|
Стр. 4
¦ ности ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+-----------+------+-----+----------------------+----------------+
¦ ¦ - ¦ - ¦ не обязательно ¦ S. epidermides ¦
+-----------+------+-----+----------------------+----------------+
¦ ¦ + ¦ + ¦ не обязательно ¦ S. aureus ¦
+-----------+------+-----+----------------------+----------------+
¦ ¦ - ¦ + ¦ АСМ или ДНК ¦ S. aureus ¦
¦ ¦ ¦ ¦ если + ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ если - ¦ S. epidermides ¦
+-----------+------+-----+----------------------+----------------+
¦ ¦ + ¦ - ¦ АСМ или ДНК ¦ S. aureus ¦
¦ ¦ ¦ ¦ если + ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ если АСМ и ДНК- ¦ S. epidermides ¦
L-----------+------+-----+----------------------+-----------------
Условные обозначения:
РКП - реакция плазмы; ВЛА - лецитовителлазная активность;
АСМ - анаэробное сбраживание маннита; ДНК -
дезоксирибонуклеазная активность;
++ положительный результат; - отрицательный результат.
Приложение N 1
СРЕДСТВА И МЕТОДЫ САНАЦИИ
----T----------------------------T--------------------T------------------------¬
¦NN ¦ Препарат ¦Способ приготовления¦ Метод санации ¦
¦п/п¦ ¦ ¦ ¦
+---+----------------------------+--------------------+------------------------+
¦ 1.¦Очищенный гексахлорофен 2,2-¦ Для приготовления¦ При локализации носи-¦
¦ ¦диокси 3, 5, 6, 3, 56 гекса-¦100 г 1%-ной мази¦тельства в носу 1%¦
¦ ¦хлордифенил метанбифенольное¦требуется вазелина¦гексахлорофеновой мазью¦
¦ ¦соединение. ¦медицинского 99 г,¦с помощью ватного тампо-¦
¦ ¦Гексахлорофен - белый, мел-¦очищенного гексахло-¦на смазывают передние¦
¦ ¦кокристаллический порошок, с¦рофена 1г.Отвешенное¦отделы носовой полости в¦
¦ ¦температурой плавления 163-¦количество гх не-¦течение 1 минуты произ-¦
¦ ¦164°, молекулярный вес - ¦большими порциями ¦водят мягкий массаж кры-¦
¦ ¦406,9. Препарат хорошо раст-¦добавляют в вазелин¦льев носа для равномер-¦
¦ ¦ворим в органических раство-¦при постоянном поме-¦ного распределения мази¦
¦ ¦рителях, 70° спирте, в воде¦шивании (20-30 ми- ¦(количество мази на одну¦
¦ ¦не растворим, нейтрализуется¦нут) до получения¦обработку около 1 г).¦
¦ ¦растворами, имеющими щелоч-¦однородной массы.¦Такую обработку проводят¦
¦ ¦ное значение рН выше 8,0. ¦Готовую мазь фасуют¦1 раз в сутки в течение¦
¦ ¦Гексахлорофен (гх) обладает¦в соответствующую¦5-6 дней (при ежедневной¦
¦ ¦высоким бактерицидным дейст-¦тару. Хранят мазь в¦работе персонала). У де-¦
¦ ¦вием в отношении вегетатив-¦банках из темного¦журящих в течение суток-¦
¦ ¦ных форм микроорганизмов и¦стекла или в защи-¦3 раза в сутки в течение¦
¦ ¦грибов. Гексахлорофен стой-¦щенном от света мес-¦трех очередных дежурств¦
¦ ¦кий при хранении препарат.¦те. ¦с перерывом между ними¦
¦ ¦Его хранят в сухом и прох-¦ ¦не более 3-х дней (всего¦
¦ ¦ладном месте. Гх относится к¦ ¦проводят 9 обработок). ¦
¦ ¦высокотоксичным веществам,¦ ¦ Персонал, работающий 12¦
¦ ¦при введении в желудок 50%¦ ¦часов в смену санируют¦
¦ ¦животных погибает от дозы¦ ¦двухкратно: в начале и¦
¦ ¦150 мг/кг веса. Он хорошо¦ ¦конце работы смены. Об-¦
¦ ¦всасывается через неповреж-¦ ¦работку проводят в тече-¦
¦ ¦денную и поврежденную кожу.¦ ¦ние четырех дежурств с¦
¦ ¦Раздражающие свойства чисто-¦ ¦промежутками не более¦
¦ ¦го гх выражены умеренно и в¦ ¦двух дней (всего прово-¦
¦ ¦рекомендуемых концентрациях¦ ¦дят 8 обработок). ¦
¦ ¦практически не проявляются.¦ ¦ Кратность обработок 1¦
¦ ¦Гх является слабым аллерге-¦ ¦цикл в квартал ¦
¦ ¦ном, при длительном постоян-¦ ¦ ¦
¦ ¦ном применении без соответс-¦ ¦ ¦
¦ ¦твующих мер предосторожности¦ ¦ ¦
¦ ¦он может накапливаться в ор-¦ ¦ ¦
¦ ¦ганизме, поэтому его исполь-¦ ¦ ¦
¦ ¦зуют строго по назначению¦ ¦ ¦
¦ ¦врача. Для санации слизистой¦ ¦ ¦
¦ ¦носа применяют 1% мазь гх на¦ ¦ ¦
¦ ¦вазелиновой основе. ¦ ¦ ¦
+---+----------------------------+--------------------+------------------------+
¦ 2.¦Трибромсалициланилид (Три-¦ Для приготовления¦ Мазь закладывают в нос¦
¦ ¦баск). Зарубежные названия:¦100 г 3%-ной мази¦ дважды в день в течение¦
¦ ¦диафан, бромсалан, темасепт.¦требуется вазелина¦ 5-6 дней. ¦
¦ ¦Трибаск обладает широким¦медицинского 97 г,¦ ¦
¦ ¦спектром антимикробного дей-¦трибаска - 3 г. От-¦ ¦
¦ ¦ствия в отношении золотисто-¦вешенное количество¦ ¦
¦ ¦го стафилококка;бактериоста-¦трибаска тщательно¦ ¦
¦ ¦тическая концентрация 0,32¦растирают в вазели-¦ ¦
¦ ¦мкг/мл, бактерицидная - 1,6¦не. ¦ ¦
¦ ¦мкг/мл, в отношении кишечной¦ ¦ ¦
¦ ¦палочки - бактерицидная и¦ ¦ ¦
¦ ¦бактериостатическая концент-¦ ¦ ¦
¦ ¦рация - 40 мкг/мл. Препарат¦ ¦ ¦
¦ ¦устойчив при длительном хра-¦ ¦ ¦
¦ ¦нении и автоклавировании.¦ ¦ ¦
¦ ¦Трибаск (3, 41, 5 - трибром-¦ ¦ ¦
¦ ¦салициланилид) обладает вы-¦ ¦ ¦
¦ ¦сокой активностью в отноше-¦ ¦ ¦
¦ ¦нии стафилококков, устойчи-¦ ¦ ¦
¦ ¦вых к широко применяемым ан-¦ ¦ ¦
¦ ¦тибиотикам, а также значи-¦ ¦ ¦
¦ ¦тельным фунгицидным эффек-¦ ¦ ¦
¦ ¦том. Санацию стафилококковых¦ ¦ ¦
¦ ¦носителей среди медперсонала¦ ¦ ¦
¦ ¦и больных проводят 3% мазью.¦ ¦ ¦
¦ ¦Трибаска на вазелиновой ос-¦ ¦ ¦
¦ ¦нове. Не отмечено побочных¦ ¦ ¦
¦ ¦явлений. Мазь не вызывает¦ ¦ ¦
¦ ¦неприятных ощущений и разд-¦ ¦ ¦
¦ ¦ражений слизистой носа. ¦ ¦ ¦
+---+----------------------------+--------------------+------------------------+
¦ 3.¦Хлорофиллипт (ХФ). ¦ Готовят 2%-ный мас-¦ При локализации носи-¦
¦ ¦Представляет собой сложное¦ляный раствор ¦тельства в носу, закапы-¦
¦ ¦органическое соединение, в¦ ¦вают 2%-ный масляный¦
¦ ¦состав которого входит хло-¦ ¦раствор хлорфиллипта¦
¦ ¦рофилл "а" и хлорофилл "в".¦ ¦трижды в день в течение¦
¦ ¦Это порошок яркозеленого¦ ¦6-7 дней. Для санации¦
¦ ¦цвета, горьковатого вкуса,¦ ¦зева используют 1% спир-¦
¦ ¦не растворим в воде, раство-¦ ¦товой раствор хлорфилли-¦
¦ ¦рим в органических раствори-¦ ¦пта (20-30 мл препарата¦
¦ ¦телях. В медицинской практи-¦ ¦на 100 мл воды). Полос-¦
¦ ¦ке препарат используется в¦ ¦кание зева проводят 3¦
¦ ¦виде спиртового и масляного¦ ¦раза в день в течение¦
¦ ¦растворов. Спиртовой раствор¦ ¦6-7 дней. ¦
¦ ¦представляет собой прозрач-¦ ¦ ¦
¦ ¦ную жидкость яркозеленого¦ ¦ ¦
¦ ¦цвета, образующего с водой¦ ¦ ¦
¦ ¦флуоресцирующий раствор,¦ ¦ ¦
¦ ¦масляный раствор - густую¦ ¦ ¦
¦ ¦жидкость яркозеленого цвета.¦ ¦ ¦
¦ ¦ХФ обладает антибактериаль-¦ ¦ ¦
¦ ¦ной (бактериостатической и¦ ¦ ¦
¦ ¦бактерицидной) активностью в¦ ¦ ¦
¦ ¦отношении антибиотикоустой-¦ ¦ ¦
¦ ¦чивых стафилококков. ХФ при-¦ ¦ ¦
¦ ¦меняют при лечении заболева-¦ ¦ ¦
¦ ¦ний, вызванных антибиотико-¦ ¦ ¦
¦ ¦устойчивыми стафилококками и¦ ¦ ¦
¦ ¦при санации стафилококковых¦ ¦ ¦
¦ ¦носителей. При применении¦ ¦ ¦
¦ ¦препарата возможно появление¦ ¦ ¦
¦ ¦аллергических реакций. Пре-¦ ¦ ¦
¦ ¦парат выпускается в виде 1%¦ ¦ ¦
¦ ¦и 0,25% спиртового раствора¦ ¦ ¦
¦ ¦и 2% масляного раствора.¦ ¦ ¦
¦ ¦Препарат хранится в стек-¦ ¦ ¦
¦ ¦лянной герметически закрытой¦ ¦ ¦
¦ ¦посуде, в сухом, прохладном¦ ¦ ¦
¦ ¦и защищенном от света месте.¦ ¦ ¦
+---+----------------------------+--------------------+------------------------+
¦ 4.¦Лизоцим. ¦ Готовят следующим¦ При локализации носи-¦
¦ ¦Антибиотическое вещество¦образом: предвари-¦ тельства в носу прово-¦
¦ ¦ферментного характера нахо-¦тельно целые яйца¦ дят обработку передних¦
¦ ¦дится в слезах, мокроте,¦протирают спиртом¦ отделов носа 1% лизоци-¦
¦ ¦слюне, сыворотке, лейкоци-¦(скорлупа). Затем¦ мной мазью или закапы-¦
¦ ¦тах, костном мозгу, хрящах,¦яичные белки отделя-¦ вают 0,1% лизоцима по¦
¦ ¦сердце, печени, легких, поч-¦ют от желтков и по-¦ 2-4 капли в каждую ноз-¦
¦ ¦ках и т.д. Лизоцим обладает¦мещают в мерный ста-¦ дрю. Санацию проводят¦
¦ ¦бактериостатическим действи-¦кан. Белки разводят¦ ежедневно в течение 6¦
¦ ¦ем не только в отношении¦0,5%-ным стерильным¦ суток по 3 раза в день.¦
¦ ¦сапрофитов, но и ряда пато-¦физиологическим ра-¦ Полоскание зева 0,1%¦
¦ ¦генных микробов (стафилокок-¦створом и 2 раза¦ раствором кристалличес-¦
¦ ¦ки, стрептококк, гонококк,¦взбалтывают, а затем¦ кого или жидкого лизо-¦
¦ ¦менингококк, палочки сибирс-¦разводят в 15 раз.¦ цима. ¦
¦ ¦кой язвы, холерных вибрион,¦Полученную смесь¦ ¦
¦ ¦брюшнотифозная палочка и¦подкисляют 1% (или¦ ¦
¦ ¦т.д.). ¦5%) лимонной кисло-¦ ¦
¦ ¦ ¦той до рН 4,4-4,6,¦ ¦
¦ ¦ ¦доводят до кипения¦ ¦
¦ ¦ ¦и кипятят 5 минут¦ ¦
¦ ¦ ¦(обязательно бесп-¦ ¦
¦ ¦ ¦рерывно помешивая).¦ ¦
¦ ¦ ¦Горячей смеси дают¦ ¦
¦ ¦ ¦остыть. Охлажденную¦ ¦
¦ ¦ ¦смесь нейтрализуют¦ ¦
¦ ¦ ¦СаСО3 (мелом) до рН¦ ¦
¦ ¦ ¦7,0-7,2. Дают мелу¦ ¦
¦ ¦ ¦осесть. Лизоцим со-¦ ¦
¦ ¦ ¦держится в надоса-¦ ¦
¦ ¦ ¦дочной жидкости. На-¦ ¦
¦ ¦ ¦досадочную жидкость¦ ¦
¦ ¦ ¦отфильтровывают ¦ ¦
¦ ¦ ¦дважды до получения¦ ¦
¦ ¦ ¦прозрачной жидкости,¦ ¦
¦ ¦ ¦разливают в стериль-¦ ¦
¦ ¦ ¦ные флаконы и закры-¦ ¦
¦ ¦ ¦вают. Лизоцим хра-¦ ¦
¦ ¦ ¦нится при Т +4°С не¦ ¦
¦ ¦ ¦более 5 дней. ¦ ¦
+---+----------------------------+--------------------+------------------------+
¦ 5.¦Стафилококковый бактериофаг¦ ¦ Для санации носа дважды
¦ ¦(выпускается Горьковским н-и¦ ¦в день на 15-20 минут
¦ ¦ин-том эпидемиологии) ¦ ¦закладывают ватные там-
¦ ¦ ¦ ¦поны, обильно смоченные
¦ ¦ ¦ ¦стафилококковым бакте-
¦ ¦ ¦ ¦риофагом. Для санации
¦ ¦ ¦ ¦зева проводят полоскание
¦ ¦ ¦ ¦3 раза в день в течение
¦ ¦ ¦ ¦6-7 дней.
+---+----------------------------+--------------------+------------------------+
¦ 6.¦Фурациллин. ¦ Для приготовления¦ Ежедневно 1 раз в сутки¦
¦ ¦Желтый или зеленовато-желтый¦водного раствора: 1¦полоскание зева и проти-¦
¦ ¦мелкокристаллический порошок¦часть фурациллина¦рание тампоном слизистых¦
¦ ¦без запаха, горького вкуса,¦растворяют в 5000¦переднего отдела носа в¦
¦ ¦очень мало растворим в воде¦частях изотоническо-¦течение 6-7 дней. ¦
¦ ¦(1:4200), мало - в спирте,¦го раствора хлорида¦ ¦
¦ ¦растворим в щелочах. Предс-¦натрия или дистилли-¦ ¦
¦ ¦тавляет антибактериальное¦рованной воды. Для¦ ¦
¦ ¦средство, действующее на ряд¦ускорения растворе-¦ ¦
¦ ¦грамположительных и грамот-¦ния рекомендуют при-¦ ¦
¦ ¦рицательных микробов: стафи-¦менение кипящей воды¦ ¦
¦ ¦лококки, стрептококки, де-¦или горячей. При¦ ¦
¦ ¦зинтерийную и кишечную па-¦хранении растворы¦ ¦
¦ ¦лочку, палочку паратифа,¦фурациллина могут¦ ¦
¦ ¦возбудителя газовой гангре-¦приобретать бурую¦ ¦
¦ ¦ны и др. В концентрации¦окраску. Изменение¦ ¦
¦ ¦1:9000-15:4200 оказывает ба-¦цвета препарата и¦ ¦
¦ ¦ктерицидное действие. Резис-¦растворов не изменя-¦ ¦
¦ ¦тентность микроорганизмов к¦ет их активности. ¦ ¦
¦ ¦препарату развивается мед-¦ ¦ ¦
¦ ¦ленно. Не раздражает тканей.¦ ¦ ¦
+---+----------------------------+--------------------+------------------------+
¦ 7.¦Риванол. ¦ Готовят 1:5000 рас-¦ Ежедневно 1 раз в сутки¦
¦ ¦Желтый кристаллический поро-¦творы. ¦полоскание зева и проти-¦
¦ ¦шок горького вкуса без запа-¦ ¦рание тампоном слизистых¦
¦ ¦ха. Малорастворим в холодной¦ ¦передних отделов носа в¦
¦ ¦воде (1:50), легче в горя-¦ ¦течение 6-7 дней. ¦
¦ ¦чей, мало растворим в спирте¦ ¦ ¦
¦ ¦(1:110). Водные растворы¦ ¦ ¦
¦ ¦настойки, особенно на свету¦ ¦ ¦
¦ ¦становятся бурыми. Пользо-¦ ¦ ¦
¦ ¦ваться следует свежеприго-¦ ¦ ¦
¦ ¦товленными растворами. Ока-¦ ¦ ¦
¦ ¦зывает противомикробное¦ ¦ ¦
¦ ¦действие, главным образом¦ ¦ ¦
¦ ¦при инфекциях, вызванных¦ ¦ ¦
¦ ¦кокками особенно стрептокок-¦ ¦ ¦
¦ ¦ками. Препарат мало токси-¦ ¦ ¦
¦ ¦чен, не вызывает раздражения¦ ¦ ¦
¦ ¦тканей. Применяют как наруж-¦ ¦ ¦
¦ ¦ное профилактическое и ле-¦ ¦ ¦
¦ ¦чебное антисептическое¦ ¦ ¦
¦ ¦средство в отоларингологии.¦ ¦ ¦
¦ ¦При воспалении слизистой¦ ¦ ¦
¦ ¦оболочки рта, зева, носа¦ ¦ ¦
¦ ¦назначают полоскание 0,1%¦ ¦ ¦
¦ ¦раствором. ¦ ¦ ¦
+---+----------------------------+--------------------+------------------------+
¦ 8.¦Борная кислота. ¦ Готовят 1% водные ¦ Ежедневно 1 раз в сут-¦
¦ ¦Бесцветные блестящие слегка¦растворы ¦ки полоскание зева и ¦
¦ ¦жирные на ощупь чешуйки или¦ ¦протирание тампоном пе-¦
¦ ¦белый мелкокристаллический¦ ¦редних отделов носа в¦
¦ ¦порошок без запаха. Раство-¦ ¦течение 6 - 7 дней. ¦
¦ ¦рима в холодной воде (1:25)¦ ¦ ¦
¦ ¦и легко (1:4) в кипящей во-¦ ¦ ¦
¦ ¦де, растворима (1:25) в¦ ¦ ¦
¦ ¦спирте. Водные растворы име-¦ ¦ ¦
¦ ¦ют слабокислую реакцию. При-¦ ¦ ¦
¦ ¦меняют наружно как асепти-¦ ¦ ¦
¦ ¦ческое средство в виде вод-¦ ¦ ¦
¦ ¦ных растворов (2-4%) для по-¦ ¦ ¦
¦ ¦лоскания полости рта, зева ¦ ¦ ¦
¦ ¦и для промывания глаз. ¦ ¦ ¦
+---+----------------------------+--------------------+------------------------+
¦ 9.¦Раствор Люголя. ¦Готовят из расчета: ¦ Ежедневно 1 раз в сутки¦
¦ ¦Раствор йода в водном раст-¦1 чайная ложка на ¦полоскание. ¦
¦ ¦воре йодида калия. Состав:¦200 мл воды ¦ ¦
¦ ¦йода 1 часть, калия йодида 2¦ ¦ ¦
¦ ¦части, воды 17 частей. ¦ ¦ ¦
+---+----------------------------+--------------------+------------------------+
¦10.¦Люголь в глицерине. ¦ Готовят из расче-¦ Смазывать зев 1 раз в¦
¦ ¦Применяют раствор Люголя на-¦та: йода - 1 часть,¦сутки в течение 6-7 дней¦
¦ ¦ружно, главным образом, для¦калия йодида - 2¦ ¦
¦ ¦смазывания слизистой оболоч-¦части, глицерина -¦ ¦
¦ ¦ки глотки, гортани. ¦94 части, воды -¦ ¦
¦ ¦ ¦3 части. ¦ ¦
+---+----------------------------+--------------------+------------------------+
¦11.¦Калий марганцевокислый. ¦ Готовят 0,01% раст-¦ Ежедневно 1 раз в сутки¦
¦ ¦Темно- или красно-фиолетовые¦воры на воде (раст-¦полоскание в течение 6-7¦
¦ ¦кристаллы или мелкий порошок¦вор розовокрасного ¦дней ¦
¦ ¦с металлическим блеском.¦цвета). ¦ ¦
¦ ¦Растворим в воде (1:18 в хо-¦ ¦ ¦
¦ ¦лодной и 1:3,5 в кипящей).¦ ¦ ¦
¦ ¦Образует раствор темно-пур-¦ ¦ ¦
¦ ¦пурного цвета. При взаимо-¦ ¦ ¦
¦ ¦действии с органическими¦ ¦ ¦
¦ ¦(уголь, сахар, танин) и лег-¦ ¦ ¦
¦ ¦ко окисляющимися веществами¦ ¦ ¦
¦ ¦может произойти взрыв. Явля-¦ ¦ ¦
¦ ¦ется сильным окислителем.¦ ¦ ¦
¦ ¦Применяют как антисептичес-¦ ¦ ¦
¦ ¦кое средство наружно в вод-¦ ¦ ¦
¦ ¦ных растворах для промывания¦ ¦ ¦
¦ ¦ран (0,1-0,5%), для полоска-¦ ¦ ¦
¦ ¦ния рта и горла (0,01-0,1%).¦ ¦ ¦
+---+----------------------------+--------------------+------------------------+
¦12.¦Настой листьев эвкалипта. ¦ Отвар готовят сле-¦ Ежедневно 1 раз в сутки¦
¦ ¦Высушенные листья культиви-¦дующим образом: 10¦полоскание ¦
¦ ¦руемых деревьев эвкалипта ¦г листьев заливают¦ ¦
¦ ¦содержат эфирное масло (не¦стаканом холодной¦ ¦
¦ ¦менее 2,5% в цельных листьях¦воды и кипятят на¦ ¦
¦ ¦и 1,5% в резаных листьях),¦слабом огне в тече-¦ ¦
¦ ¦сложные эфиры, органические¦ние 15 минут, осту-¦ ¦
¦ ¦кислоты, дубильные и др. ве-¦жают и процеживают. ¦ ¦
¦ ¦щества. Отвар и настой эвка-¦Для полосканий и ¦ ¦
¦ ¦липта применяют в качестве¦ингаляций берут 1 ¦ ¦
¦ ¦асептических средств для по-¦столовую ложку на ¦ ¦
¦ ¦лоскания верхних дыхательных¦стакан воды. ¦ ¦
¦ ¦путей. Является слабым ал-¦ ¦ ¦
¦ ¦лергеном. ¦ ¦ ¦
L---+----------------------------+--------------------+-------------------------
МЕТОДИКИ ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИЙ, ХАРАКТЕРИЗУЮЩИХ
ПРИНАДЛЕЖНОСТЬ ВЫДЕЛЕННОГО ШТАММА СТАФИЛОКОККА
К ВИДУ ЗОЛОТИСТОГО СТАФИЛОКОККА
I. Определение плазмокоагулирующей активности
Для реакции может быть использована свежеприготовленная или
сухая цитратная плазма крови кролика<*>. Человеческая плазма менее
пригодна для постановки реакции. В ней могут содержаться
лекарственные препараты, консерванты, антитела, препятствующие
выделению стафилококковой коагулазы.
--------------------------------
<*> - Сухая кроличья плазма крови изготавливается Минским н-и
ин-том Микробиологии и Эпидемиологии и Ставропольским н-и ин-том
вакцин и сывороток.
Для приготовления цитратной кроличьей плазмы у кролика берут
из сердца 8,0 мл крови и вносят ее в пробирку с 2,0 мл стерильного
5% лимонно-кислого натрия (предварительно лимонно-кислым натрием
смачивают внутренние стенки пробирки). Смесь перемешивают
вращением пробирки и ставят в холодильник. После полного осаждения
форменных элементов крови, плазма отсасывается в стерильную
пробирку и пригодна для постановки реакций в течение 1-1,5 недели
при условии ее хранения в холодильнике при +4°С.
При использовании сухой плазмы, годными к употреблению
являются только те ампулы, целость которых не нарушена. В каждой
ампуле содержится 1 мл высушенной кроличьей плазмы. Перед
употреблением ампулу вскрывают и добавляют 1 мл стерильного
физиологического раствора для растворения содержимого ампулы.
Растворение сухой плазмы происходит медленно и требует острожного
помешивания пастеровской пипеткой.
Для реакции применяют плазму в разведении 1:5 в количестве 0,5
мл (на 1 мл плазмы добавляют 4 мл стерильного физиологического
раствора).
Разведенную плазму разливают в стерильные пробирки (без
пробок) по 0,5 мл и в каждую вносят по одной петле 18-20 часовой
агаровой культуры стафилококка (или к 0,5 мл плазмы добавляют 0,5
мл 18 часовой бульонной культуры стафилококка).
Контроль реакции ставится в заведомо коагулазоположительной и
коагулазоотрицательной культурой. Кроте того, для исключения
самопроизвольного свертывания плазмы необходимо также ставить
контроль незасеянной плазмы. Пробирки помещают в термостат при
37°С и проверяют наличие свертывания плазмы через 3 часа, затем
пробирки вынимают, оставляют при комнатной температуре на 18-20
часов. Окончательный учет реакции проводится на следующий день.
Оставлять реакцию в термостате более 3 часов не рекомендуется,
поскольку при длительной инкубации в термостате может наступить
разжижение образовавшегося сгустка за счет действия фибринолизина.
Реакция считается положительной независимо от степени свертывания
плазмы - от небольшого сгустка, взвешенного в плазме, до полного
неподвижного сгустка. Реакция в контроле должна быть выражена
четко: наличие сгустка с культурой золотистого стафилококка и
отсутствие его в 2 других пробирках.
РКП может быть поставлена в ускоренной модификации,
предложенной Ульянищевой Л.Н. и Кучуриным А.В., которая сводится к
следующему: сразу же после отвивки с чашки на скошенный агар
колоний подозрительных на стафилококк, в пробирку добавляются 0,5
мл плазмы в разведении 1:5. Плазму следует добавлять стерильно,
внося ее по стенке противоположной скошенному агару. Пробирки
помещают в термостат при 37°С на 18-20 часов, после чего
производят учет реакции. Верхняя часть скошенного агара с выросшей
культурой может быть использована в дальнейшем для определения
других свойств выделенного штамма. Для постановки реакции не
рекомендуется использовать свежеприготовленный скошенный агар,
который имеет конденсат, дающий дополнительное разведение плазмы.
Если культура обладает плазмокоагулирующей активностью, то в
пробирке образуется сгусток плазмы. Отсутствие сгустка
свидетельствует об отрицательной реакции плазмокоагуляции. К
каждому опыту необходимо ставить контроли, как отмечено выше.
Опыты, давшие сомнительный результат в контроле, подлежат
повторению.
Постановка РКП в ускоренной модификации позволяет на сутки
раньше получить ответ о принадлежности выделенного штамма к тому
или иному виду стафилококка.
II. Определение ДНК-азной активности
Для постановки реакции используется 2% агар на переваре
Хоттингера или приготовленный из сухого питательного агара (рН
8,6). Агар разливают во флаконы по 150,0 мл. По мере надобности
агар растапливают и в него добавляется ДНК (дезоксирибонуклеиновая
кислота) из расчета 2 мг на 1 мл среды. Во флакон, содержащий
150,0 мл среды, следует добавить 300,0 мг ДНК. Предварительно ДНК
растворяют в дистиллированной воде, подщелоченной INNaOH.
Растворение ДНК в воде без добавления щелочи происходит не
полностью. Агар с добавленной ДНК стерилизуют текучим паром в
течение 30 минут. Стерильная среда может храниться в холодильнике
в течение 1,5:-2 месяцев. Перед разливом чашек агар растапливают,
добавляют хлористый кальций из расчета 0,8 мг на 1 мл среды (на
150,0 мл среды следует добавить 1,2 мл продажного стерильного 10%
хлористого кальция). На хорошо подсушенную чашку засевают полоской
от 10 до 20 культур стафилококка. Чашки помещают в термостат при
37°С на 18-20 часов, после чего их заливают 5,0-7,0 мл INHC1. Учет
реакции проводится после 7-10 минутного контакта кислоты со
средой, которая перед учетом реакции сливается.
Соляная кислота, реагируя с ДНК, содержащейся в среде,
образует непрозрачный белый преципитат. Если исследуемый штамм
выделяет в среду ДНК-азу, то последняя деполимеризует ДНК.
Вследствие этого при обработке соляной кислотой вокруг таких
культур образуется прозрачная зона, содержащая продукты
расщепления ДНК, которые не осаждаются соляной кислотой. Хотя
ширина прозрачных зон вокруг засеянных колоний может быть
различной, чашечный метод определения ДНК-азной активности,
является качественным тестом. При оценке реакции на ДНК-азу
возможны следующие варианты:
1. Наличие четкой зоны просветления среды - положительная
реакция.
2. Полное отсутствие зоны просветления среды - отрицательная
реакция.
3. Наличие нечеткой, небольшой зоны просветления среды -
сомнительная реакция. В данном случае реакцию необходимо
повторить.
Определение ДНК-азной активности можно проводить не только у
суточных культур, но без предварительного пересева их после
7-10-дневного хранения в холодильнике.
В настоящее время показана принципиальная возможность
использования для определения ДНК-азной активности не только
высокополимерной ДНК, но и натриевой ее соли, получаемой из
селезенки рогатого скота, производства Олайнского завода
химических реактивов Латвийской ССР.
С целью сокращения расхода ДНК, рекомендуется использовать
двуслойный метод определения ДНК-азной активности, предложенный
А.А.Трояшкиным. Сущность этого метода заключается в том, что ДНК
вносится лишь в верхний слой среды, налитый в чашку Петри.
Методика постановки реакции:
1. К 100 мг натриевой соли ДНК добавляют 10 мл
дистиллированной воды, 0,5 мл 0,2N раствора NaOH и осторожно
встряхивают. Пробирку оставляют при комнатной температуре или в
термостате до следующего дня. Для ускорения растворения ДНК
пробирку можно поместить в кипящую водяную баню. Готовый раствор
ДНК имеет вид и консистенцию нативного яичного белка (рабочий
раствор ДНК).
2. В расплавленный 2% агар (рН 7,2-7,4), разлитый в пробирки
по 10,0 мл добавляют по 1 мл рабочего раствора ДНК и 0,1 мл
продажного стерильного 10% раствора хлористого кальция. Смесь
тщательно перемешивают и стерилизуют в автоклаве при 0,5 атм, в
течение 20 минут, или дробно - три дня подряд по 20 минут в
кипящей водяной бане. Агар с ДНК можно хранить 1,5-2 месяца в
холодильнике, не допуская высыхания.
3. Чашки с 2% питательным агаром следует хорошо подсушить.
Столбик агара с ДНК растапливают в водяной бане и выливают
равномерно вторым слоем на агар и ставят на ровную поверхность.
После застывания второго слоя чашки снова подсушивают. Посев
испытуемых культур, режим термостатирования и учет результатов
проводятся, как описано выше.
Наличие ДНК-азной активности является простым, удобным и
весьма специфическим тестом дифференциации золотистого
стафилококка и эпидермального стафилококка. ДНК-азная активность
обнаруживается у 97-98% штаммов золотистого стафилококка.
III. Определение ферментации маннита в анаэробных
условиях
Для реакции можно использовать среду, приготовленную из сухого
агара с индикатором ВР, содержащую маннит (пропись см. ниже).
Среду разливают в пробирки по 4,0 мл и стерилизуют. По мере
надобности пробирки со средой регенерируют и добавляют по 2,0 мл
стерильного вазелинового масла. Когда среда остынет, уколом (до
дна) производят посев испытуемой культуры. Пробирки помещают в
термостат при 37°С на 5 суток. В случае разложения маннита среда
приобретает синий цвет по всему столбику агара.
Способность разлагать маннит в аэробных условиях
обнаруживается у 94-96% штаммов золотистого стафилококка.
IV. Определение лецитовителлазной активности
При использовании для первичного посева среды, содержащей
желток, специального дополнительного определения лецитовителлазной
активности у стафилококка проводить нет необходимости. В случае
выделения культуры с других сред в необходимости определения у нее
этого признака, следует на чашку с ЖСА посеять испытуемую культуру
штрихом или бляшкой. Чашки инкубируют в термостате при 37°С в
течение 18-25 часов. При положительном результате вокруг колоний
стафилококка образуется радужный венчик, что обусловлено
выделением фермента лецитовителлазы и разложением лецитина,
находящегося в среде. Реакцию следует учитывать в отраженном
свете. Лецитовителлазной активностью обладает 60-75% штаммов
золотистого стафилококка человеческого происхождения и 5-10%
штаммов стафилококка животного происхождения.
V. Определение пигментообразования
Пигмент колоний стафилококка может варьировать от
ярко-золотистого, к желтому, кремовому до белого.
Пигментообразование лучше проявляется на свету, при посеве культур
на агар, содержащий 10% снятого молока.
Следует отметить, что золотистый пигмент образует не только
золотистый стафилококк; колонии некоторых эпидермальных
стафилококков и микрококков могут иметь аналогичную окраску. В то
же время золотистые стафилококки могут вырастать на агаре в виде
белых колоний.
VI. Определение гемолитической активности
В настоящее время показано, что 60-70% эпидермальных
стафилококков на кровяном агаре образуют четкие зоны гемолиза.
Поэтому определение гемолитической активности штамма не может
служить четким дифференциально-диагностическим тестом для
золотистого стафилококка и эпидермального стафилококка. В случае,
если имеется необходимость определения альфа-гемолитической
активности у выделенных штаммов стафилококка, необходимо
использовать 3-5% кровяной агар, содержащий эритроциты кролика,
т.к. альфа-гемолизин стафилококка не лизирует эритроциты других
животных и слабо лизирует эритроциты человека. Гемолитическая
активность стафилококков животного происхождения может быть
определена на 3-5% кровяном агаре, содержащем эритроциты барана.
Чашки с исследуемыми культурами выдерживают 24 часа в термостате
при 37°С, и 24 часа в холодильнике при +4°С.
VII. Определение фаготипа золотистого стафилококка
Методика фаготипирования стафилококков подробно изложена в
наставлении по применению типовых стафилококковых бактериофагов,
прилагаемых к Международному набору, выпускаемому ИЭМ им.
Н.Ф.Гамалеи АМН СССР.
Фаготипированию должны подвергаться только золотистые
стафилококки. При этом следует руководствоваться следующими
правилами: золотистые стафилококки выделенные из верхних
дыхательных путей у персонала родильных домов, должны подвергаться
фаготипированию в обязательном порядке. Золотистые стафилококки,
выделенные от больных, подвергаются фаготипированию по
эпидемическим показаниям.
Для фаготипирования используется Международный набор из 22
умеренных фагов, которые разделены на 4 группы:
I группа - фаги 29, 52, 52А, 79, 80.
II группа - фаги 3А, 84, 3С, 55, 71.
III группа -фаги 6, 85, 42Е, 47, 53, 54, 75, 77, 83А.
IV группа - фаги 42Д.
Вне групп - фаги 81, 187.
При проведении фаготипирования необходимо руководствоваться
следующим:
1. Первым этапом фаготипирования является приготовление
соответствующих разведений фага. К каждой ампуле с высушенным
фагом добавляют по 1,0 мл щелочного бульона Хоттингера, Мартена,
мясопептонного бульона (рН 7,6). Поскольку фаги высушиваются в
объеме 0,1 мл, при добавлении 1,0 мл бульона получают разведение
10 в минус первой степени. Если на этикетке ампулы указанное
тест-разведение соответствует 10 в минус третьей степени (1:1000),
то для получения разведения фага, равного 100ТР, в данную ампулу
необходимо добавить 1,0 мл бульона. Полученное разведение фага
1:10 будет соответствовать 100ТР. Если на этикетке ампулы
указанное тест-разведение фага соответствует 10 в минус четвертой
степени (1:10000), то для получения разведения фага, равного
100ТР, в данную ампулу необходимо добавить 1,0 мл бульона, и
полученное разведение фага 1:10 развести еще в 10 раз. С этой
целью к 0,1 мл разведения 1:10 добавляют 0,9 мл бульона.
Полученное разведение соответствует 100ТР.
Фаготипирование рекомендуется начинать дозой фага 100ТР. Фаги
в разведении 100ТР могут храниться в холодильнике при +4°С в
течение 1,5-2 месяцев. Для предохранения высыхания пробирку с
фагом следует закрывать стерильной резиновой пробкой.
При приготовлении разведения фага для ампулы берут отдельную
пипетку. После добавления бульона фаг быстро растворяется в ампуле
и его переносят этой же пипеткой в стерильную пробирку. На
последней подписывают столбиком порядковый номер фага, его
название (тип), конечное разведение и тест-разведение:
Например:
1 или 19
29 83А
10 в степени -3 10 в степени -4
100ТР 100ТР
Для фаготипирования можно использовать не только 3-4 часовую,
но и 18-20 часовую бульонную культуру.
3. Для приготовления среды использовать как 1,2% агар,
приготовленный на бульоне Хоттингера, так и сухой питательный агар
или агар Д (рН 7,6), с добавлением 0,4% глюкозы. Непосредственно
перед разливом чашек в агар добавляют 0,2 мл стерильного
продажного 10% раствора хлористого кальция на 100 мл среды. Чашки
подсушивают в термостате.
4. На подсушенные среды наносят бульонную культуру и засевают
ее газоном, избыток отсасывают пипеткой. Чашки с посевом вновь
подсушивают. Поскольку на среду наносится массивный газон
культуры, воздушное загрязнение среды не может при этом играть
существенной роли. Для удобства работы можно закрывать чашки
картонными крышками.
5. Дно подсушенных чашек со средой расчерчивают на 22 квадрата
или на поверхности агара агглютинационной пробиркой делают 22
кружка-насечки. В каждый квадрат или кружок оттянутой до капилляра
пастеровской пипеткой наносят каплю соответствующего фага всегда в
одном и том же порядке. Наносить фаг следует таким образом, чтобы
не коснуться пипеткой поверхности среды и избежать тем самым
переноса культуры на другую чашку со средой или пробирку с типовым
фагом. Набирать в пипетку фаг следует над пламенем горелки.
Если количество исследуемых культур невелико, фаг можно
наносить не пипеткой, а петлей, каждый раз прожигая ее.
Более удобно наносить фаг репликатором. В этом случае на
хорошо подсушенную чашку наносят сначала фаг, вновь подсушивают,
после чего наносят газоном исследуемую бульонную культуру. Избыток
культуры удаляют пипеткой, чашки подсушивают, закрывают крышкой,
переворачивают и помещают в термостат. Инкубируют при 37°С в
течение 18-20 часов, либо 5-6 часов при 37°С и до следующего утра
при комнатной температуре.
6. При учете результатов фаготипирования отмечают наличие
лизиса тем или иным фагом на ++++, +++ и ++ креста. При учете
отмечают ++++ - сливной (полный) лизис.
+++ - полусливной лизис (незначительный рост культуры в зоне
лизиса).
++ - наличие в месте нанесения капли фага свыше 50 колоний
фага.
+ - почти полное отсутствие лизиса.
- - полное отсутствие лизиса.
Некоторые фаги вызывают как бы утончение роста культуры в
месте нанесения фага, т.е. феномен ингибиции (подавление),
обозначаемое "О". Ингибиция относится к слабой реакции, но ее
наличие должно обязательно отмечаться в рабочем журнале.
Штамм считается типируемым, если хотя бы один фаг вызвал
сильную реакцию на ++++, +++ или ++ креста. Стафилококковые штаммы
чаще лизируются не одним, а несколькими фагами, что дает для
каждого штамма характерную фагомозаику. Результаты фаготипирования
регистрируются в журнале, с указанием дозы фага, вызвавшей лизис и
степени лизиса.
Например: 100ТР - 3С++++/55+++/71++++.
В ответе степень лизиса не обозначается, указывается только
фагомозаика данного штамма - 3С/55/71.
При определении идентичности штаммов следует ориентироваться
на следующее: если культуры стафилококков, типированные в один и
тот же день, дают фагомозаику не различающуюся или различающуюся
на одну сильную реакцию, то их следует считать идентичными. Если
культуры стафилококка, типированные в один и тот же день,
обнаруживают разницу на 2 и более сильные реакции, штаммы следует
признать разными. Однако этот результат является ориентировочным
и в каждом отдельном случае при решении вопроса об идентичности
выделенных культур следует уточнить место их выделения,
характеристику патогенных свойств, отношение к антибиотикам,
эпидемическую ситуацию. Следует отметить, что внутри одной группы
идентичные штаммы могут иметь различие более, чем в одну сильную
реакцию.
В настоящее время примерно 30-40% выделенных культур
золотистого стафилококка не чувствительны к используемым типовым
фагам (так называемые нетипируемые штаммы золотистого
стафилококка).
Идентичность таких штаммов может быть установлена весьма
ориентировочно на основании антибиограммы.
VIII. Определение фосфатазной активности
В 100 мл растительного и остуженного до 40° питательного агара
добавляют 50 мг паранитрофенилфосфата. Смесь разливается стерильно
в чашки (по 10-12 мл на чашку). Чашки с застывшим агаром
подсушивают и на каждую из них точечным посевом наносятся
исследуемые культуры (16-20 культур). Чашки помещают в термостат
на 24 часа при 37°С. Появление интенсивного желтого окрашивания
вокруг посевов регистрируется как положительная реакция.
Обязательным является постановка контролей со штаммами
стафилококка, заведомо обладающими и не обладающими фосфатазной
активностью.
Реакция фогес-Проскауэра (в модификации Баррита).
Исследуемую культуру засевают в глюкозо-фосфатный бульон
Клерка. После 3 дней роста при 37°С 1,0 мл культуры переносят в
пробирку и прибавляют 0,6 мл альфа-нафтола (5% раствор в
абсолютном спирте) и 0,2 мл КОН (40% раствор) и взбалтывают. В
положительном случае через 2-5 минут наступает розовое
окрашивание. У штаммов, дающих сильную реакцию, окраска становится
интенсивной и через 30 минут, - - 1 час переходит в малиновую. В
отрицательных случаях розового окрашивания не наступает и раствор
принимает цвет меди. (КОН+альфа - нафтол).
Приложение N 4
к приказу Министерства
здравоохранения СССР
от 31.07.78 г. N 720
ИНСТРУКЦИЯ <*>
ПО ОЧИСТКЕ (МОЙКЕ) И ОБЕЗЗАРАЖИВАНИЮ АППАРАТОВ
ИНГАЛЯЦИОННОГО НАРКОЗА И ИСКУССТВЕННОЙ
ВЕНТИЛЯЦИИ ЛЕГКИХ
1. Общие положения
1.1. Инструкция предназначена для специалистов
лечебно-профилактических учреждений, эксплуатирующих аппараты
ингаляционного наркоза (ИН) и искусственной вентиляции легких
(ИВЛ).
--------------------------------
<*> - Инструкция разработана Всесоюзным научно-
исследовательским институтом дезинфекции и стерилизации,
Всесоюзным научно-исследовательским институтом медицинского
приборостроения ММП СССР и научно-исследовательской лабораторией
общей реаниматологии АМН СССР.
1.2. Аппараты ИН и ИВЛ в процессе их использования
обсеменяются различной микрофлорой, включая микобактерии
туберкулеза и без соответствующей обработки могут быть одними из
факторов передачи заболеваний респираторного тракта (бронхит,
пневмония, абсцессы и т.п.).
1.3. Аппараты ИН и ИВЛ как новые, так и после каждого
использования подвергают обработке (мойке и обеззараживанию) в
соответствии с настоящей инструкцией.
1.4. В зависимости от конструктивных особенностей аппараты ИН
и ИВЛ обрабатывают двумя способами:
а) поблочно,
б) в собранном виде.
2. Очистка аппаратов ИН и ИВЛ
2.1. Обязательным условием надежности обеззараживания
аппаратов ИН и ИВЛ является мойка отдельных элементов и блоков
дыхательного контура и комплектующих аппарат деталей.
2.2. Очистке подвергают как новые аппараты с целью
освобождения от пыли, смазывающих, опудривающих веществ, так и
аппараты после их использования с целью деконтаминации и удаления
пирогенных веществ кусочков тканей и других органических остатков.
2.3. Для мойки элементов и комплектующих деталей применяют
комплекс, состоящий из 3% раствора перекиси водорода с 0,5% моющим
средством ("Прогресс", "Триас-А", "Астра", "Лотос"), величина рН
рекомендуемого комплекса - 6,0-8,0. Использование 3% раствора
перекиси водорода с 0,5% моющего средства позволяет объединить
мойку и дезинфекцию в один процесс.
2.3.1. Перекись водорода является хорошим окислителем.
Выпускается промышленностью в виде водного раствора 30-33%
концентрации под названием Пергидроль. Пергидроль - жидкость без
запаха и цвета.
В рекомендуемых концентрациях (3%-6%) растворы перекиси
водорода не токсичны для людей, незначительно меняют свойства
материалов медицинского назначения.
2.3.2. Синтетические моющие средства "Триас-А", "Астра",
"Лотос" (первичные алкилсульфаты), "Прогресс" (вторичные
алкилсульфаты) обладают высокой моющей активностью, хорошо
разрыхляют различного рода загрязнения, практически не влияют на
качество материала и достаточно легко смываются. При температуре
50°С активность моющих растворов возрастает. Оптимальной
концентрацией моющих средств для очистки изделий является 0,5%.
2.3.3. Приготовление комплекса перекиси водорода с моющим
средством проводят в соответствии с расчетом, приведенным в табл.
1.
2.4. Процесс мойки включает ряд последовательных этапов:
2.4.1. Подготовка - разборка узлов, снятие шлангов,
присоединительных элементов, крышек клапанных коробок,
отсоединение и опорожнение сборников конденсата и т.п.
2.4.2. Предварительную промывку осуществляют под струей
холодной, затем теплой воды в возможно более короткие сроки после
использования аппарата. Особенно это относится к присоединительным
элементам и интубационным трубкам во избежание высыхания на них
выделений, эксудата, крови и т.д.
2.4.3. Замачивание (дезинфекция) полное погружение с
обязательным заполнением полостей обрабатываемых деталей в горячий
(50°С) моющий раствор на 15-20 минут.
2.4.4. Собственно мойку осуществляют в том же растворе, в
котором замачивали элементы и детали аппаратов. Детали моют
ватно-марлевыми тампонами, затрачивая, в среднем, 25-30 секунд на
каждый предмет. Не следует для очистки и мытья использовать острые
предметы, а также щетки и ерши, т.к. имеется опасность оставления
в патрубках щетинок от щеток (ершей) и последующая их аспирация в
дыхательные пути. Марлевые тампоны используют для мытья
однократно. Моющий раствор используют повторно, если он не изменил
своего цвета.
2.4.5. Прополаскивание - вымытые детали прополаскивают в
проточной воде в течение 5 минут. При использовании моющих средств
"Астра" или "Лотос" детали прополаскивают 10 минут под контролем
фенолфталеиновой пробы. После прополаскивания детали ополаскивают
дистиллированной водой.
2.4.6. Сушка. После мытья и прополаскивания элементы и детали
просушивают стерильной простыней и затем подвергают
обеззараживанию.
2.4.7. Контроль эффективности очистки проводят в соответствии
с п.8 приложения N 1 к настоящему приказу.
Таблица 1
ПРИГОТОВЛЕНИЕ МОЮЩЕГО РАСТВОРА - КОМПЛЕКСА
ПЕРЕКИСИ ВОДОРОДА С МОЮЩИМ СРЕДСТВОМ
--------------------------T--------------------------------------¬
¦Состав рабочего раствора¦ Количество компонентов в 1 л ¦
¦ ¦ раствора ¦
¦ +---------------------T------T---------+
¦ ¦ пергидроля в зависи-¦воды в¦ моющего ¦
¦ ¦ мости от содержания¦ мл ¦средства ¦
¦ ¦ в нем перекиси водо-¦ ¦ в г ¦
|
