|
Стр. 8
¦8. ¦Трупы ла- ¦Сжигание ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦бораторных+---------+---------------------------+----+-------------+
¦ ¦животных ¦Обработка¦ ¦60 ¦ ¦
¦ ¦ ¦в паровом¦1,5 кгс/кв. см (126 +/- 2 ¦мин.¦ ¦
¦ ¦ ¦стерили- ¦град. С) ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦заторе ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦(автокла-¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ве) ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ +---------+---------------------------+----+ ¦
¦ ¦ ¦Поверх- ¦10% раствор лизола ¦48 ¦ ¦
¦ ¦ ¦ностное ¦ ¦ча- ¦ ¦
¦ ¦ ¦обеззара-¦ ¦сов ¦ ¦
¦ ¦ ¦живание ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦путем по-¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦гружения ¦ ¦ ¦ ¦
+---+----------+---------+---------------------------+----+-------------+
¦9. ¦Банки для ¦Залить до¦2% раствор ДТСГК ¦48 ¦ ¦
¦ ¦животных ¦краев и ¦ ¦ча- ¦ ¦
¦ ¦ ¦протереть¦ ¦сов ¦ ¦
¦ ¦ ¦ +---------------------------+----+ ¦
¦ ¦ ¦ ¦3% раствор сульфохлоран- ¦48 ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦тина или сульфохлорантина М¦ча- ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦сов ¦ ¦
¦ ¦ ¦ +---------------------------+----+ ¦
¦ ¦ ¦ ¦2% раствор бензилфенола ¦48 ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ча- ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦сов ¦ ¦
¦ ¦ ¦ +---------------------------+----+ ¦
¦ ¦ ¦ ¦5% раствор лизола ¦48 ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ча- ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦сов ¦ ¦
¦ ¦ ¦ +---------------------------+----+ ¦
¦ ¦ ¦ ¦3% раствор хлорамина ¦48 ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ча- ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦сов ¦ ¦
+---+----------+---------+---------------------------+----+-------------+
¦10.¦Инструмен-¦Кипячение¦2% раствор соды ¦30 ¦ ¦
¦ ¦ты после ¦ ¦ ¦мин.¦ ¦
¦ ¦вскрытия ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦животных ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+---+----------+---------+---------------------------+----+-------------+
¦11.¦Подстилоч-¦Обработка¦ ¦60 ¦ ¦
¦ ¦ный мате- ¦в паровом¦1,5 кгс/кв. см (126 +/- 2 ¦мин.¦ ¦
¦ ¦риал, ос- ¦стерили- ¦град. С) ¦ ¦ ¦
¦ ¦татки кор-¦заторе ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦мов, выде-¦(автокла-¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ления жи- ¦ве) ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦вотных ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+---+----------+---------+---------------------------+----+-------------+
¦12.¦Ветошь, ¦Кипячение¦2% раствор соды ¦30 ¦ ¦
¦ ¦уборочный ¦ ¦ ¦мин.¦ ¦
¦ ¦материал +---------+---------------------------+----+-------------+
¦ ¦ ¦Погруже- ¦2% раствор ДТСГК ¦120 ¦ ¦
¦ ¦ ¦ние ¦ ¦мин.¦ ¦
¦ ¦ ¦ +---------------------------+----+ ¦
¦ ¦ ¦ ¦3% раствор сульфохлоран- ¦120 ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦тина или сульфохлорантина М¦мин.¦ ¦
¦ ¦ ¦ +---------------------------+----+ ¦
¦ ¦ ¦ ¦2,5% раствор бензилфенола ¦120 ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦мин.¦ ¦
¦ ¦ ¦ +---------------------------+----+ ¦
¦ ¦ ¦ ¦5% раствор лизола А ¦120 ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦мин.¦ ¦
¦ ¦ ¦ +---------------------------+----+ ¦
¦ ¦ ¦ ¦5% раствор хлорамина ¦120 ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦мин.¦ ¦
+---+----------+---------+---------------------------+----+-------------+
¦13.¦Металли- ¦Обработка¦1,1 кгс/кв. см (120 +/- 2 ¦60 ¦ ¦
¦ ¦ческие ¦в паровом¦ град. С) ¦мин.¦ ¦
¦ ¦бачки, ¦стерили- +---------------------------+----+ ¦
¦ ¦ящики ¦заторе ¦ ¦30 ¦ ¦
¦ ¦из-под ¦(автокла-¦2,0 кгс/кв. см (132 +/- 2 ¦мин.¦ ¦
¦ ¦вскрытых ¦ве) ¦град. С) ¦ ¦ ¦
¦ ¦животных ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+---+----------+---------+---------------------------+----+-------------+
¦14.¦Аэрозоль- ¦ ¦6% раствор перекиси водоро-¦ Д ¦(1500 ¦
¦ ¦ный метод ¦ ¦да с 0,5% моющего средства ¦ ¦мл/куб. м) ¦
¦ ¦дезинфек- ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ции поме- ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦щений с ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦помощью ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦пневмати- ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ческой ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦(ПВАН) ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦или турбу-¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦лирующей ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦насадок ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+---+----------+---------+---------------------------+----+-------------+
¦А - с момента закипания; ¦
¦R - для риккетсий; ¦
¦К - для коксиелл Бернета; ¦
¦П - с последующим автоклавированием; ¦
¦В - при попадании заразного материала экспозиции увеличивают до 4 мин; ¦
¦Д - Двукратная обработка с интервалом 30 мин., продолжительность конта-¦
¦ кта 2 часа. ¦
L------------------------------------------------------------------------
Приложение 5.5
(Справочное)
ХИМИЧЕСКИЕ ТЕСТЫ ДЛЯ КОНТРОЛЯ ТЕМПЕРАТУРНЫХ
ПАРАМЕТРОВ РЕЖИМА РАБОТЫ ПАРОВЫХ СТЕРИЛИЗАТОРОВ
(Методические указания по контролю работы
паровых и воздушных стерилизаторов
N 15/6-5 от 28.02.91 г.)
-----T------------T---------------T---------T-------T-------------------¬
¦N ¦Наименование¦ Цвет, форма ¦Норматив-¦Коли- ¦ Температурные па- ¦
¦ре- ¦составных ¦ кристаллов, ¦но-техни-¦чество ¦ раметры, подлежа- ¦
¦цеп-¦частей ¦ запах ¦ческая ¦компо- ¦ щие контролю, ¦
¦ту- ¦ ¦ ¦докумен- ¦нентов ¦ град. С ¦
¦ры ¦ ¦ ¦тация ¦ +----T----T----T----+
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦110+¦120+¦126+¦132-¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ 2 ¦ 2 ¦ 2 ¦ 2 ¦
+----+------------+---------------+---------+-------+----+----+----+----+
¦ 1 ¦ 2 ¦ 3 ¦ 4 ¦ 5 ¦ 6 ¦ 7 ¦ 8 ¦ 9 ¦
+----+------------+---------------+---------+-------+----+----+----+----+
¦ 1 ¦Антипирин<1>¦Бесцветные кри-¦ГФ Х<2>, ¦99,9+/-¦+<3>¦ - ¦ - ¦ - ¦
¦ ¦ ¦сталлы или бе-¦ст.65 ¦0,01 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦лый порошок без¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦запаха ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦Краситель<4>¦ ¦ТУ 6-09- ¦ 0,1+/-¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦Фуксин кисл.¦ ¦3803-82 ¦0,01 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦или феноло-¦ ¦ТУ 6-09- ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦вый красный¦ ¦5170-84 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦или бромти-¦ ¦ТУ 6-09- ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦молов. синий¦ ¦2086-77 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦или генциан-¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦фиолетовый ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+----+------------+---------------+---------+-------+----+----+----+----+
¦ 2 ¦Резорцин ¦Белый или со¦ГФ X, ¦99,9+/-¦ + ¦ - ¦ - ¦ - ¦
¦ ¦ ¦слабым желтова-¦ст.577 ¦0,01 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦тым оттенком¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦кристаллический¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦порошок со¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦слабым характе-¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦рным запахом ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦Краситель ¦ ¦ ¦ 0,1+/-¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦0,01 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+----+------------+---------------+---------+-------+----+----+----+----+
¦ 3 ¦Сера эле- ¦Желтые кристал-¦ТУ 6-09- ¦ 100,0 ¦ - ¦ + ¦ - ¦ - ¦
¦ ¦ментарная ¦лы<5> ¦2546-77 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+----+------------+---------------+---------+-------+----+----+----+----+
¦ 4 ¦Кислота ¦Бесцветные иго-¦ГФ X, ¦95,24+/¦ - ¦ + ¦ - ¦ - ¦
¦ ¦бензойная ¦льчатые криста-¦ст.9 ¦- 0,01 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ллы или белый¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦порошок ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦Краситель ¦ ¦ ¦4,76+/-¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦0,01 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+----+------------+---------------+---------+-------+----+----+----+----+
¦ 5 ¦Бензамид ¦Бесцветные кри-¦ТУ 6-09- ¦ 100,0 ¦ - ¦ - ¦ + ¦ - ¦
¦ ¦ ¦сталлы ¦14-21-04 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦-81 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+----+------------+---------------+---------+-------+----+----+----+----+
¦ 6 ¦Сукцинимид ¦Бесцветные кри-¦ТУ 6-09- ¦ 100,0 ¦ - ¦ - ¦ + ¦ - ¦
¦ ¦ ¦сталлы в виде¦08-889-83¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦пластинчатых ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦игл ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+----+------------+---------------+---------+-------+----+----+----+----+
¦ 7 ¦Кислота ¦Бесцветные иго-¦ГОСТ 6413¦99,9+/-¦ - ¦ + ¦ - ¦ - ¦
¦ ¦бензойная ¦льчатые крис-¦-77 ¦0,01 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦таллы или белый¦ГОСТ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦порошок ¦10521-78 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦Краситель ¦ ¦ ¦ 0,1+/-¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦0,01 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+----+------------+---------------+---------+-------+----+----+----+----+
¦ 8 ¦D(+) Манноза¦Бесцветные кри-¦ТУ 6-09- ¦99,9+/-¦ - ¦ - ¦ - ¦ + ¦
¦ ¦ ¦сталлы в виде¦07-666-76¦0,01 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ромбических ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦призм ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦Краситель ¦ ¦ ¦ 0,1+/-¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦0,01 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+----+------------+---------------+---------+-------+----+----+----+----+
¦ 9 ¦Никотинамид ¦Белый мелкокри-¦ГФ X, ¦99,9+/-¦ - ¦ - ¦ + ¦ - ¦
¦ ¦ ¦сталлический ¦ст.452 ТУ¦0,01 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦порошок со сла-¦6-09-08- ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦бым запахом ¦852-82 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦Краситель ¦ ¦ ¦ 0,1+/-¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦0,01 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+----+------------+---------------+---------+-------+----+----+----+----+
¦ 10 ¦Мочевина ¦Бесцветные кри-¦ГОСТ ¦95,24+/¦ - ¦ - ¦ - ¦ + ¦
¦ ¦ ¦сталлы ¦6691-77 ¦- 0,01 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦Краситель ¦ ¦ ¦4,76+/-¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦0,01 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
L----+------------+---------------+---------+-------+----+----+----+-----
--------------------------------
Примечание:
<1> - относится к сильнодействующим лекарственным средствам,
применение и хранение которых должно проводиться с
предосторожностью: хранение в закрытых шкафах, в сухом помещении;
<2> - ГФ Х - Государственная фармакопея СССР, Х издание;
<3> - "+" - температурный параметр, для контроля используется
химическое соединение;
<4> - используют любой из красителей, перечисленных в
рецептуре 1;
<5> - при использовании серы в качестве химического теста
добавление красителя нецелесообразно, так как при плавлении
вещества не происходит его смешение с красителем.
Химические тесты для контроля температурных параметров
режимов работы воздушных стерилизаторов <1>
----T--------T-------------------------T----------T------T--------------¬
¦ N ¦Наимено-¦ Цвет, форма кристаллов, ¦Норматив- ¦Коли- ¦Температурный ¦
¦п/п¦вание ¦ запах ¦но-техни- ¦чество¦параметр, под-¦
¦ ¦хими- ¦ ¦ческая до-¦компо-¦лежащий конт-¦
¦ ¦ческого ¦ ¦кументация¦нента,¦ролю, град. С ¦
¦ ¦соеди- ¦ ¦ ¦грамм +------T-------+
¦ ¦нения ¦ ¦ ¦ ¦160-10¦ 180-10¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦град.С¦ град.С¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦160+2 ¦ 180+2 ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦град.С¦ град.С¦
+---+--------+-------------------------+----------+------+------+-------+
¦ 1 ¦Левоми- ¦Белый или белый со слабым¦ ГФ Х <3> ¦ 100,0¦ + <4>¦ - ¦
¦ ¦цитин<2>¦желтовато-зеленоватым ¦ ст.371 ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦оттенком кристаллический¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦порошок без запаха ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+---+--------+-------------------------+----------+------+------+-------+
¦ 2 ¦Кислота ¦Порошок белого цвета или¦ ГОСТ ¦ 100,0¦ - ¦ + ¦
¦ ¦винная ¦прозрачные бесцветные¦ 5817-77 ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦кристаллы ¦ ГОСТ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ 21205-83 ¦ ¦ ¦ ¦
+---+--------+-------------------------+----------+------+------+-------+
¦ 3 ¦Гидрохи-¦Бесцветные или светло-се-¦ ГОСТ ¦ 100,0¦ - ¦ + ¦
¦ ¦нон ¦рые серебристые кристаллы¦ 19627-74 ¦ ¦ ¦ ¦
+---+--------+-------------------------+----------+------+------+-------+
¦ 4 ¦Тиомоче-¦Блестящие бесцветные кри-¦ ГОСТ ¦ 100,0¦ - ¦ + ¦
¦ ¦вина ¦сталлы ¦ 6344-73 ¦ ¦ ¦ ¦
L---+--------+-------------------------+----------+------+------+--------
--------------------------------
Примечание:
<1> - В состав химических тестов, используемых для контроля
работы воздушных стерилизаторов, краситель не добавляют, т.к.
указанные химические соединения изменяют свой цвет при достижении
температуры плавления;
<2> - Относится к сильнодействующим лекарственным средствам,
применение и хранение которых проводится с предосторожностью,
хранение в закрытых шкафах в сухом помещении;
<3> - ГФ Х - Государственная Фармакопея СССР Х издание;
<4> - "+" - температурный режим, для контроля используют
химическое соединение.
Химические индикаторы в паровом стерилизаторе размещают в
каждой обеззараживаемой емкости и два - в самой камере, в
воздушных стерилизаторах - от 5 до 15 в зависимости от емкости
камеры.
Вместо химических тестов могут быть использованы
термовременные индикаторы (ТВИ), контролирующие температуру и
время стерилизации (ТВИ ИС-160 и ИС-180) при воздушной
стерилизации, а при паровой стерилизации (ИС-120 и ИС-132) и
наличия пара. Индикаторы представляют собой полоски длиной 2-3 см,
отрываемые от бумажной ленты с нанесенным на нее индикаторным
слоем, цвет которого необратимо меняется только при соблюдении
режимов стерилизации, утвержденных ГОСТом 22649-83 и ОСТом
42-21-2-85.
Приложение 5.6
(Обязательное)
БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД КОНТРОЛЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ
РАБОТЫ ПАРОВОГО СТЕРИЛИЗАТОРА
(Извлечение из "Методических указаний по контролю
работы паровых и воздушных стерилизаторов" 1991 г.
(N 15/6-5 Минздрав СССР)
1. Бактериологический контроль работы стерилизаторов проводят
после монтажа и ремонта аппаратуры, а также в процессе его
эксплуатации (плановый - 2 раза в год и при получении
неудовлетворительных результатов контроля).
Контроль эффективности работы стерилизаторов осуществляют
бактериологическим методом, используя биотесты на основании гибели
спор тест-культуры. Биотесты представляют собой флаконы из трубки
стеклянной для лекарственных средств ФИ/1-5 нс 1 ТУ 64-0709-10-88
(инсулиновые флаконы) или чашечки из алюминиевой фольги (диск
размером 14 мм с луночкой - вдавление от неоточенного края
карандаша), содержащие высушенные споры тест-культуры Вас.
stearothermophilus ВКМ В-718, помещенные в пакеты из упаковочной
бумаги (ОСТ 42-21-2-85). Упаковочные тесты нумеруют и размещают в
контрольные точки паровых стерилизаторов (5-10 тестов). По
окончании стерилизации биотесты подвергают бактериологическому
исследованию.
2. Штамм Вас. stearothermophilus ВКМ В-718 подвижная
термофильная палочка, по Граму окрашивается положительно,
культивируется при температуре 55 +/- 1 град. С, исключающей
развитие других широко распространенных микроорганизмов. Споры
овальные, расположенные центрально. На мясопептонном бульоне (рН
7,3 +/- 0,1) через 24 часа образует помутнение среды, на
мясо-пептонном агаре (рН 7,3 + 0,1) - слабо выпуклые колонии
диаметром 2-4 мм с ровным краем. Штамм непатогенен для человека и
животных. Штамм получен из Всесоюзной коллекции микроорганизмов
института биохимии и физиологии микроорганизмов, хранится в музее
культур НИИ профилактической токсикологии и дезинфекции (117246
г.Москва, Научный проезд, 18).
Приготовление биотеста
В ампулу с лиофилизированной культурой вносят 0,2 мл.
стерильной водопроводной воды и оставляют в течение 30 минут при
комнатной температуре.
Одну-две капли культуры засевают в 2 пробирки с бульоном (МПБ,
Хоттингера, питательный сухой) с 0,5% глюкозы. Суточную культуру
засевают на пробирки скошенного агара (Хоттингера, мясопептонный,
сухой питательный). Для получения спор культуру, выращенную на
твердой питательной среде, смывают 5 мл стерильной водопроводной
воды и переносят во флаконы со скошенным картофельнопептонным
агаром. Взвесь покачиванием флакона равномерно распределяют по
поверхности среды, инкубируют при 55 град. С в течение 10-12 суток
в наклонном положении агаром вверх. Для создания достаточной
влажности в термостат помещают открытые емкости с водой. На 7, 10
и 12 сутки культуру проверяют на интенсивность спорообразования.
Достаточным количеством считают 80-90% спор в поле зрения.
Культуру смывают стерильной дистиллированной водой. В целях
освобождения от вегетативных клеток суспензию прогревают на
водяной бане при температуре 65-70 град. С в течение 30 мин,
центрифугируют трехкратно с частотой вращения 33, 33 с - 1 (2000
об/мин) по 15 минут, промывая осадок стерильной дистиллированной
водой после каждого центрифугирования. Отмытые споры суспендируют
в стерильной дистиллированной воде в соотношении 1:1 по объему.
Суспензию спор хранят в холодильнике при температуре 4 град. С в
стерильных пробирках, закрытых ватно-марлевыми пробками с
резиновыми колпачками (срок хранения 2 года).
Чистоту культуры на всех этапах культивирования контролируют
высевом на агаровые пластинки.
Для определения титра жизнеспособных спор 0,1 мл исходной
-7
суспензии десятикратно разводят до 10 стерильной дистиллированной
водой, высевая на 3 агаровые пластинки по 0,1 мл ориентировочно из
-5 -7
10 - 10 (предел разведения зависит от титра полученных спор).
Посевы инкубируют в течение 48 часов, проводят подсчет выросших
колоний. Титр жизнеспособных спор в исходной суспензии определяют
как среднее арифметическое число колоний с учетом разведения
исходной суспензии и объема пробы для посева.
Пример расчетов. Предположим, что при посеве на три чашки
-5
Петри с агаром суспензия в разведении 1:100000 (10 ), подсчитано
-6
140, 110 и 134 колонии. Аналогичные высевы из разведений 10
-7
привели к образованию 12, 14 и 16 колоний; из 10 - 5, 3
и 7 колоний. Вычисляем общее число колоний, а затем среднее
количество колоний для каждого разведения 128, 14 и 5
Из расчета посевной дозы (0,1 мл на каждую чашку) вычисляем
титр жизнеспособных спор в 1 мл исходной суспензии с учетом
разведения, далее находим среднее арифметическое число колоний:
5 7
128 х 10 х 10 = 12 х 8 х 10 ;
6 7
14 x 10 х 10 = 14,0 х 10 ;
7 7
5 х 10 х 10 = 50,0 х 10 ;
Таким образом, титр исходной суспензии составит:
7 8
(12 х 8 + 14,0 + 50,0) х 10 : 3 = 2,5 х 10 спор в 1 мл. 7
Исходная суспензия должна содержать не менее 2,5 х 10
8 5 6
- 2,5 х 10 спор в 1 мл. Споры в количестве 5 х 10 - 5 х 10
вносят из исходной суспензии с помощью дозатора пипеточного (ТУ
64-1-3329-81) в 0,02 мл в носители (стерильные инсулиновые
флакончики с ватно - марлевой пробкой или чашечки из алюминиевой
фольги, разложенные в чашки Петри), подсушивают в термостате при
37 град. С или в эксикаторе над осушителем (силикагель, хлористый
кальций) при комнатной температуре в течение 24 часов. Для
определения фактической обсемененности исследуют не менее 3-х
биотестов от каждой группы. Во флаконы (чашечки) вносят по 1,0 мл
стерильной дистиллированной воды (чашечки из алюминиевой фольги,
отмывают в широкогорлых пробирках с бусами в 10 мл) и встряхивают
в течение 10 минут на аппарате для встряхивания жидкостей с
последующим высевом на 3 агаровые пластинки по 0,1 мл суспензии из
трех последовательных десятикратных разведений.
3. Определение устойчивости спор тест-культур к действию
водяного насыщенного пара под избыточным давлением проводят при
температуре 120 +/- 2 град. С.
Биотесты в упаковочной бумаге помещают в стерилизационной
коробке в камеру парового стерилизатора. После набора давления в
водопаровой камере 0,11+/-0,01 МПа (1,1+/-0,1 кгс/кв. см) проводят
продувку парового стерилизатора (вытеснение воздуха паром из
камеры парового стерилизатора) в течение 10 минут при открытом
спускном кране и давлении в стерилизационной камере от 0,01 до
0,02 МПа (от 0,1 до 0,2 кгс/кв. см). После продувки доводят
давление пара в стерилизационной камере до 0,11 +/- 0,01 МПа (1,1
+/- 0,1 кгс/кв. см) температура 120+/-2 град. С и через 5 минут
(времени выживания спор тест-культуры) с момента установления
давления спускают пар. Для уменьшения времени воздействия пара до
и после экспозиции подъем давления проводят максимум в течение 8
минут, спуск - в течение 3 минут.
Аналогичное исследование проводят в течение 15 минут времени
выдержки (время гибели спор тест-культуры). Контроль температуры
осуществляют максимальным термометром. По окончании времени
выдержки биотесты вынимают из стерилизатора и проводят
бактериологическое исследование.
Партию биотестов считают годными для использования, если
показатели устойчивости спор тест-культуры соответствуют
вышеописанным требованиям.
4. Для определения эффективности работы стерилизатора в
обеззараженные биотесты и контрольный (без стерилизации) стерильно
вносят по 5 мл питательной среды, инкубируют при 55 град. С в
течение 7 суток при ежедневном просмотре посевов, делая высевы на
агаровые пластинки, из проросших емкостей. При использовании
полусинтетической среды с индикатором феноловым красным рост
тест-культуры определяют по изменению красного цвета среды (рН 7,7
+/- 0,1 на желто-оранжевый (рН 6,7 +/- 0,1) за счет разложения
глюкозы с образованием кислоты.
В целях исключения ложного отрицательного результата (при
наличии роста тест-культуры отсутствует изменение цвета
питательной среды) флаконы (пробирки) должны быть плотно закрыты
стерильными резиновыми пробками (N 7,5; 12,5).
Отсутствие роста тест-культуры указывает на эффективность
работы стерилизатора. Рост других культур микроорганизмов относят
за счет вторичного обсеменения.
При наличии роста тест-штаммов проводится повторный контроль
на удвоенном количестве биотестов. Если и при повторной проверке
тест-культуры не инактивируются осуществляют тщательный контроль
технического состояния аппарата и контрольно-измерительных
приборов. При отсутствии роста тест-культур в контрольном биотесте
(не подвергшемся стерилизации) устанавливается причина
(нежизнеспособность тест-культуры, несоблюдение методики
приготовления биотестов, питательных сред, условий
культивирования).
5. Для спорообразования используют:
- картофельнопептонный агар (пептон - 5,0, мел - 1,0, агар -
25,0, картофельная вода - 1000 мл, рН 7,1 +/- 0,1. Сырой картофель
(200 г очищенного картофеля на 1 л водопроводной воды) тщательно
моют, очищают от кожуры и глазков, нарезают мелкими ломтиками,
заливают водопроводной водой и кипятят 30 мин. после закипания
(молодой картофель употреблять нельзя). Отвар отстаивают и
фильтруют в холодном состоянии через ватно-марлевый фильтр.
Доводят объем фильтрата до первоначального. Устанавливают рН 7,1
+/- 0,1. Добавляют пептон и агар. Нагревают, помешивая до полного
расплавления агара, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, после
чего добавляют мел. Разливают по флаконам, стерилизуют при 120
град. С в течение 30 мин. После стерилизации среду во флаконах
скашивают; - пшеничный агар (пшеничная крупа "Артек" или
"Полтавская" - 500,0, агар - 25,0, дистиллированная вода - 1000
мл), pH 7,3 +/- 0,1.
Пшеничную крупу "Артек" ("Полтавская") заливают
дистиллированной водой. Через 12 часов настой аккуратно сливают,
не выжимая, доводят до первоначального объема, добавляют агар и
растапливают на водяной бане или в автоклаве (текучим паром 1
час). Остывший агар выкладывают на противень и срезают осадок.
Агар растапливают на водяной бане, постоянно помешивая.
Устанавливают рН 7,3 +/- 0,1. Разливают во флаконы. Стерилизуют
текучим паром по 1 часу в течение 3 суток. После стерилизации
среду скашивают.
6. Для контроля используют бульон Хоттингера рН 7,3, агар
Хоттингера РН 7,3, питательный бульон сухой рН 7,1 (Дагестанский
НИИ питательных сред), питательный агар сухой рН 7,3 (Дагестанский
НИИ питательных сред), среда питательная для контроля стерильности
сухая (предприятие Центрального НИИВС им.И.М.Мечникова) рН 7,0,
бульон из перевара кровяных сгустков, полусинтетическая среда с
индикатором феноловым красным РН 7,7 (аммоний фосфорно-кислый
однозамещенный - NH40H2P04 - 1,0 г; магний серно - кислый MgSO4 -
0,2 г, калий хлористый - КС1 - 0,2 г, глюкоза - 5.0 г, феноловый
красный - 0,02 г, бульон Хоттингера с содержанием аминного азота -
140-160 мг % - 200 мл, дистиллированная вода - 800 мл, рН 7,7 +/-
0,1. Компоненты смешивают и растворяют при нагревании на водяной
бане, доводят рН до 7,7 +/- 0,1, разливают во флаконы, стерилизуют
при 110 град. С в течение 30 минут).
Приложение 5.7
(Обязательное)
ПОРЯДОК
ЗАМЕНЫ ФИЛЬТРОВ ТОНКОЙ ОЧИСТКИ ВЫТЯЖНОЙ СИСТЕМЫ
ВЕНТИЛЯЦИИ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИХ ЗАЩИТНОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ
1. Замену фильтров тонкой очистки (Д-13, Д-15, Д-23 ФТО и др.)
вытяжных систем вентиляции проводят согласно графику. При
возрастании динамического сопротивления фильтра в 2 раза или при
его повреждении проводится его внеплановая замена.
2. Перед снятием фильтра проводят предварительную дезинфекцию
фильтра и магистрального воздуховода парами формалина либо
аэрозольным способом.
3. Распыление дезинфектанта осуществляется через штуцер в
воздуховоде при работающей вентиляции. По окончании распыления
вентиляция выключается и по истечении времени экспозиции фильтр
может быть снят.
4. Работу по демонтажу фильтра проводят в костюме IV типа с
использованием резиновых перчаток (под рабочими рукавицами) и
респиратора.
5. Снятый фильтр помещают в крафт-мешок или другую упаковку и
переносят для автоклавирования или сжигания установленным
порядком.
6. Перед установкой фильтр должен быть проверен на проскок (по
масляному туману, с использованием биологического аэрозоля или
другим способом). В процессе эксплуатации фильтр проверяется на
проскок не реже 1 раза в квартал.
7. Работы по замене фильтра осуществляются техническим
персоналом под наблюдением сотрудника подразделения, отвечающего
за соблюдение требований биологической безопасности.
8. Для оценки защитной эффективности фильтров используют в
качестве модели для создания аэрозоля культуры B.prodigiosum (ser.
marcescens, chromobacterum prodigiosum) или E. Coli. Для создания
аэрозоля используют специальные устройства - распылители. В целях
минимального рассеивания бактериального аэрозоля в окружающую
среду и направления факела аэрозоля в отверстие воздуховода перед
фильтром применяют специальную насадку. Для определения счетной
концентрации и фракционно-дисперсного состава биологического
аэрозоля используют импактор микробиологический БП-50,
разработанный научно-исследовательским институтом биологического
приборостроения.
9. Отбор проб аэрозоля осуществляют двумя импакторами
одновременно до прохождения фильтра (контроль) и после прохождения
его (опыт). По результатам роста тест - штамма на агаровых
пластинках до и после прохождения фильтра судят об его защитной
эффективности. Используют односуточную культуру тест - штамма в
8 9
концентрации 5 х 10 - 1 х 10 м.к. в мл. Для проведения опыта
приборы монтируют в следующей последовательности (см. схему):
насадку (4) устанавливают на отверстии воздуховода перед фильтром
(2) с помощью болтов, шланги компрессора (9) надевают на конец
форсунки распылителя (5). К входному и выходному отверстиям
воздуховода после фильтра (2) присоединяют через шланги два
микробиологических импактора БП-50(6), подключают к сети
компрессор (7) и оба аспиратора (8) - (пылесос бытовой). Перед
началом опыта проверяют работу компрессора и скорость движения
воздуха через импактор. Опыт проводят при работающей вентиляции.
10. В колбу распылителя заливают приготовленную взвесь
тест-штамма, после чего вставляют форсунку. Устанавливают
распылитель на уровне отверстия воздуховода, включают компрессор и
оба импактора. Соблюдаются следующие условия: скорость распыления
по жидкости Qж = 1мл/мин, скорость распыления по воздуху V = 50
л/мин, время распыления - 10 минут, средний диаметр аэрозольных
частиц dcp = 2,4 мкм (lgd = 0,389), максимальный диаметр частиц d
max = 7 мкм при логарифмически нормальном распределении (среднее
квадратичное отклонение lgd = 0,229); скорость отбора проб
аэрозоля импактором БП-50 V = 50 л/мин, время отбора проб аэрозоля
- 10 минут.
По истечении срока отключают сначала компрессор, а затем
импакторы. Чашки Петри вынимают из импакторов и инкубируют при 37
град. С в течение 2-х суток. После проведения опыта установку
дезинфицируют.
11. Учет результатов проводят через 24 и 48 часов. В популяции
B.prodigiosum наряду с типично окрашенными колониями могут
появляться различные по цвету варианты: розовые, слабо-розовые, с
розовым центром.
Об эффективности задержания аэрозольных частиц исследуемым
фильтром судят по отношению числа аэрозольных частиц, осевших до
фильтра и после него. Эффективность фильтра выражают в процентах.
При исправных фильтрах не должно быть роста колоний тест-культуры
на чашках после фильтра, в то время, как до фильтра (для
обеспечения достоверности испытаний) их должно быть не менее 200
колоний на чашках импактора БП-50.
СХЕМА<*> КОНТРОЛЯ ФИЛЬТРА
ПРИ РАБОТАЮЩЕЙ ВЕНТИЛЯЦИОННОЙ СИСТЕМЕ
Обозначения:
1. Фильтр Д-13 (Д-15)
2. Воздуховод вентиляционной системы
3. Штуцер для отбора пробы
4. Насадка распылителя
5. Распылитель
6. Импактор ДП-50
7. Компрессор
8. Аспиратор отбора пробы
9. Соединительные шланги
--------> Направление воздушного потока
-----------------------------------
<*> Схема не приводится.
Приложение 5.8
(Обязательное)
ТРЕБОВАНИЯ
К ОБЕЗЗАРАЖИВАНИЮ ЛАБОРАТОРНОЙ ПОСУДЫ С
ИНФИЦИРОВАННЫМИ ПИТАТЕЛЬНЫМИ СРЕДАМИ
В ПЕРЕДВИЖНЫХ ДЕЗИНФЕКЦИОННЫХ КАМЕРАХ
1. Общие положения
1.1. Обеззараживание лабораторной посуды в передвижных
дезинфекционных камерах производят только по эпидпоказаниям при
массовом обследовании населения на холеру.
1.2. В передвижных дезинфекционных камерах обеззараживание
лабораторной посуды производят по паровоздушному методу.
1.3. Действующим агентом при этом методе является
паровоздушная смесь (увлажненный горячий воздух) при температуре
97-98 град. С.
1.4. Перед началом работы дезинфекционной камеры дезинфектор
обязан проверить ее техническое состояние (обеззараживание
лабораторной посуды в неисправной камере не допускается).
2. Порядок работы в передвижных дезинфекционных
камерах
2.1. Перед загрузкой лабораторной посуды камеру освобождают от
всех перевозимых в ней предметов, за исключением деревянных
решеток, уложенных на полу. Не допускается работа в
дезинфекционной камере, если отверстие для стока конденсата
закрыто.
2.2. Перед загрузкой камеры первой партией лабораторной посуды
ее прогревают до 80 град. С и выдерживают при этой температуре в
течение 15 мин. После прогрева и последующего проветривания через
открытую дверь приступают к загрузке камеры лабораторной посудой.
Загрузку осуществляют со стороны, противоположной фронту
управления дезинфекционной установкой (грязная зона).
2.3. Лабораторную посуду емкостью не более 1 л после
использования помещают в баки или другую тару с крышками. Эти баки
должны иметь мелкие отверстия по бокам на расстоянии 10 см от дна.
Баки нумеруют и устанавливают в камере на двух уровнях: внизу на
напольные деревянные решетки, не допуская соприкосновения друг с
другом, и наверху - подвешивают на высоте 0,9-1 м от уровня пола
при помощи 2-3 плечиков, входящих в комплект дезинфекционной
установки, на каждый бак (тару) в зависимости от веса. Баки должны
быть с открытыми крышками.
2.4. Загруженную камеру прогревают в течение 20 мин до 98
град. С. С этого момента производят отсчет экспозиции. Экспозиция
дезинфекции 120 мин. В процессе экспозиции поступление пара в
камеру должно быть постоянным. Такой режим обеспечивает
обеззараживание лабораторной посуды с инфицированными питательными
средами. Содержимое внутри баков равномерно прогревается.
Показания термометра и экспозицию записывают в специальном
журнале.
2.5. По окончании экспозиции открывают дверь со стороны пульта
управления (чистая зона), проветривают камеру в течение 5 мин и
затем выгружают баки с лабораторной посудой. При этом пользуются
брезентовыми рукавицами для предохранения рук от ожогов.
3. Термический и бактериологический контроль
3.1. Эффективность обеззараживания лабораторной посуды с
отработанными питательными средами определяют двумя методами:
термическим и бактериологическим.
3.2. Термический контроль осуществляют при каждой загрузке
камеры максимальными термометрами путем закладывания их в середину
каждого бака в специальных мешочках, которые нумеруют в
соответствии с нумерацией баков.
3.3. По окончании обеззараживания посуды в камере мешочки
извлекают из баков, записывают показания максимальных термометров
в специальном журнале.
3.4. При равномерном распределении температуры в
обеззараживаемых объектах, находящихся в камере, разница в
показаниях термометров при паровоздушном методе допускается в 1-2
град. С.
3.5. Бактериологический контроль обеззараживания проводят
периодически один раз в месяц с помощью посевов обеззараживаемой
жидкости из емкостей максимального объема. Из флаконов после
тщательного промешивания пипеткой отбирают 0,5 мл взвеси и
засевают в пробирку с мясо-пептонным бульоном, а воду из колб
фильтруют в объеме не менее 100 мл. Бактериологические посевы
помещают в термостат при температуре 37 град. С. Результаты
посевов учитывают через 24-48 ч. При отсутствии роста культур
лабораторную посуду считают обеззараженной.
Приложение 5.9
(Обязательное)
ТРЕБОВАНИЯ
К ИССЛЕДОВАНИЮ СТОЧНЫХ ВОД НА ПАТОГЕННУЮ МИКРОФЛОРУ
1. Предприятия (учреждения) проводящие работу с
микроорганизмами I-II групп патогенности должны проводить
исследование сточных вод на наличие в них микроорганизмов,
используемых в работе.
2. Отбор проб сточных вод необходимо проводить из всех
колодцев канализационной системы предприятия (учреждения) перед ее
выходом в общий коллектор.
3. Кратность отбора проб определяется руководителем
предприятия (учреждения) в зависимости от вида возбудителя,
характера и объемов проводимых работ, по согласованию с
территориальными органами Госсанэпиднадзора.
4. При наличии на предприятии (учреждении) локальных очистных
сооружений необходимо проводить определение остаточной
концентрации активного вещества, применяемого дезинфекционного
средства, в сточных водах, перед их выходом в общий коллектор
5. Отбор проб сточных вод и их лабораторное исследование
проводят в соответствии с действующими нормативно-методическими
документами, при соблюдении требований биологической безопасности.
6. На каждом предприятии (учреждении) должны быть разработаны
"Методические рекомендации по исследованию сточных вод" с учетом
местных условий и особенностей.
7. Результаты исследований фиксируют в специальном журнале, за
подписью лиц, проводивших исследование.
СХЕМЫ<*> ПРИНЦИПИАЛЬНЫХ ПЛАНИРОВОК КОМНАТ БЛОКА
ДЛЯ РАБОТЫ С ИНФИЦИРОВАННЫМИ ЖИВОТНЫМИ
1 - Биопробная А - окно (дверь) для приема
2 - Вскрывочная полевого материала
3 - Полевая комната Б - шлюз (передаточное окно)
4 - Бактериологическая В - проходной автоклав
5 - Предбоксник
6 - Комната для снятия противочумного костюма
7 - Комната для одевания противочумного костюма
8 - Комната для загрузки материала в автоклав
9 - Комната обеззараживания инвентаря для содержания б/п животных
10 - комната для разгрузки автоклава
11 - Комната для разборки обеззараженного материала (моечная)
--------------------------------
<*> Схемы не приводятся.
|
