|
Стр. 4
3.6. Биологически активные добавки к пище - источники
минеральных веществ.
Эффективность этой категории БАД к пище подтверждается путем
изучения динамики изменения концентрации соответствующих микро-
или макроэлементов в биологическом материале, а также тех
биологических эффектов, которые реализуются в организме в процессе
накопления вводимых с БАД нутриентов.
Так, эффективность содержащих железо БАД определяется по
показателям гемоглобинового и транспортного фонда железа:
------------------------------------------------T----------------¬
¦ Показатели в периферической крови ¦ Литературный ¦
¦ ¦ источник ¦
+-----------------------------------------------+----------------+
¦Гемоглобин ¦(106) ¦
+-----------------------------------------------+----------------+
¦Количество эритроцитов ¦(106) ¦
+-----------------------------------------------+----------------+
¦Цветной показатель ¦(106) ¦
+-----------------------------------------------+----------------+
¦Концентрация железа в сыворотке крови ¦(41, 121) ¦
+-----------------------------------------------+----------------+
¦Коэффициент насыщения ¦(106) ¦
¦трансферрина (по показаниям) ¦ ¦
+-----------------------------------------------+----------------+
¦Трансферрин (по показаниям) ¦(43) ¦
+-----------------------------------------------+----------------+
¦Церулоплазмин (по показаниям) ¦(43) ¦
L-----------------------------------------------+-----------------
3.7. Биологически активные добавки к пище с эубиотическим
действием на основе чистых культур микроорганизмов.
Исследование влияния биологически активных добавок к пище на
микробиоценоз кишечника проводят с использованием питательных сред
для учета основных групп микроорганизмов:
-----------------------------------------T-----------------------¬
¦ Исследуемые группы и отдельные роды, ¦ Питательные среды ¦
¦ виды микроорганизмов ¦ ¦
+----------------------------------------+-----------------------+
¦Анаэробные микроорганизмы (общее ¦Кровяной агар ¦
¦количество) ¦(IH-среда) ¦
+----------------------------------------+-----------------------+
¦Аэробные микроорганизмы (общее ко- ¦Кровяной агар ¦
¦личество) ¦ ¦
+----------------------------------------+-----------------------+
¦Бифидобактерии ¦Бактофок; Среда Блау- ¦
¦ ¦рокка; кукурузно - лак-¦
¦ ¦тозная среда ¦
+----------------------------------------+-----------------------+
¦Лактобациллы ¦Среда МРС, обезжиренное¦
¦ ¦молоко ¦
+----------------------------------------+-----------------------+
¦Энтеробактерии ¦Среда Эндо, среда Плос-¦
¦ ¦кирева и другие ¦
+----------------------------------------+-----------------------+
¦Условно - патогенные (цитратассимили- ¦Цитратный агар ¦
¦рующие) энтеробактерии ¦ ¦
+----------------------------------------+-----------------------+
¦Стафилококки ¦Желточно - солевой агар¦
+----------------------------------------+-----------------------+
¦Staph. aureus ¦Baird - Parker ¦
+----------------------------------------+-----------------------+
¦Стрептококки (общее количество) ¦Кровяной агар ¦
+----------------------------------------+-----------------------+
¦Энтерококки: faecalis и faecium ¦Молочная среда с ¦
¦ ¦полимиксином ¦
+----------------------------------------+-----------------------+
¦Сульфитредуцирующие клостридии ¦Железосульфитная среда ¦
+----------------------------------------+-----------------------+
¦Дрожжеподобные грибы ¦Среда Сабуро ¦
+----------------------------------------+-----------------------+
¦Дрожжеподобные грибы рода Candida ¦Рисовый агар ¦
L----------------------------------------+------------------------
Литературный источник: (112, 113).
4. Парафармацевтики, оказывающие влияние на состояние
организма в целом и состояние отдельных его систем
При исследовании воздействия парафармацевтиков, оказывающих
влияние на функциональное состояние организма в целом и отдельных
его систем, используются методы врачебного контроля,
характеризующие клиническое состояние пациентов, и соответствующие
инструментально - лабораторные показатели.
4.1. Парафармацевтики, оказывающие влияние на центральную и
периферическую нервную систему.
а. Показатели, характеризующие психоэмоциональный статус
пациента.
б. Влияние на сон.
в. Динамика артериального давления и пульса.
4.2. Парафармацевтики, влияющие на состояние сердечно -
сосудистой системы.
Динамика артериального давления и частоты пульса.
Электрокардиографическое исследование.
Холтеровское мониторирование - по показаниям.
Эхокардиография (по показаниям).
Д. ЛАБОРАТОРНЫЕ ТЕСТЫ
------------------------------------------------T----------------¬
¦ Показатели ¦ Литературный ¦
¦ ¦ источник ¦
+-----------------------------------------------+----------------+
¦Содержание в сыворотке крови ¦ ¦
+-----------------------------------------------+----------------+
¦Фибриноген ¦(114) ¦
+-----------------------------------------------+----------------+
¦Фибринолитическая активность ¦(114) ¦
+-----------------------------------------------+----------------+
¦Протромбиновый индекс и другие показатели ¦(114) ¦
¦системы гемакоагуляции ¦ ¦
+-----------------------------------------------+----------------+
¦Холестерин ¦(103) ¦
+-----------------------------------------------+----------------+
¦Триглицериды ¦(104) ¦
+-----------------------------------------------+----------------+
¦Липопротеиды низкой и очень низкой плотности ¦(133) ¦
¦(по показаниям) ¦ ¦
+-----------------------------------------------+----------------+
¦Аполипопротеины A1, B (по показаниям) ¦(133) ¦
+-----------------------------------------------+----------------+
¦Липопротеиды высокой плотности ¦(107, 108) ¦
+-----------------------------------------------+----------------+
¦Продукты ПОЛ (малоновый диальдегид, ¦(110) ¦
¦диеновые конъюгаты) (по показаниям) ¦ ¦
+-----------------------------------------------+----------------+
¦Показатели антиоксидантной защиты организма ¦(35, 36, 42, ¦
¦(глутатионредуктаза, глутатионпероксидаза, ¦109, 111, 133) ¦
¦каталаза, супероксиддисмутаза, витамин А, ¦ ¦
¦Е, С, SH-группы,трансферрин, селен) ¦ ¦
¦(по показаниям) ¦ ¦
L-----------------------------------------------+-----------------
4.3. Парафармацевтики, оказывающие влияние на пищеварительную
систему.
Тесты, характеризующие состояние желудка
Изучение желудочной секреции (по показаниям).
а. "Тонкий зонд с нагрузкой" (пентагастрин, инсулин,
гистаминпентагастрин+ глютамат натрия).
Исследования желудочного сока на кровь, слизь, цитологию,
пепсин.
б. pH-метрия (2 - 3-точечная, 24-часовое исследование на
переносимость и реактивность пищи и ферментных препаратов).
в. Радиотелеметрия.
г. Рентгеноскопия желудка и 12-перстной кишки (по показаниям).
Эзофагогастродуоденоскопия (по показаниям).
Забор биопсийного материала на морфологию, содержимое желудка
на цитологию, исследование на наличие хеликобактериоза.
Исследование моторики пищевода и желудка (по показаниям).
Тесты, характеризующие состояние кишечника
Пассаж бария по тонкой кишке (транзит) (по показаниям).
Ирригоскопия (по показаниям).
Гептороманоскопия (по показаниям).
Колоноскопия (по показаниям) (еюноперфузия).
Исследование кишечного транзита радионуклидным методом (по
показаниям).
Копрологическое исследование кала (по показаниям).
Микробиологическое исследование кала на дисбактериоз.
Исследование моторики кишечника инструментально - графическим
методом (по показаниям).
Тесты, характеризующие состояние поджелудочной железы
УЗИ поджелудочной железы (по показаниям).
Эндоскопическая холангопанкреатикография (по показаниям).
Исследование в сыворотке крови и моче панкреатических
ферментов; в дуоденальном содержимом (по показаниям).
Сцинтиграфия, сканирование поджелудочной железы (по
показаниям).
4.4. Парафармацевтики, обладающие желчегонными,
гепатопротекторными свойствами.
Изучение желчевыделительной функции гепатобилиарной системы с
использованием дуоденального зондирования и определения
химического состава желчи (по показаниям) (124).
Холецистографическое исследование (по показаниям) для изучения
динамики двигательной функции желчного пузыря под влиянием БАД к
пище.
УЗИ желчного пузыря и печени.
Микробиологический анализ желчи (по показаниям).
Сцинтиграфия печени (по показаниям) (124).
Сканирование печени (по показаниям) (124).
Пункциональная биопсия печени (по показаниям).
БИОХИМИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ
------------------------------------------------T----------------¬
¦ Содержание в сыворотке крови ¦ Литературный ¦
¦ ¦ источник ¦
+-----------------------------------------------+----------------+
¦Холестерин ¦ (103) ¦
+-----------------------------------------------+----------------+
¦Билирубин (прямой, непрямой) ¦ (97) ¦
+-----------------------------------------------+----------------+
¦Аланинаминотрансфераза ¦ (92) ¦
+-----------------------------------------------+----------------+
¦Аспартатаминотрансфераза ¦ (92) ¦
+-----------------------------------------------+----------------+
¦Щелочная фосфатаза ¦ (98) ¦
+-----------------------------------------------+----------------+
¦Амилаза ¦ (115) ¦
+-----------------------------------------------+----------------+
¦Тимоловая проба ¦ (116) ¦
+-----------------------------------------------+----------------+
¦Сулемовая проба ¦ (116) ¦
+-----------------------------------------------+----------------+
¦Гаммаглютаминтранспептидаза (по показаниям) ¦ (133) ¦
+-----------------------------------------------+----------------+
¦Гаммаглютаминтрансфераза (по показаниям) ¦ (123) ¦
+-----------------------------------------------+----------------+
¦Альдолаза (по показаниям) ¦ (94) ¦
+-----------------------------------------------+----------------+
¦Глютаматдегидрогеназа (по показаниям) ¦ (122) ¦
L-----------------------------------------------+-----------------
4.5. Парафармацевтики, обладающие диуретическими свойствами.
Определение суточного диуреза.
Контроль за уровнем артериального давления.
Определение концентрации калия и натрия в сыворотке крови,
эритроцитах и моче (по показаниям).
Определение кислотно - основного состояния крови (по
показаниям).
Показатели системы свертывания крови (по показаниям).
Электрокардиографическое исследование в динамике.
4.6. Парафармацевтики, обладающие общеукрепляющим и
противовоспалительным действием.
По показаниям изучается состояние гуморального и клеточного
иммунитета, интенсивность процессов перекисного окисления липидов
и показатели антиоксидантной защиты организма.
Показатели гуморального иммунитета - количество B-клеток
(СД19, СД20).
Иммуноглобулины основных классов (JgA, JgM, JgG) (132).
Показатели клеточного иммунитета - фенотипирование Т-клеток
(СД3 - общий Т-лимфоцитов СД4 - хелперы, СД8 - цитотоксические
клетки супрессоры) (132).
Неспецифический иммунный ответ - компоненты системы
комплемента, определение числа фагоцитирующих клеток и
фагоцитарного индекса, генерация супероксидного аниона
нейтрофилами (O2*) (132).
4.7. Критерии анорексигенной активности БАД.
Оценка биологически активных добавок к пище анорексигенного
действия осуществляется по степени выраженности специфического
эффекта и динамике массы тела.
Критерии анорексигенной активности БАД.
Объективная оценка чувства голода проводится каждый день перед
приемом пищи в одно и то же время одним и тем же врачом по
специальной шкале: невыносимый голод - 5 баллов, голод с чувством
беспокойства - 4 балла, чувство голода - 3 балла, еда с аппетитом
- 2 балла, еда без аппетита - 1 балл, отвращение к еде - 0 баллов.
О выраженности анорексигенного действия можно судить по
частоте приема БАД в течение дня.
Степень потери массы тела оценивается по коэффициенту потери
массы тела от исходной величины до лечения (ПИ). Коэффициент
рассчитывается в конце курса лечения по следующей формуле:
Е
ПИ = -- x 100%,
Т
где:
Е - потеря массы тела;
Т - исходная масса тела.
При исследовании анорексигенного действия БАД необходима
проверка на отсутствие в их составе эфедрина и других
психостимулирующих средств. Метод определения эфедрина изложен в
Приложениях к данному разделу.
5. Биологически активные добавки к пище могут быть разрешены к
применению без проведения клинических испытаний на основании
экспертизы необходимой документации:
а) при наличии представленных фирмой - изготовителем
материалов, свидетельствующих о клинических испытаниях
эффективности предлагаемой БАД; клинические испытания должны быть
выполнены в уполномоченных на проведение таких исследований
учреждениях в Российской Федерации и/или стране - изготовителе;
б) если БАД содержит отдельные нутриенты и их комплексы в
дозировке уже установленной и апробированной для этого вида БАД в
Российской Федерации;
в) если парафармацевтики содержат изученные и уже
использующиеся в клинической практике растительные компоненты в
дозах, установленных для БАД в Российской Федерации.
Решение о необходимости проведения клинических
испытаний принимаются, если:
а) фирмой - заявителем направляется на сертификацию БАД без
соответствующей документации, подтверждающей ее эффективность
результатами проведенных клинических испытаний;
б) БАД содержит новые действующие ингредиенты;
в) требуется разрешение к применению в связи с новыми
показаниями, новой дозировкой, изменением состава, а также в
случае изменения в технологическом регламенте.
Приложение 1
к разделу "Нутрицевтики"
БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ ДОБАВКИ
К ПИЩЕ - ИСТОЧНИКИ БЕЛКА И АМИНОКИСЛОТ
ПОКАЗАТЕЛИ И МЕТОДЫ ОЦЕНКИ ЭФФЕКТИВНОСТИ
-----------------------T----------------------------T------------¬
¦ Показатель ¦ Метод ¦Литературный¦
¦ ¦ ¦ источник ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Аминокислотный состав ¦Исследования проводятся на ¦ (24) ¦
¦нутрицевтика с ¦автоматических анализаторах ¦ ¦
¦отдельным изучением ¦аминокислот ¦ ¦
¦триптофана и серо- ¦ ¦ ¦
¦содержащих аминокис- ¦ ¦ ¦
¦лот ¦ ¦ ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Биологическая ценность¦Исследования проводятся в ¦ (24) ¦
¦и усвояемость БАД к ¦эксперименте на крысах с ¦ ¦
¦пище ¦изучением скорости роста ¦ ¦
¦ ¦молодых животных или рас- ¦ ¦
¦ ¦четом аминокислотного скора ¦ ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Общий белок ¦Унифицированный метод по ¦ (25) ¦
¦ ¦биуретовой реакции ¦ ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Альбумин ¦Унифицированный метод с ¦ (26) ¦
¦ ¦бромкрезоловым зеленым ¦ ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Белковые, фракции ¦Унифицированный метод ¦ (27) ¦
¦(альбумины, глобулины)¦электрофоретического ¦ ¦
¦ ¦разделения на пленках ¦ ¦
¦ ¦из ацетата целлюлозы ¦ ¦
L----------------------+----------------------------+-------------
Приложение 2
к разделу "Нутрицевтики"
БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ
ДОБАВКИ К ПИЩЕ - ИСТОЧНИКИ ЛИПИДОВ
(ЭССЕНЦИАЛЬНЫЕ И НЕЭССЕНЦИАЛЬНЫЕ ЛИПИДНЫЕ
КОМПОНЕНТЫ ПИЩИ)
ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ЛИПИДНЫХ
КОМПОНЕНТОВ В БАД К ПИЩЕ
-----------------------T----------------------------T------------¬
¦ Показатель ¦ Метод ¦Литературный¦
¦ ¦ ¦ источник ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Эссенциальные жирные ¦ГЖХ-жирных кислот ¦ (28) ¦
¦кислоты ¦ ¦ ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Фосфолипиды ¦ВЭЖХ ¦ (29) ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Стерины ¦Хромато - масс - спектро- ¦ (30) ¦
¦ ¦метрический ¦ ¦
L----------------------+----------------------------+-------------
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЛИПИДНЫХ КОМПОНЕНТОВ
В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ (ЭФФЕКТИВНОСТЬ УСВОЕНИЯ)
----------------------------------------------------T------------¬
¦ Показатель ¦Литературный¦
¦ ¦ источник ¦
+---------------------------------------------------+------------+
¦Жирно - кислотный состав тромбоцитов и эритроцитов ¦ (31) ¦
+---------------------------------------------------+------------+
¦Содержание и состав фосфолипидов в тканях ¦ (32) ¦
L---------------------------------------------------+-------------
Приложение 3
к разделу "Нутрицевтики"
БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ ДОБАВКИ
К ПИЩЕ - ИСТОЧНИКИ УГЛЕВОДОВ
ПОКАЗАТЕЛИ И МЕТОДЫ ОЦЕНКИ
ЭФФЕКТИВНОСТИ И КАЧЕСТВА
-----------------------T----------------------------T------------¬
¦ Показатель ¦ Метод ¦Литературный¦
¦ ¦ ¦ источник ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Углеводы в БАД к пище ¦ВЭЖХ ¦(56) ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Исследования гликеми- ¦Спектрофотометрический ¦(57, 58) ¦
¦ческих кривых ¦ ¦ ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Дисахариды в слизистой¦ ¦(59) ¦
¦кишечника ¦ ¦ ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Экспериментальная ¦ ¦(60) ¦
¦оценка гипогликемичес-¦ ¦ ¦
¦кого действия в опытах¦ ¦ ¦
¦на животных ¦ ¦ ¦
L----------------------+----------------------------+-------------
Приложение 4
к разделу "Нутрицевтики"
БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ ДОБАВКИ
К ПИЩЕ - ИСТОЧНИКИ ВИТАМИНОВ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ВИТАМИНОВ В БАД К ПИЩЕ
-----------------------T----------------------------T------------¬
¦ Показатель ¦ Метод ¦Литературный¦
¦ ¦ ¦ источник ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Витамин А и ¦ВЭЖХ ¦ (33) ¦
¦каротиноиды ¦ ¦ ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Витамин Е ¦ВЭЖХ ¦ (33) ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Витамин Д ¦ВЭЖХ ¦ (33) ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Витамин С (аскорбино- ¦Метод визуального титрования¦ (34) ¦
¦вая кислота) ¦2,6-дихлорфенолиндофенолом ¦ ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Витамин В1 ¦Флуориметрический тиохромный¦ (35) ¦
¦ ¦метод ¦ ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Витамин В2 ¦Флуориметрический (титро- ¦ (38) ¦
¦ ¦вание рибофлавинсвязыва- ¦ ¦
¦ ¦ющим апобелком) ¦ ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Витамин РР ¦Флуориметрический метод ¦ (35) ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Витамин В6 ¦ВЭЖХ ¦ (33) ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Витамин В12 ¦Радиоиммунологический ¦ (35) ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Фолиевая кислота ¦Радиоиммунологический метод ¦ (35) ¦
¦ ¦конкурентного связывания ¦ ¦
L----------------------+----------------------------+-------------
ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ВИТАМИНОВ
В БИОЛОГИЧЕСКИХ СРЕДАХ
-----------------------T----------------------------T------------¬
¦ Показатель ¦ Метод ¦Литературный¦
¦ ¦ ¦ источник ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Витамин А и ¦ВЭЖХ ¦ (36) ¦
¦каротиноиды ¦ ¦ ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Витамин Е ¦ВЭЖХ ¦ (36) ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Витамин С ¦Метод визуального титрования¦ (35) ¦
¦(аскорбиновая кислота)¦2,6-дихлорфенолиндофенолом ¦ ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Витамин В1 ¦Определение коэффициента ¦ (35) ¦
¦ ¦активации транскелолазы ¦ ¦
¦ ¦эритроцитов колориметричес- ¦ ¦
¦ ¦ким методом (в крови), спек-¦ ¦
¦ ¦трофотометрическим (в моче) ¦ ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Витамин В2 ¦Флуориметрический (титро- ¦ (38) ¦
¦ ¦вание рибофлавинсвязыва- ¦ ¦
¦ ¦ющим апобелком) ¦ ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Витамин РР ¦Флуориметрический метод ¦ (40) ¦
¦ ¦(в крови и моче) ¦ ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Витамин В6 ¦ВЭЖХ (в крови и моче) ¦ (39) ¦
L----------------------+----------------------------+-------------
Приложение 5
к разделу "Нутрицевтики"
БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ ДОБАВКИ
К ПИЩЕ - ИСТОЧНИКИ МИНЕРАЛЬНЫХ ВЕЩЕСТВ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ МИНЕРАЛЬНЫХ
ВЕЩЕСТВ В БАД К ПИЩЕ
-----------------------T----------------------------T------------¬
¦ Показатель ¦ Метод ¦Литературный¦
¦ ¦ ¦ источник ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Кальций ¦Визуальное титрование ¦ (35) ¦
¦ ¦с кальцеином ¦ ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Фосфор неорганический ¦Колориметрический ¦ (35) ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Натрий, калий, магний,¦Атомно - абсорбционный ¦ (41) ¦
¦железо, цинк, медь, ¦ ¦ ¦
¦хром, молибден ¦ ¦ ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Селен ¦Спектрофлюориметрический ¦ (42) ¦
L----------------------+----------------------------+-------------
ОПРЕДЕЛЕНИЕ МИНЕРАЛЬНЫХ ВЕЩЕСТВ
В БИОЛОГИЧЕСКИХ СРЕДАХ
-----------------------T----------------------------T------------¬
¦ Показатель ¦ Метод ¦Литературный¦
¦ ¦ ¦ источник ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Кальций ¦Визуальное титрование с ¦ (35) ¦
¦ ¦кальцеином (кровь, моча) ¦ ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Фосфор неорганический ¦Колориметрический ¦ (35) ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Натрий, калий, магний,¦Атомно - абсорбционный ¦ (41) ¦
¦железо, цинк, медь, ¦(кровь, моча) ¦ ¦
¦хром, молибден ¦ ¦ ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Селен ¦Спектрофлюориметрический ¦ (42) ¦
L----------------------+----------------------------+-------------
Приложение 6
к разделу "Нутрицевтики"
ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ БИОЛОГИЧЕСКИ
АКТИВНЫХ ДОБАВОК К ПИЩЕ, СОДЕРЖАЩИХ ЖЕЛЕЗО
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ НА КРЫСАХ
-----------T----------T--------------T-------------T-------------¬
¦Количество¦Количество¦Эксперимен- ¦Продолжитель-¦ Исходная ¦
¦групп крыс¦ крыс ¦тальные группы¦ность опыта ¦масса крыс, г¦
¦ ¦ в группе ¦ ¦ ¦ ¦
+----------+----------+--------------+-------------+-------------+
¦ 3 ¦ 8 - 10 ¦контроль ¦2 - 3 месяца ¦ 30 - 50 ¦
¦ ¦ ¦опыт-1 ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦опыт-2 ¦ ¦ ¦
L----------+----------+--------------+-------------+--------------
Описание групп крыс:
- контроль - контрольная группа крыс находится на обычном
полусинтетическом рационе;
- опыт-1 и опыт-2 - у этих групп животных создается модель
алиментарной железодефицитной анемии. Для этого крысы этих групп
рассаживаются в специальные клетки (пластмассовые клетки без
каких-либо железосодержащих составляющих с прорезями внизу, что
исключает копрофагию у крыс) и получают корм, из которого
полностью исключено железо (при необходимости отдельные компоненты
полусинтетического рациона максимально отмывают от железа). Состав
экспериментального рациона: казеин - 22%, подсолнечное масло
(рафинированное) - 10%, кукурузный крахмал - 60,7%, целлюлоза -
3%, солевая смесь - 0,1 % (без добавления железа), витаминная
смесь - 0,1%, холинхлорид - 0,2%. С подсолнечным маслом в корм
вносится ретинолпальмитат и витамин Д. Весь рацион готовится на
деионизированной воде, эту же воду в ходе эксперимента используют
в качестве питьевой воды. Скорость и глубину развития
железодефицитной анемии контролируют, определяя концентрацию
гемоглобина в периферической крови. При снижении концентрации
гемоглобина ниже 90 г/л считается, что у животных имеется
железодефицитная анемия. Для ее подтверждения часть животных из
группы опыт-1 забивают и определяют: концентрацию гемоглобина в
периферической крови, концентрацию железа в сыворотке крови, общую
железосвязывающую способность сыворотки крови и рассчитывают
коэффициент насыщения трансферрина, содержание железа в сыворотке
в печени крыс, количество эритроцитов в периферической крови,
мазок крови на наличие анизо- и пойкилоцитоза. При подтверждении
железодефицитной анемии животным группы опыт-2 в корм вносят
исследуемую биологически активную добавку к пище (с
соответствующим расчетом на содержание железа). Восстановление
статуса железа в организме крыс в дальнейшем ходе эксперимента
оценивают по концентрации гемоглобина в крови. При восстановлении
концентрации гемоглобина в крови до величин, имеющих место у
контрольной группы животных, экспериментальных животных забивают и
определяют гематологические и биохимические показатели,
характеризующие состояние обмена железа в организме. Важно
определить содержание железа в печени, т.к. этот показатель
характеризует запасы железа в организме.
Приложение 7
к разделу "Нутрицевтики"
БИОЛОГИЧЕСКИЕ АКТИВНЫЕ ДОБАВКИ К ПИЩЕ,
СПОСОБСТВУЮЩИЕ ВЫВЕДЕНИЮ ИЗ ОРГАНИЗМА ЧУЖЕРОДНЫХ
И ТОКСИЧНЫХ ВЕЩЕСТВ, ПРОДУКТОВ ОБМЕНА ВЕЩЕСТВ
-----------------------T----------------------------T------------¬
¦ Показатель ¦ Метод ¦Литературный¦
¦ ¦ ¦ источник ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Определение содержания¦Спектрофотометрический ¦ (46) ¦
¦цитохрома Р-450 в ор- ¦ ¦ ¦
¦ганах эксперименталь- ¦ ¦ ¦
¦ных животных ¦ ¦ ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Определение активности¦Спектрофотометрический ¦ (47) ¦
¦о-демитилирования ами-¦ ¦ ¦
¦допирина ¦ ¦ ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Определение активности¦Спектрофотометрический ¦ (48) ¦
¦о-демитилирования ¦ ¦ ¦
¦р-нитроанизола ¦ ¦ ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Определение гидрокси- ¦Спектрофлюориметрический ¦ (49) ¦
¦лирования 3,4-бензпи- ¦ ¦ ¦
¦рена ¦ ¦ ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Определение о-диэтили-¦Спектрофлюориметрический ¦ (50) ¦
¦рования 7-этоксикума- ¦ ¦ ¦
¦рина ¦ ¦ ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Определение о-диэтили-¦Спектрофлюориметрический ¦ (51) ¦
¦рования 7-этоксирезо- ¦ ¦ ¦
¦фурина ¦ ¦ ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Определение активности¦Спектрофотометрический, ¦ (52) ¦
¦лизосомальных фермен- ¦спектрофлюориметрический ¦ ¦
¦тов: арилсульфатазы А ¦ ¦ ¦
¦и В, бета - галактози-¦ ¦ ¦
¦даза, бета - глюкуро- ¦ ¦ ¦
¦нидаза, альфа - манно-¦ ¦ ¦
¦зидаза, бета-N-ацетил-¦ ¦ ¦
¦глюкозаминидаза в ¦ ¦ ¦
¦сыворотке крови и ¦ ¦ ¦
¦органах лабораторных ¦ ¦ ¦
¦животных ¦ ¦ ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Определение активности¦Спектрофлюориметрический ¦ (53) ¦
¦эпоксидгидролазы в ¦ ¦ ¦
¦субклеточных фракциях ¦ ¦ ¦
¦печени и слизистой ¦ ¦ ¦
¦тонкой кишки ¦ ¦ ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Определение активности¦Спектрофотометрический и ¦ (54) ¦
¦УДР-глюкоуронозил- ¦спектрофлюориметрический ¦ ¦
¦трансферазы ¦ ¦ ¦
+----------------------+----------------------------+------------+
¦Определение активности¦Спектрофотометрический ¦ (55) ¦
¦карбоксилэстеразы в ¦ ¦ ¦
¦субклеточных фракциях ¦ ¦ ¦
¦и слизистой тонкой ¦ ¦ ¦
¦кишки ¦ ¦ ¦
L----------------------+----------------------------+-------------
Приложение 1
к разделу "Парафармацевтики"
ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ
БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ДОБАВОК
К ПИЩЕ, ПРИМЕНЯЕМЫХ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ
ОБРАЗОВАНИЯ N-НИТРОЗАМИНОВ
Известно, что наличие в пищевых продуктах азотсодержащих
соединений (аминов, амидов, алкилмочевин и др.), а также нитратов
и нитритов может приводить к образованию канцерогенных
N-нитрозаминов как в пищевом продукте, так и в организме, причем
компоненты, входящие в состав пищевого продукта, могут усиливать,
замедлять или полностью ингибировать этот процесс. БАД к пище,
являющиеся в основном высокоактивными соединениями, могут играть
важную роль как в экзогенном, так и в эндогенном образовании
канцерогенных N-нитрозаминов. В связи с этим оценка эффективности
применяемых БАД к пище как ингибиторов образования канцерогенных
N-нитрозаминов имеет важное значение.
Оценка эффективности ингибирования
нитрозирования в условиях IN VITRO
В среду, состоящую из 5 мл натурального желудочного сока pH
0,8 - 1,0, 0,5 мл водного раствора нитрита натрия (концентрация 30
мг/мл ) и 0,5 мл диэтиламина (концентрация 46,7 мг/мл), вносят 1
мл раствора БАД к пище (БАД к пище растворяется в соответствующем
растворителе, концентрация БАД выбирается в зависимости от
рекомендуемой дозировки), энергично перемешивают до полного
растворения, доводят pH раствора до 4,5 добавлением 0,1 н раствора
соляной кислоты или 0,1 н раствора гидроокиси натрия. Контрольный
опыт проводят аналогично, но вместо раствора БАД к смеси
желудочного сока и предшественников нитрозаминов добавляется 1 мл
соответствующего растворителя. Смеси (опыт и контроль)
термостатируются при 37 -C в течение 30 мин. Реакцию останавливают
добавлением 0,1 н раствора гидроокиси натрия (pH 8 - 9).
Образовавшиеся нитрозамины извлекают из смеси экстракцией
свежеперегнанным метиленхлоридом.
Объединенные экстракты высушивают прокаленным сульфатом
магния, концентрируют и проводят идентификацию и количественное
определение нитрозаминов хемилюминисцентным методом (80) и (41).
ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ИНГИБИРОВАНИЯ
НИТРОЗИРОВАНИЯ В УСЛОВИЯХ IN VIVO
-----------------T------------T--------------T----------T--------¬
¦ Вид ¦ Количество ¦Исходная масса¦Количество¦Название¦
¦ животных ¦ групп ¦ животных, г ¦ животных ¦ групп ¦
¦ ¦ животных ¦ ¦ в группе ¦животных¦
+----------------+------------+--------------+----------+--------+
¦крысы, самцы ¦ 2 ¦ 100 - 150 ¦ 10 ¦контроль¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦опыт ¦
L----------------+------------+--------------+----------+---------
Крысы обеих групп (контроль и опыт) находятся на
полусинтетическом рационе. Каждому животному контрольной и опытной
группы натощак вводят желудочным зондом последовательно по 1 мл
водных растворов нитрита натрия (в пересчете на нитрит-ион) и
диэтиламина в дозах соответственно 15 и 24 мг/кг массы крысы.
Животным опытной группы, помимо предшественников, вводят 1 мл БАД
к пище. Животным контрольной группы - 1 мл соответствующего
растворителя, используемого для растворения БАД к пище. Ровно
через 30 мин. после введения растворов всех животных забивают,
отделяют желудок вместе с содержимым, помещают в жидкий азот.
Анализ N-нитрозаминов осуществляют хемилюминисцентным методом (81)
и (41).
НИТРОЗОПРОЛИНОВЫЙ ТЕСТ
-----------------T------------T--------------T----------T--------¬
¦ Вид ¦ Количество ¦Исходная масса¦Количество¦Название¦
¦ животных ¦ групп ¦ животных, г ¦ животных ¦ групп ¦
¦ ¦ животных ¦ ¦ в группе ¦животных¦
+----------------+------------+--------------+----------+--------+
¦крысы, самцы ¦ 2 ¦ 100 - 150 ¦ 10 ¦контроль¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦опыт ¦
L----------------+------------+--------------+----------+---------
Крысы обеих групп находятся на полусинтетическом рационе.
Контроль - крысам натощак вводят 1 мл водных растворов нитрита
натрия и пролина в дозах соответственно 15 и 50 мг/кг массы тела
животного. Опыт - крысам помимо нитрита натрия и пролина вводят
натощак 1 мл раствора БАД к пище. Крыс обеих групп помещают в
обменные клетки на сутки для сбора мочи, предварительно в сосуды
для сбора мочи вносят 1 мл 30%-ного раствора гидроксида натрия.
Собранную мочу замораживают до минус 18 -C и хранят до проведения
анализа на содержание нитрозопролина (не более 10 дней).
Содержание нитрозопролина определяют по (79).
Приложение 2
к разделу "Парафармацевтики"
ОЦЕНКА ВЛИЯНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ
АКТИВНЫХ ДОБАВОК К ПИЩЕ, ПРЕДЛАГАЕМЫХ В КАЧЕСТВЕ
ЗАЩИТНЫХ СРЕДСТВ ОТ ИОНИЗИРУЮЩЕГО ИЗЛУЧЕНИЯ
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ НА КРЫСАХ
-------------T------------T-------------------T------------------¬
¦ Количество ¦ Количество ¦ Экспериментальные ¦ Продолжительность¦
¦ групп ¦ животных ¦ группы ¦ опыта ¦
¦ животных ¦ в группе ¦ ¦ ¦
+------------+------------+-------------------+------------------+
¦ 2 ¦ 10 ¦контроль ¦ 30 дней ¦
¦ ¦ ¦опыт ¦ ¦
L------------+------------+-------------------+-------------------
|
