
избытка слизи и обильных выделений их удаляют стерильным ватным
тампоном. Проводят зондом по поверхности слизистой в области
заднего свода влагалища и эктоцервикса и переносят зонд в пробирку
с транспортировочной средой (0,3 мл). Погрузив рабочую часть зонда
в транспортировочную среду, вращают зонд в течение 10-15 с.,
избегая разбрызгивания раствора. Вынимают зонд из раствора,
прижимая его к стенке пробирки и, отжав избыток жидкости, удаляют
зонд и закрывают пробирку.
8.4.2. Сбор материала (соскоб из урогенитального тракта) у
мужчин.
8.4.2.1. Сбор материала из уретры. Перед сбором соскоба из
уретры необходимо обработать головку полового члена в области
наружного отверстия уретры тампоном, смоченным стерильным
физиологическим раствором. Производят массаж уретры. При наличии
свободно стекающих из уретры выделений удаляют их сухим тампоном.
Вводят зонд в уретру на глубину 3-4 см. Несколькими вращательными
движениями производят соскоб эпителиальных клеток и переносят зонд
в пробирку с транспортировочной средой. Погрузив рабочую часть
зонда в транспортировочную среду, вращают зонд в течение 10-15 с.,
избегая разбрызгивания раствора. Вынимают зонд из раствора,
прижимая его к стенке пробирки и, отжав избыток жидкости, удаляют
зонд и закрывают пробирку.
8.4.2.2. Сбор секрета предстательной железы может быть
осуществлен двумя способами:
- первый - после окончания массажа предстательной железы ее
секрет в количестве 0,5-1,0 мл собирают в одноразовую стерильную
пробирку объемом 1,5 мл;
- второй - при невозможности получить секрет сразу после
массажа собирают первую порцию мочи (в которой содержится секрет
предстательной железы) в количестве 10 мл (см. правила забора
мочи).
8.4.2.3. Сбор спермы осуществляют в стерильные одноразовые
флаконы или пробирки.
8.4.3. Сбор проб мочи. Для анализа отбирают первую порцию
утренней мочи в количестве не меньше 20-40 мл в специальный сухой
стерильный флакон или сухую стерильную пробирку.
8.4.4. Сбор проб с конъюнктивы. Сбор пробы осуществляют сухими
стерильными ватными тампонами под местной анастезией (2 капли
раствора дикаина или инокаина). Оттянув нижнее веко, вращающими
движениями провести зонд 4-5 раз по конъюнктиве, захватывая
внешний и внутренний углы глаза. После забора материала тампон
(рабочую часть зонда с ватным тампоном) помещают в стерильную
одноразовую пробирку с транспортировочной средой. Погрузив рабочую
часть зонда в транспортировочную среду, вращают зонд в течение 10-
15 с., избегая разбрызгивания раствора. Вынимают зонд из раствора,
прижимая его к стенке пробирки и, отжав избыток жидкости, удаляют
зонд и закрывают пробирку.
8.5. Сбор проб для диагностики сифилиса
8.5.1. Влажные поражения: удаляют корочку с очага, далее
необходимо промокнуть любой экссудат вторичной инфекции стерильной
марлевой салфеткой, придавливают основание очага для накопления
тканевой жидкости на его поверхности, прикладывают обезжиренное
или новое предметное стекло к экссудату или собирают жидкость
стерильной бактериологической (одноразовой или металлической,
обожженной в пламени спиртовки и остуженной на воздухе) петлей и
переносят жидкость на стекло, готовят мазки.
8.5.2. Сухие поражения кожи: осторожно удаляют поверхностный
слой кожи с помощью стерильных скальпеля, кончика иглы или
проводят механическую экскориацию, прижимают очаг, если это
необходимо, и собирают экссудат (см. выше). Материал можно
собрать, введя в основание очага небольшое количество стерильного
небактериостатического физиологического раствора, отсасывают
жидкость шприцем с тонкой иглой, готовят мазок (см. выше).
8.5.3. Цервикально-вагинальные очаги: пробу собирают, используя
|
