|
Стр. 5
¦ ¦эти вещества влияют на процесс ¦vermicularis; ¦
¦ ¦идентификации паразитов. Барий ¦Fasciola hepatica;¦
¦ ¦окрашивает фекалии в светлые ¦Metagonimus ¦
¦ ¦тона или белый цвет; железо, ¦jokogawai; ¦
¦ ¦активированный уголь и некоторые¦Nanophyetus ¦
¦ ¦антидиарейные препараты могут ¦shikhobalowi; ¦
¦ ¦приводить к появлению темных или¦Necator ¦
¦ ¦черных (дегтеобразных) фекалий и¦americanus; ¦
¦ ¦маскировать кровотечение в верх-¦Opisthorchis ¦
¦ ¦них отделах желудочно-кишечного ¦felineus; ¦
¦ ¦тракта; желтоватые фекалии - ¦Paragonimus spp. -¦
¦ ¦показатель мальабсорбции и часто¦можно обнаружить ¦
¦ ¦метка присутствия Giardia ¦Shistostoma ¦
¦ ¦lamblia ¦mansoni a. spp.; ¦
¦ ¦ ¦Strongyloides ¦
¦ ¦ ¦stercoralis, ¦
¦ ¦ ¦fuellebomi ¦
+------------+--------------------------------+------------------+
¦ ¦Посуду для сбора пробы получают ¦Tominx aerophilus;¦
¦ ¦в лаборатории. Это - чистая ¦Trichostrongylidae¦
¦ ¦(прокипяченная) сухая стеклянная¦spp.; ¦
¦ ¦банка или одноразовая с широким ¦Balantidium coli; ¦
¦ ¦горлом и плотно закрывающимися ¦Cryptosporidium ¦
¦ ¦крышками. Стерильная посуда ¦parvum; ¦
¦ ¦требуется для исследования на ¦Entamoeba coli, ¦
¦ ¦амебиаз. ¦hartmanni, ¦
¦ ¦Фекалии - утреннюю порцию - пос-¦histolytica; ¦
¦ ¦ле дефекации собирают в посуду ¦Isospora spp.; ¦
¦ ¦из разных участков в объеме от ¦Lamblia ¦
¦ ¦чайной до столовой ложки (не ¦intestinalis ¦
¦ ¦менее 50 г). Избегают контамина-¦ ¦
¦ ¦ции пробы мочой и/или водой. ¦ ¦
¦ ¦Пробы доставляют в лабораторию в¦ ¦
¦ ¦полиэтиленовом мешке не позднее ¦ ¦
¦ ¦1 - 2 ч после дефекации. При ¦ ¦
¦ ¦отсутствии возможности доставки ¦ ¦
¦ ¦пробы в лабораторию в указанные ¦ ¦
¦ ¦сроки или ее исследования в день¦ ¦
¦ ¦дефекации получают посуду с кон-¦ ¦
¦ ¦сервантом, в которую собирают ¦ ¦
¦ ¦пробу. ¦ ¦
¦ ¦Материал хранят при температуре ¦ ¦
¦ ¦4 - 8 -С ¦ ¦
+------------+--------------------------------+------------------+
¦Перианальная¦В подготовку обследуемого вклю- ¦Enterobios ¦
¦область ¦чают инструктаж (если обследуют ¦vermicularis; ¦
¦ ¦ребенка, то инструктируют роди- ¦Entamoeba ¦
¦ ¦телей) по правилам сбора мате- ¦histolytica - в ¦
¦ ¦риала и доставке его в лабора- ¦соскобах с язв пе-¦
¦ ¦торию, предупреждение о необхо- ¦рианальной области¦
¦ ¦димости сбора проб рано утром, ¦ ¦
¦ ¦когда пациент только проснулся, ¦ ¦
¦ ¦до дефекации и душа (обследуе- ¦ ¦
¦ ¦мому не следует подмываться или ¦ ¦
¦ ¦принимать душ и вечером накануне¦ ¦
¦ ¦отбора пробы - соскоба с периа- ¦ ¦
¦ ¦нальных складок), т.к. паразиты ¦ ¦
¦ ¦откладывают яйца на коже в тече-¦ ¦
¦ ¦ние ночи. ¦ ¦
¦ ¦Посуду накануне получают в лабо-¦ ¦
¦ ¦ратории: одноразовую пробирку с ¦ ¦
¦ ¦тампоном (тубсером) или чистую ¦ ¦
¦ ¦специально смонтированную стек- ¦ ¦
¦ ¦лянную пробирку с ватным тампо- ¦ ¦
¦ ¦ном, смоченным в глицерине; или ¦ ¦
¦ ¦тампоном на шпателе, смоченным в¦ ¦
¦ ¦глицерине; или другую специально¦ ¦
¦ ¦подготовленную чистую стеклянную¦ ¦
¦ ¦посуду; или (особенно при массо-¦ ¦
¦ ¦вых обследованиях населения, в ¦ ¦
¦ ¦основном, детского) чистые пред-¦ ¦
¦ ¦метные стекла с липкой лентой. ¦ ¦
¦ ¦Утром собирают соскоб с периа- ¦ ¦
¦ ¦нальных складок вокруг ануса ¦ ¦
¦ ¦методом "смыва" указанными выше ¦ ¦
¦ ¦тубсерами, тампонами, шпателями ¦ ¦
¦ ¦или методом "отпечатка" с по- ¦ ¦
¦ ¦мощью липкой ленты. В последнем ¦ ¦
¦ ¦случае перед взятием соскоба ¦ ¦
¦ ¦отклеивают полоски липкой ленты ¦ ¦
¦ ¦от предметного стекла; держа ¦ ¦
¦ ¦полоску за концы, плотно прижи- ¦ ¦
¦ ¦мают всей липкой поверхностью к ¦ ¦
¦ ¦анусу и касаясь пальцами периа- ¦ ¦
¦ ¦нальной области. Отклеивают ¦ ¦
¦ ¦полоску от кожи перианальной ¦ ¦
¦ ¦области и переносят на предмет- ¦ ¦
¦ ¦ное стекло липким слоем вниз, ¦ ¦
¦ ¦приклеивают к стеклу равномерно ¦ ¦
¦ ¦для избежания образования пу- ¦ ¦
¦ ¦зырьков воздуха, мешающих микро-¦ ¦
¦ ¦скопии. Концы ленты, выходящие ¦ ¦
¦ ¦за края стекла, отрезают. ¦ ¦
¦ ¦После сбора пробы тубсеры, там- ¦ ¦
¦ ¦поны и шпатели помещают обратно ¦ ¦
¦ ¦в соответствующие пробирки или ¦ ¦
¦ ¦во флаконы. Пробирки, флаконы, ¦ ¦
¦ ¦предметные стекла маркируют и ¦ ¦
¦ ¦передают в лабораторию ¦ ¦
+------------+--------------------------------+------------------+
¦Содержимое ¦Подготовку обследуемого осущест-¦Ancylostoma ¦
¦12-перстной ¦вляют в соответствии с правилами¦duodenale; ¦
¦кишки ¦проведения инвазивных мероприя- ¦Clonorchis ¦
¦ ¦тий. ¦sinensis - очень ¦
¦ ¦Материал (дуоденальное содержи- ¦редко; ¦
¦ ¦мое) получают в результате зон- ¦Dicrocaelium ¦
¦ ¦дирования. Пробы каждой из трех ¦dentricum; ¦
¦ ¦фракций ("А", "В", "С") собирают¦Fasciola spp.; ¦
¦ ¦в отдельные чистые стеклянные ¦Necator ¦
¦ ¦химические или центрифужные ¦americanus; ¦
¦ ¦пробирки, плотно закрывающиеся ¦Opisthorchis ¦
¦ ¦резиновой или ватно-марлевой ¦felineus; ¦
¦ ¦пробкой; в одноразовую посуду с ¦Strongyloides ¦
¦ ¦завинчивающейся крышкой. При ¦stercoralis; ¦
¦ ¦использовании стеклянной посуды ¦Trichostrongylus ¦
¦ ¦с ватно-марлевой пробкой следят ¦colimbriformis; ¦
¦ ¦за тем, чтобы не замочить пробку¦Giardia lamblia; ¦
¦ ¦биоматериалом в процессе запол- ¦Lamblia ¦
¦ ¦нения и транспортирования проб в¦intestinalis; ¦
¦ ¦лабораторию. Доставляют в лабо- ¦Cryptosporidium ¦
¦ ¦раторию в полиэтиленовом пакете.¦parvum; ¦
¦ ¦Рекомендуется собирать материал ¦Isospora spp. ¦
¦ ¦методом менее инвазивным - ¦ ¦
¦ ¦Entero-Test Capsula (String Test¦ ¦
¦ ¦- струнный тест): обследуемый ¦ ¦
¦ ¦заглатывает желатиновую капсулу,¦ ¦
¦ ¦внутри которой находится нейло- ¦ ¦
¦ ¦новая струна и грузик; отдыхает ¦ ¦
¦ ¦4 ч, после чего струну с адгези-¦ ¦
¦ ¦рованными слизистой и паразитами¦ ¦
¦ ¦извлекают. Материал помещают в ¦ ¦
¦ ¦плотно закрывающийся завинчиваю-¦ ¦
¦ ¦щейся крышкой одноразовый кон- ¦ ¦
¦ ¦тейнер (как правило, для сбора ¦ ¦
¦ ¦мочи), который немедленно дос- ¦ ¦
¦ ¦тавляют в лабораторию в пласти- ¦ ¦
¦ ¦ковом пакете. ¦ ¦
¦ ¦При невозможности транспортиро- ¦ ¦
¦ ¦вать материал в лабораторию в ¦ ¦
¦ ¦контейнер добавляют около 1 мл ¦ ¦
¦ ¦физиологического раствора для ¦ ¦
¦ ¦предотвращения пробы от высыха- ¦ ¦
¦ ¦ния ¦ ¦
+------------+--------------------------------+------------------+
¦Аспират из ¦Собирают при наличии эзофагос- ¦Strongyloides ¦
¦12-перстной ¦копа, или Entero-Test Capsule ¦stercoralis; ¦
¦кишки ¦(String Test - струнный тест) ¦Giardia lamblia; ¦
¦ ¦немедленно направляют в лабора- ¦Cryptosporidium ¦
¦ ¦торию в плотно закрытом завинчи-¦parvum; ¦
¦ ¦вающейся крышкой одноразовом ¦Isospora belli. ¦
¦ ¦контейнере (для сбора мочи) или ¦В редких случаях -¦
¦ ¦одноразовой плотно закрытой ¦Clonorchis ¦
¦ ¦центрифужной пробирке, или опре-¦sinensis ¦
¦ ¦деленным образом смонтированной ¦ ¦
¦ ¦стеклянной емкости. Емкости с ¦ ¦
¦ ¦материалом помещают в пластико- ¦ ¦
¦ ¦вый пакет ¦ ¦
+------------+--------------------------------+------------------+
¦Слизь, сли- ¦Собирают в процессе проведения ¦Вышеперечисленные ¦
¦зистая, фе- ¦ректороманоскопии у постели ¦возбудители, ¦
¦калии и/или ¦больного (в процедурном кабине- ¦преимущественно ¦
¦комбинация ¦те) для немедленного просмотра ¦Entamoeba ¦
¦всех трех ¦(влажный мазок на чистом обезжи-¦histolytica, а ¦
¦образцов; ¦ренном или новом предметном ¦также Shistostoma ¦
¦язвы сигмо- ¦стекле). Если пробу доставляют в¦mansoni; ¦
¦видной и ¦лабораторию, ее помещают в одно-¦Balantidium coli; ¦
¦ободочной ¦разовую емкость или специально ¦Trichomonas ¦
¦кишки ¦смонтированную стеклянную с ¦hominis; ¦
¦ ¦добавлением 0,5 - 1,0 мл физио- ¦Trichinella spp. ¦
¦ ¦логического раствора для предот-¦ ¦
¦ ¦вращения от высыхания ¦ ¦
+------------+--------------------------------+------------------+
¦Ткани - био-¦Пробы тонкого кишечника ¦Cryptosporidium ¦
¦птаты реко- ¦ ¦parvum; ¦
¦мендуется ¦Пробы тощей кишки ¦Enterocytozoon ¦
¦использовать¦ ¦bieneusi; ¦
¦для диагнос-¦Толстая кишка ¦Entamoeba ¦
¦тики ткане- ¦ ¦histolytica; ¦
¦вых парази- ¦ ¦Shistostoma ¦
¦тов ¦ ¦mansoni и spp.; ¦
¦ ¦Пробы 12-перстной кишки ¦Giardia lamblia ¦
¦ ¦Биоптат прямой кишки ¦Entamoeba ¦
¦ ¦ ¦histolytica; ¦
¦ ¦ ¦Balantidium coli; ¦
¦ ¦ ¦Cryptosporidium ¦
¦ ¦ ¦parvum ¦
+------------+--------------------------------+------------------+
¦Печень, ¦Аспираты и биоптаты органов ¦Echinococcus spp.;¦
¦селезенка ¦собирают в 4 (от каждого органа)¦Clonorchis spp., ¦
¦ ¦отдельных одноразовых стерильных¦Opisthorchis spp.;¦
¦ ¦контейнера или другие стерильные¦Toxoplasma gondii;¦
¦ ¦емкости с герметично закрывающи-¦Leishmania ¦
¦ ¦мися крышками, в которых достав-¦donovani; ¦
¦ ¦ляют в лабораторию. ¦Cryptosporidium ¦
¦ ¦Пробы аспирата печени собирают с¦parvum; ¦
¦ ¦краев абсцесса, а не из некроти-¦Pneumocystis ¦
¦ ¦ческого центра ¦carinii; ¦
¦ ¦ ¦Entamoeba ¦
¦ ¦ ¦histolytica; ¦
¦ ¦ ¦Fasciola hepatica ¦
+------------+--------------------------------+------------------+
¦Мочеполовая система: ¦
+------------T--------------------------------T------------------+
¦Отделяемое ¦Собирают материал платиновой ¦Trichmonas ¦
¦влагалища, ¦петлей, хлопковым, вискозным или¦vaginalis; ¦
¦уретры, оча-¦дакроновым зондом-тампоном, или ¦Shistostoma ¦
¦га на пени- ¦непосредственно с зеркала; ¦haemotobium ¦
¦се, соскоб ¦готовят мазок на предметном ¦ ¦
¦со слизистой¦стекле, зонд-тампон, смоченный ¦ ¦
¦уретры, ¦физиологическим раствором, ¦ ¦
¦эякулят ¦помещают в пробирку пустую или ¦ ¦
¦ ¦со средами без угля (типа Эймса ¦ ¦
¦ ¦или Стюарта или др.), отдельные ¦ ¦
¦ ¦высушенные на воздухе мазки - ¦ ¦
¦ ¦для исследования методом иммуно-¦ ¦
¦ ¦флуоресценции ¦ ¦
+------------+--------------------------------+------------------+
¦Моча ¦Собирают первую порцию свободно ¦Trichmonas ¦
¦ ¦истекающей мочи в одноразовые ¦vaginalis ¦
¦ ¦контейнер или пробирку, у мужчин¦ ¦
¦ ¦- после массажа простаты. ¦ ¦
¦ ¦Собирают среднюю порцию свободно¦Shistostoma ¦
¦ ¦истекающей мочи, или пробу из ¦haemotobium ¦
¦ ¦суточной мочи, собранной в одно-¦ ¦
¦ ¦разовые контейнер или пробирку. ¦ ¦
¦ ¦Среднюю порцию мочи собирают при¦ ¦
¦ ¦мочеиспускании с 12 до 15 ч дня,¦ ¦
¦ ¦т.к. на это время приходится пик¦ ¦
¦ ¦выделения личинок паразита, ¦ ¦
¦ ¦желательно собрать мочу после ¦ ¦
¦ ¦физической нагрузки (например, ¦ ¦
¦ ¦20 - 30 приседаний). ¦ ¦
¦ ¦Собирают также последнюю порцию ¦ ¦
¦ ¦свободно истекающей мочи при на-¦ ¦
¦ ¦личии гематурии и обилия слизи. ¦ ¦
¦ ¦Паразитов определяют у больных с¦Микрофилярии, ¦
¦ ¦хилурией, с очень тяжелой инфек-¦филярии ¦
¦ ¦цией, а также у пациентов, ¦ ¦
¦ ¦лечившихся диэтилкарбамазином ¦ ¦
+------------+--------------------------------+------------------+
¦Биоптат ¦Пробу ткани собирают в стериль- ¦Microsporidia ¦
¦почки ¦ную одноразовую емкость с по- ¦ ¦
¦ ¦мощью стерильного тампона, про- ¦ ¦
¦ ¦питанного физиологическим раст- ¦ ¦
¦ ¦вором, после того, как этим же ¦ ¦
¦ ¦тампоном на стерильных предмет- ¦ ¦
¦ ¦ных стеклах были приготовлены ¦ ¦
¦ ¦мазки для исследования ¦ ¦
+------------+--------------------------------+------------------+
¦Центральная нервная система: ¦
+------------T--------------------------------T------------------+
¦Ликвор ¦Пробы ликвора собирают в сте- ¦Naegleria fowleri;¦
¦ ¦рильные одноразовые контейнер ¦Acanthamoeba и ¦
¦ ¦или стеклянную пробирку. Пере- ¦Hartmanella spp.; ¦
¦ ¦дают материал в лабораторию ¦Eshinococcus sp.; ¦
¦ ¦ ¦Toxoplasma gondii;¦
¦ ¦ ¦Trypanosoma spp.; ¦
¦ ¦ ¦Tienia soleum ¦
+------------+--------------------------------+------------------+
¦Биоптаты ¦Биоптаты мозга у больных и ку- ¦Naegleria fowleri;¦
¦ ¦сочки ткани, полученные при ¦Entamoeba ¦
¦ ¦аутопсии собирают в стерильные ¦histolytica; ¦
¦ ¦одноразовые (стеклянные) контей-¦Toxoplasma gondii;¦
¦ ¦нер или пробирку, для предотвра-¦Microsporidia; ¦
¦ ¦щения от высыхания добавляют ¦(Encephalitazoon ¦
¦ ¦несколько капель стерильного ¦cuniculi) ¦
¦ ¦физиологического раствора и ¦ ¦
¦ ¦направляют в лабораторию ¦ ¦
+------------+--------------------------------+------------------+
¦Кровь ¦Для микроскопического определе- ¦Plasmodium ¦
¦ ¦ния возбудителя получают пробы ¦малярии; ¦
¦ ¦крови из пальца, сразу же гото- ¦Babesia spp.; ¦
¦ ¦вят толстый и тонкий мазки на ¦Leishmania ¦
¦ ¦чистом, обезжиренном или новом ¦donovani; ¦
¦ ¦предметном стекле. ¦Toxonlasma gondii;¦
¦ ¦Кровь, собранную у пациента на- ¦Trypanosoma cruzi;¦
¦ ¦тощак при венопункции, помещают ¦Microfilariae ¦
¦ ¦в 2 стерильные пробирки по 5 - ¦Echinococcus sp.; ¦
¦ ¦7 мл в каждую (стеклянные, за- ¦Toxocara sp.; ¦
¦ ¦крывающиеся резиновой пробкой, ¦Opistorchis ¦
¦ ¦или одноразовые с плотно закры- ¦felineus; ¦
¦ ¦вающейся пробкой): ¦Trichinella sp.; ¦
¦ ¦- в одну пробирку с антикоагу- ¦Toxoplasma sp.; ¦
¦ ¦лянтом (ЭДТА, гепарин, цитрат ¦Cistecercos sp. ¦
¦ ¦натрия); ¦ ¦
¦ ¦- во вторую пробирку без анти- ¦ ¦
¦ ¦коагулянта для определения анти-¦ ¦
¦ ¦тел к антигенам гельминтов. ¦ ¦
¦ ¦Емкости с пробами маркируют и ¦ ¦
¦ ¦направляют в лабораторию ¦ ¦
+------------+--------------------------------+------------------+
¦Костный мозг¦Аспират собирают в стерильные ¦Leishmania ¦
¦ ¦одноразовые (стеклянные) контей-¦donovani; ¦
¦ ¦нер или пробирку и направляют в ¦Trypanosoma cruzi ¦
¦ ¦лабораторию ¦ ¦
+------------+--------------------------------+------------------+
¦Нижние дыхательные пути: ¦
+------------T--------------------------------T------------------+
¦Мокрота от- ¦Пробу собирают после объяснения ¦Paragonismus sp.; ¦
¦кашливаемая ¦пациенту необходимости почистить¦Stronguloides ¦
¦ ¦зубы, прополоскать рот теплой ¦stercoralis; ¦
¦ ¦кипяченой водой и не собирать ¦Cryptosporidium ¦
¦ ¦слюну. В пробу включают любые ¦parvum; ¦
¦ ¦кровянистые прожилки, включения,¦Pneumocystis ¦
¦ ¦слизь. Доставляют в лабораторию ¦carinii; ¦
¦ ¦в чистом одноразовом контейнере ¦Ascaris ¦
¦ ¦с завинчивающейся крышкой или в ¦lumbricoides; ¦
¦ ¦соответствующим образом смонти- ¦Tominx aerophylus;¦
¦ ¦рованной стеклянной емкости ¦Ancylostoma sp.; ¦
¦ ¦ ¦Necator sp. ¦
+------------+--------------------------------+------------------+
¦Мокрота ¦Индуцирование необходимо, так ¦Pneumocystis ¦
¦индуциро- ¦как у больных с пневмоцистной ¦carinii - наиболее¦
¦ванная ¦пневмонией обычно сухой, непро- ¦полезны у ВИЧ- ¦
¦ ¦дуктивный кашель. ¦инфицированных, у ¦
¦ ¦Пробу собирают после проведения ¦других даже при ¦
¦ ¦пациентом гигиены рта - см. ¦наличии лихорадки,¦
¦ ¦выше. ¦пневмоцисты опре- ¦
¦ ¦Доставляют в лабораторию - см. ¦деляют существенно¦
¦ ¦выше ¦реже ¦
+------------+--------------------------------+------------------+
¦Лаваж, ¦Пробы собирают с помощью бронхо-¦Pneumocystis ¦
¦альвеолярная¦скопа (предпочтительнее лаваж) в¦carinii; ¦
¦жидкость, ¦специальный стерильный однора- ¦Toxoplasma gondii;¦
¦смывы с ¦зовый контейнер с завинчивающей-¦Cryptosporidium ¦
¦бронхов ¦ся крышкой или специально смон- ¦parvum; ¦
¦ ¦тированную стерильную стеклянную¦Paragonismus ¦
¦ ¦посуду ¦westermanii; ¦
¦ ¦ ¦Trichinella spp. ¦
+------------+--------------------------------+------------------+
¦Аспираты ¦Пробы, собранные тонкой иглой, ¦Pneumocystis ¦
¦трансброн- ¦наносят на чистое, обезжиренное ¦carinii; ¦
¦хиальные, ¦или новое предметное стекло, ¦Toxoplasma gondii;¦
¦трахеоброн- ¦готовят мазки, высушивают на ¦Paragonismus ¦
¦хиальные, ¦воздухе, упаковывают и направ- ¦westermanii; ¦
¦легких ¦ляют в лабораторию ¦Trichinella spp.; ¦
¦ ¦ ¦Cryptosporidium ¦
¦ ¦ ¦parvum; ¦
¦ ¦ ¦Entamoeba ¦
¦ ¦ ¦histolytica ¦
+------------+--------------------------------+------------------+
¦Биоптаты ¦Пробы бронхов, полученные спе- ¦Полезны для диаг- ¦
¦ ¦циальной щеточкой, или легкого, ¦ностики тканевых ¦
¦ ¦полученные во время операции, ¦паразитов как до- ¦
¦ ¦наносят на чистое обезжиренное ¦полнение к стан- ¦
¦ ¦или новое предметное стекло, ¦дартным гистологи-¦
¦ ¦готовят мазки, высушивают на ¦ческим исследова- ¦
¦ ¦воздухе, упаковывают и достав- ¦ниям: ¦
¦ ¦ляют в лабораторию. ¦Pneumocystis ¦
¦ ¦Для культивирования паразитов ¦carinii; ¦
¦ ¦пробы собирают в специальные ¦Toxoplasma gondii;¦
¦ ¦контейнеры (консультируйтесь с ¦Paragonismus ¦
¦ ¦паразитологом!) ¦westermanii; ¦
¦ ¦ ¦Entamoeba ¦
¦ ¦ ¦histolytica; ¦
¦ ¦ ¦Echinococcus sp.; ¦
¦ ¦ ¦Strongoloides ¦
¦ ¦ ¦stercoralis; ¦
¦ ¦ ¦Trichinella ¦
¦ ¦ ¦spiralis ¦
+------------+--------------------------------+------------------+
¦Глаза: ¦
+------------T--------------------------------T------------------+
¦Биоптаты, ¦Пробы собирают в стерильные ¦Acanthamoeba spp; ¦
¦соскобы с ¦емкости одноразовые или стеклян-¦Naegleria fowleri;¦
¦роговицы и ¦ные, специально смонтированные, ¦Microsporidium ¦
¦конъюнктивы;¦герметично закрывающиеся. ¦spp.; ¦
¦линзы ¦Для предотвращения высыхания ¦Филярии; ¦
¦ ¦добавляют несколько капель сте- ¦Toxoplasma gondii;¦
¦ ¦рильного физиологического раст- ¦Nosema sp. ¦
¦ ¦вора. ¦ ¦
¦ ¦Доставляют в лабораторию ¦ ¦
+------------+--------------------------------+------------------+
¦Смыв с линзы¦Собирают в стерильные емкости ¦ ¦
¦ ¦одноразовые или специально смон-¦ ¦
¦ ¦тированные стеклянные, герме- ¦ ¦
¦ ¦тично закрывающиеся. ¦ ¦
¦ ¦Доставляют в лабораторию ¦ ¦
+------------+--------------------------------+------------------+
¦Кожа, ткани: ¦
+------------T--------------------------------T------------------+
¦Основание ¦Аспират собирают в стерильные ¦Leishmania spp. ¦
¦(дно) язвы ¦емкости; параллельно готовят ¦ ¦
¦ ¦мазки на чистом обезжиренном или¦ ¦
¦ ¦новом предметном стекле; мате- ¦ ¦
¦ ¦риал передают в лабораторию ¦ ¦
+------------+--------------------------------+------------------+
¦Биоптаты ¦Собирают в стерильные емкости ¦Leishmania sp.; ¦
¦тканей (под-¦одноразовые или стеклянные, спе-¦Onchocerca ¦
¦кожные узлы,¦циально смонтированные, герме- ¦volvulus; ¦
¦клетчатка; ¦тично закрывающиеся; для предот-¦Mansonella ¦
¦фасции; ¦вращения от высыхания добавляют ¦streptocerca; ¦
¦икроножные, ¦стерильный физиологический раст-¦Trichinella ¦
¦дельтовидные¦вор. ¦spiralis; ¦
¦мышцы; ¦Доставляют материал в лаборато- ¦Paragonismus ¦
¦диафрагма; ¦рию ¦westermanii; ¦
¦кожа) ¦ ¦Trypanosoma cruzi;¦
¦ ¦ ¦Tienia solium ¦
+------------+--------------------------------+------------------+
¦Соскоб с по-¦Собирают асептически в специаль-¦Onchocerca ¦
¦верхностных ¦ную стерильную емкость однора- ¦vulvulus; ¦
¦поражений ¦зовую или стеклянную, специально¦Mansonella ¦
¦кожи ¦смонтированную, герметично за- ¦streptocerca ¦
¦ ¦крывающуюся; добавляют стериль- ¦ ¦
¦ ¦ный физиологический раствор для ¦ ¦
¦ ¦предотвращения высыхания; парал-¦ ¦
¦ ¦лельно готовят мазки на чистом, ¦ ¦
¦ ¦обезжиренном или новом предмет- ¦ ¦
¦ ¦ном стекле. ¦ ¦
¦ ¦Доставляют материал в лаборато- ¦ ¦
¦ ¦рию ¦ ¦
L------------+--------------------------------+-------------------
8. Пробы биоматериала и иммуносерологические методы
определения возбудителей инфекционно-воспалительных
процессов
8.1. Общие положения
Проведение иммуносерологических исследований основано на
применении технологических приемов (методик), позволяющих
определять специфические антигены возбудителей инфекционных, и
инфекционно-воспалительных заболеваний, и/или вводимых при
вакцинации, и ответной реакции на них организма образованием
антител. Это необходимо для объективизации клинического диагноза,
результатов терапии, оценки качества вакцинации, своевременной
организации и проведения противоэпидемических мероприятий.
Тест-системы, предназначенные для определения специфических
антигенов, используются для идентификации конкретного
микроорганизма в пробе клинического материала или выращенного in
vitro.
С помощью методов, предназначенных для определения антител,
дается характеристика ответа организма (человека) на конкретный
антиген без учета или с учетом специфического класса
иммуноглобулинов (Ig), в котором они находятся. IgM-ранние
антитела (4 - 7 сут. от первичного инфицирования
микроорганизмами), IgG-поздние антитела, которые (в зависимости от
антигена) могут находиться в организме от 5 - 7 суток до 3 - 4
недель (период реконвалесценции) и даже всю жизнь. Сывороточные
IgA при всей их вариабельности по срокам образования (11 - 15
суток) и персистенции в организме (до 30 суток) отражают не
столько реакцию на конкретный бактериальный антиген, сколько на
деструкцию органа, обусловленную воспалительным процессом
микробной этиологии. Уровень секреторного IgA - прогностический
признак вероятности развития инфекции на слизистых оболочках при
нарушениях микроэкологии, т.е. микробиологического аспекта системы
антиинфекционной резистентности (САИР), а также вероятности
проникновения (транслокации) возбудителя в другие органы и ткани.
Уровень IgE антител увеличивается в ответ на паразитарные
инфекции, но специфическая реакция на другие инфекционные агенты в
этом классе Ig отсутствует.
Возникновение инфекционного и инфекционно-воспалительного
заболевания, течение патологического процесса и эффективность
терапии в большой степени зависят от состояния защитных сил
организма, т.е. от факторов системы антиинфекционной
резистентности, в частности, в ее иммунологическом аспекте.
Нарушения в синтезе и функциональной активности терминальных
компонентов каскада комплемента (мембран-атакующего комплекса) -
фактор, предрасполагающий к развитию рецидивирующих нейссериальных
(N. gonorrhoeae) инфекций. Мутация в рецепторе гамма-интерферона -
основа тяжелейшей диссеминированной микобактериальной инфекции и
фатального исхода от Mycobacterium bovis - основы
противотуберкулезной вакцины Кальмет-Герена. Полиморфизм генов
человека - основа устойчивости к малярии, а врожденное отсутствие
некоторых эритроцитарных антигенов среди определенной человеческой
субпопуляции определяет их абсолютную устойчивость к парвовирусам.
Недостаточность или нарушения в функционировании бактерицидных
систем в клетке нейтрофила и/или в целом в процессе фагоцитоза -
основа развития воспалительного процесса, вызванного условно-
патогенными микроорганизмами. В настоящее время имеется
возможность определения и подсчета количества В-лимфоцитов,
активирующих плазменные клетки, образующие антитела, с
параллельным определением специфических антигенов. Для этого
используют пробу периферической крови, в которой также определяют
вирусы лихорадки Денге, гриппа, респираторно-сенсициального,
вируса иммунодефицита человека (ВИЧ).
Учитывая важность иммунологического и микробиологического
аспектов системы антиинфекционной резистентности организма в
развитии и течении инфекционно-воспалительных процессов, в т.ч.
внутрибольничной природы, в научно-практических лабораториях
рекомендуется проводить комплексные клинико-микробиологические и
иммуносерологические обследования.
8.2. Иммуносерологическое обследование
Иммуносерологическое обследование включает определение:
- антител к эндо- и экзотоксинам, клеточной стенке и ее
компонентам микробов-возбудителей воспалительных процессов;
- С-реактивного белка (СРБ) и других белков острой фазы как
показателей наличия и активности воспаления инфекционной природы;
- бактерицидной активности сыворотки (БАС) и/или других
жидкостей тела с аутоштаммами пациента; этот тест до назначения
антибактериальной терапии свидетельствует о состоянии комплекса
гуморальных факторов защиты организма, при наличии
антибактериальной терапии позволяет проводить мониторинг ее
активности;
- иммуноглобулинов М, G, А классов в сыворотке крови и других
жидкостях организма как показателя остроты и длительности
инфекционно-воспалительного процесса, способности обследованного
реагировать на возбудитель, а также как необходимых компонентов,
участвующих в фагоцитозе нейтрофилов в качестве опсонинов (IgM,
IgG) и показателя наличия деструкции органа (IgA) в результате
воспаления;
- активности комплемента и его компонентов в качестве
субстанции, приводящей к лизису клетки микроорганизма, если
комплекс антиген-антитело находится на ее поверхности, и как
инициатора выброса нейтрофилов, если комплекс находится в тканях,
а также как опсонина;
- лизоцима как показателя состояния лейкоцитов, способности
организма к лизису грамположительных кокков и в крови - Е. coli;
- фагоцитарной функции нейтрофилов в незавершенном и
завершенном вариантах с контрольными и аутоштаммами, выделенными
из очага воспаления;
- В-лимфоцитов, учитывая их способность к дифференциации в
плазменные клетки и образованию специфических антител в различных
классах иммуноглобулинов;
- Т-лимфоцитов и их субпопуляций как контролирующих активность
В-лимфоцитов и реагирующих с клетками с более низкой степенью
специфичности, чем те, с которыми реагируют цитотоксические Т-
лимфоциты.
Стерильную посуду для сбора проб и их транспортирования (кровь
и другие жидкости организма обследованных) накануне получают в
лаборатории.
Иммуносерологические исследования проводят параллельно с
микробиологическими, анализирующими материал из очага воспаления,
обсемененность слизистой верхних дыхательных путей (нос, зев),
гениталий и содержимого кишечника.
Все пробы готовят в один и тот же день: при поступлении,
накануне операции или с операционного стола (до операции), на 3 -
4-е сутки после операции (2 - 3-е сутки после госпитализации у
терапевтических больных), на 14 - 16-е сутки после операции (после
госпитализации терапевтических больных), перед выпиской из
стационара или в сроки, оговоренные клиницистами.
Комплексные исследования с анализом проводят с целью изучения
патогенеза воспалительного процесса определенной локализации,
вызванного условно-патогенной микрофлорой, которые позволяют
установить нарушения в системе антиинфекционной резистентности
организма, определить возможность развития внутрибольничной
инфекции и реакцию на нее конкретного больного, а также
способность пациента реагировать на определенный возбудитель
(возбудители), проводить мониторинг эффективности
антибактериальной и специфической иммунотерапии и других лечебных
мероприятий.
8.3. Методы исследования, применяемые в иммуносерологии
Выбор оптимального метода определения антигенов и антител
зависит от соответствия собранной пробы целям и задачам
исследования (сроки от начала заболевания, отсутствие гемолиза и
липолиза пробы, контаминации посторонней микрофлорой) и требований
к спектру исследований, которые могут быть выполнены в конкретной
лаборатории.
Используют следующие методы исследования:
Реакция агглютинации - используют для подтверждения наличия
инфекции, вызванной определенным бактериальным антигеном.
Непрямая (пассивная) гемагглютинация (РПГА) с латексными
частицами или эритроцитами барана - используют для определения
наличия антител к возбудителям кишечных инфекций, в модификации с
использованием латексных частиц (диагностикумов) - для диагностики
бактериальных менингитов, определения антигенов Candida,
гонококков, гемофильной палочки.
Ингибиция гемагглютинации - модифицированная РПГА, используют
для определения антител к вирусам краснухи, гриппа, парагриппа,
респираторно-синцитиального.
Преципитация - реакция между растворимыми антигенами и
антителами, используют метод диффузии в геле.
Радиальная иммунодиффузия - определение антигенов или антител в
моноспецифической системе с чувствительностью 1 - 10 мг/л,
используют для сравнения антигенов (чувствительность - несколько
наннограмм/мл).
Электроиммунодиффузия - подобна радиальной, но миграция
реагентов направляется электрическим полем, и ее чувствительность
в 5 - 10 раз выше, чем в радиальной иммунодиффузии.
Быстрые методы определения антигена и антител (15 - 20 мин.) -
основаны на использовании коллоидных, меченых золотом антител.
Определяют антитела к ВИЧ и антиген хламидии трахоматис.
Диагностику лихорадки Денге осуществляют с помощью
иммунохроматографического определения сывороточных IgM и IgG.
Методы с меченными антителами - специфичные
высокочувствительные методы для определения антигенов в клетках и
тканях: прямая (ПИФ) и непрямая (НИФ) иммунофлуоресценция, а также
антигенов микроорганизмов. Используют для определения кластеров
дифференциации и антигенов на поверхности лимфоцитов. Можно
определять антигены в мазке материала (инфекции, передаваемые
половым путем). С использованием прямой иммунофлуоресценции
5
определяют антиген в количестве не менее 10 микробных тел.
Непрямая иммунофлуоресценция в 5 - 10 раз чувствительнее, чем
прямая.
125
Радиоиммунологические (метка - I) исследования (РИА) и
ELISA-ИФА (метка-фермент: пероксидаза хрена) - каждый из методов
используют для количественного определения конкретного антигена в
растворе даже при наличии смеси антигенов. Применяют для
идентификации вирусов (герпес симплекс, ЦМВ, герпес зостер),
возбудителей коклюша (Bordetella pertussis), бруцеллеза (Brucella
abortus) в мазке материала - пневмонии (Legionella pneumophyliae,
Mycoplasma pneumoniae), болезни Лайма (Borrelia burgdoferi),
сифилиса (Т. pallidum), ИППП (Chlamidia spp., Ureaplasma spp.),
кишечных инфекций (Salmonella spp., Shigella spp.), Streptococcus
гр. A, Toxoplasma gondii, Helicobacter pylori - в крови.
Чувствительность методов - 1 - 2 нг/мл. Альтернативный метод -
иммуноблоттинг, используемый для мониторирования инфекций,
вызванных ВИЧ, вирусами гепатита, Т. pallidum, Borrelia burgdoferi
(чувствительность - 1 - 2 нг/мл) и других.
Мечеными конъюгатами определяют и мониторируют ответ (выработка
антител) на антигены вирусов (ВИЧ, ЦМВ, герпес симплекс, герпес
зостер), Т. pallidum, В. burgdoferi.
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) и различные модификации на ее
основе (методы гибридизации ДНК и РНК) - основана на замене
биологической амплификации (накопление клеток микроорганизма при
культивировании in vitro) на ферментативную (энзиматическую)
амплификацию специфических последовательностей нуклеиновых кислот
возбудителя. Гибридизация нуклеиновых кислот возбудителя позволяет
определять гены, ответственные за антибиотикорезистентность,
наличие в биопробе медленно растущих и требующих особых условий
культивирования микроорганизмов (например, легионеллы и
микобактерии), тех, которые невозможно культивировать in vitro
(возбудитель болезни Уиппла - Tropheryma whippelii и др.).
8.4. Сбор и хранение образцов для ПЦР-диагностики
Материалом для исследования служат: соскоб из уретры,
цервикального канала, заднего свода влагалища, секрет
предстательной железы, сперма, моча, мазки с конъюнктивы.
8.4.1. Сбор материала (соскоб из урогенитального тракта) у
женщин. Соскобы производят из трех различных точек: цервикальный
канал, уретра, задний свод влагалища. При необходимости материал
для исследования берут из эрозивно-язвенных поражений. Сбор
материала производят отдельными одноразовыми стерильными зондами.
8.4.1.1. Сбор материала из цервикального канала. Удаляют слизь
с поверхности шейки матки тампоном, вводят зонд в цервикальный
канал на 1,0 - 1,5 см и вращают его в течение 3 - 5 с. Извлекают
зонд, избегая касания стенок влагалища, и помещают его в
стерильную одноразовую пробирку с транспортировочной средой (0,3
мл). Погрузив рабочую часть зонда в транспортировочную среду,
вращают зонд в течение 10 - 15 с, избегая разбрызгивания раствора.
Вынимают зонд из раствора, прижимая его к стенке пробирки и, отжав
избыток жидкости, удаляют зонд и закрывают пробирку.
8.4.1.2. Сбор материала из уретры. Перед забором соскоба из
уретры необходимо обработать ее наружное отверстие тампоном,
смоченным стерильным физиологическим раствором. Производят массаж
уретры пальцем со стороны влагалища, прижимая ее к лобковой кости.
Вводят зонд в уретру на глубину 1,0 - 1,5 см и аккуратно, не
поранив слизистую, несколькими вращательными движениями производят
соскоб эпителиальных клеток и переносят зонд в пробирку с
транспортировочной средой (0,3 мл). Погрузив рабочую часть зонда в
транспортировочную среду, вращают зонд в течение 10 - 15 с,
избегая разбрызгивания раствора. Вынимают зонд из раствора,
прижимая его к стенке пробирки и, отжав избыток жидкости, удаляют
зонд и закрывают пробирку.
8.4.1.3. Сбор материала из заднего свода влагалища. В случае
избытка слизи и обильных выделений их удаляют стерильным ватным
тампоном. Проводят зондом по поверхности слизистой в области
заднего свода влагалища и эктоцервикса и переносят зонд в пробирку
с транспортировочной средой (0,3 мл). Погрузив рабочую часть зонда
в транспортировочную среду, вращают зонд в течение 10 - 15 с,
избегая разбрызгивания раствора. Вынимают зонд из раствора,
прижимая его к стенке пробирки и, отжав избыток жидкости, удаляют
зонд и закрывают пробирку.
8.4.2. Сбор материала (соскоб из урогенитального тракта) у
мужчин.
8.4.2.1. Сбор материала из уретры. Перед сбором соскоба из
уретры необходимо обработать головку полового члена в области
наружного отверстия уретры тампоном, смоченным стерильным
физиологическим раствором. Производят массаж уретры. При наличии
свободно стекающих из уретры выделений удаляют их сухим тампоном.
Вводят зонд в уретру на глубину 3 - 4 см. Несколькими
вращательными движениями производят соскоб эпителиальных клеток и
переносят зонд в пробирку с транспортировочной средой. Погрузив
рабочую часть зонда в транспортировочную среду, вращают зонд в
течение 10 - 15 с, избегая разбрызгивания раствора. Вынимают зонд
из раствора, прижимая его к стенке пробирки и, отжав избыток
жидкости, удаляют зонд и закрывают пробирку.
8.4.2.2. Сбор секрета предстательной железы может быть
осуществлен двумя способами:
- первый - после окончания массажа предстательной железы ее
секрет в количестве 0,5 - 1,0 мл собирают в одноразовую стерильную
пробирку объемом 1,5 мл;
- второй - при невозможности получить секрет сразу после
массажа собирают первую порцию мочи (в которой содержится секрет
предстательной железы) в количестве 10 мл (см. правила забора
мочи).
8.4.2.3. Сбор спермы осуществляют в стерильные одноразовые
флаконы или пробирки.
8.4.3. Сбор проб мочи. Для анализа отбирают первую порцию
утренней мочи в количестве не меньше 20 - 40 мл в специальный
сухой стерильный флакон или сухую стерильную пробирку.
8.4.4. Сбор проб с конъюнктивы. Сбор пробы осуществляют сухими
стерильными ватными тампонами под местной анастезией (2 капли
раствора дикаина или инокаина). Оттянув нижнее веко, вращающими
движениями провести зонд 4 - 5 раз по конъюнктиве, захватывая
внешний и внутренний углы глаза. После забора материала тампон
(рабочую часть зонда с ватным тампоном) помещают в стерильную
одноразовую пробирку с транспортировочной средой. Погрузив рабочую
часть зонда в транспортировочную среду, вращают зонд в течение 10
- 15 с, избегая разбрызгивания раствора. Вынимают зонд из
раствора, прижимая его к стенке пробирки и, отжав избыток
жидкости, удаляют зонд и закрывают пробирку.
8.5. Сбор проб для диагностики сифилиса
8.5.1. Влажные поражения: удаляют корочку с очага, далее
необходимо промокнуть любой экссудат вторичной инфекции стерильной
марлевой салфеткой, придавливают основание очага для накопления
тканевой жидкости на его поверхности, прикладывают обезжиренное
или новое предметное стекло к экссудату или собирают жидкость
стерильной бактериологической (одноразовой или металлической,
обожженной в пламени спиртовки и остуженной на воздухе) петлей и
переносят жидкость на стекло, готовят мазки.
8.5.2. Сухие поражения кожи: осторожно удаляют поверхностный
слой кожи с помощью стерильных скальпеля, кончика иглы или
проводят механическую экскориацию, прижимают очаг, если это
необходимо, и собирают экссудат (см. выше). Материал можно
собрать, введя в основание очага небольшое количество стерильного
небактериостатического физиологического раствора, отсасывают
жидкость шприцем с тонкой иглой, готовят мазок (см. выше).
8.5.3. Цервикально-вагинальные очаги: пробу собирают, используя
зеркало для определения локализации очага, удаляют любое
отделяемое из вагины и цервикального канала с помощью стерильного
тампона, используя стерильную бактериологическую петлю (см. выше),
собирают серозный экссудат. При необходимости прижимают очаг
(поражение) специальным зажимом для получения серозного экссудата,
готовят мазки.
8.5.4. Сифилитические пятна на слизистых оболочках: собирают
материал со слизистых носа, глотки, полости рта или кишечника с
помощью стерильной бактериологической петли (см. выше) и готовят
мазки.
8.5.5. Лимфоузлы: если сифилитические очаги лечили местным
применением антибиотиков, то трепонемы могут быть разрушены. В
этих случаях проба из лимфоузла - единственный материл для
получения корректного результата исследования. Необходимо
обработать кожу над узлом, тампонируя 70%-м этиловым спиртом, а
затем 1 - 2%-м раствором йода или другого дезинфектанта. Крепко
держат узел и вводят в него стерильную иглу, присоединенную к
шприцу, содержащему не более 0,2 мл небактериостатического
физиологического раствора. Вводят раствор в лимфоузел и осторожно
поводят в нем иглой в разных направлениях для разрыхления ткани.
Отсасывают шприцем жидкость и отделяемое и переносят его на стекло
для немедленного исследования.
8.5.6. Жидкости тела, экссудаты поражений, суспензии
мацерированной ткани и другой материал: тщательно перемешивают эти
жидкости и суспензии стерильной пипеткой с резиновой грушей для
уверенности в равномерном распределении материала.
При приготовлении мазков необходимо на чистое обезжиренное или
новое предметное стекло нанести материал на площадь диаметром 1
см. Мазки высушивают на воздухе. Если возможно, необходимо из
каждой пробы приготовить по 4 мазка. До передачи в лабораторию
мазки следует зафиксировать в ацетоне в течение 10 мин. или легким
нагреванием над пламенем спиртовки. Стекло каждого пациента,
независимо от используемого метода, фиксируют отдельно.
8.5.7. Биопсии тканей и материал, полученный при аутопсии,
анализируют в отделе патоморфологии параллельно с гистологическим
исследованием.
8.5.8. Пробы для серологических специфических и неспецифических
для Т. pallidum тестов: кровь собирают венопункцией.
Таблица 5
ИММУНОСЕРОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ В ИДЕНТИФИКАЦИИ НЕКОТОРЫХ
ВОЗБУДИТЕЛЕЙ И ОТВЕТНОЙ РЕАКЦИИ НА НИХ ПАЦИЕНТА
---------------T----------------------T--------------------------¬
¦Микроорга- ¦Клинические проявления¦ Методы, используемые для ¦
¦низм - возбу- ¦ заболевания, ¦ определения ¦
¦дитель пробы ¦ обусловленные +-------------T------------+
¦ ¦ конкретным ¦бактериальной¦гуморального¦
¦ ¦ возбудителем ¦ клетки ¦ ответа ¦
¦ ¦ ¦ (антигена) ¦ пациента ¦
¦ ¦ ¦ ¦ (антител) ¦
+--------------+----------------------+-------------+------------+
¦ 1 ¦ 2 ¦ 3 ¦ 4 ¦
+--------------+----------------------+-------------+------------+
¦Mycoplasma ¦Первичная атипичная ¦Прямая имму- ¦Специфичес- ¦
¦pneumoniae ¦пневмония; трахеоброн-¦нофлуоресцен-¦кие антитела¦
¦Пробы: кровь; ¦хит; фарингит; ослож- ¦ция (ПИФ); ¦IgG, IgM; ¦
¦жидкости: ¦нения в органах вне ¦иммунофер- ¦иммунофер- ¦
¦синовиальная, ¦дыхательных путей ¦ментный ана- ¦ментный ана-¦
¦амниотическая,¦(сердечно-сосудистая ¦лиз (ИФА); ¦лиз (ИФА); ¦
¦ликвор, моча, ¦система, ЦНС, дермато-¦встречный ¦реакция свя-¦
¦эякулят, брон-¦логия, желудочно- ¦иммуноэлек- ¦зывания ¦
|
