|
Стр. 5
8. МЕТОДЫ СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ХОЛЕРЫ
Серологические методы исследования, как правило, имеют
дополнительное значение и лишь в отдельных случаях, при проведении
оперативного и ретроспективного эпидемиологического анализа, их
результаты могут быть решающими.
Для серологической диагностики холеры используют
иммунологические реакции, выявляющие в сыворотке крови больных,
переболевших и вибриононосителей, а также вакцинированных
специфические антитела: агглютинины, антитоксины и вибриоцидные
антитела.
У больных холерой на 5-7 день от начала заболевания появляются
агглютинины, антитоксины и вибриоцидные антитела в высоких титрах.
Титры антитоксинов нарастают более медленно.
Необходимо исследовать парные сыворотки с интервалом в 7-10
дней. Первая проба должна быть взята на 2-3 день болезни, а вторая
- через 5-7 дней для оперативной диагностики и через 7- 10 дней и
более - для ретроспективной.
Кровь для серологических исследований берут из вены, а при
отсутствии такой возможности из пальца. Из вены берут 1-5 мл
крови, после свертывания сгусток отслаивают от стенки пробирки
стерильной стеклянной палочкой или платиновой петлей. Пробирки
сохраняют в холодильнике и транспортируют в лабораторию
охлажденными (в термосе, сумке - холодильнике и др.). В
лаборатории сыворотку инактивируют при температуре (56,0 +/- 0,5)
град. С 30 минут.
Если кровь забирают в день постановки реакции, пробирки со
свернувшейся кровью необходимо центрифугировать 10-15 минут при
3000 об./мин. При отсутствии возможности исследовать сыворотку
немедленно ее сохраняют в ампулах при температуре (4,0 +/- 0,5)
град. С. Кровь из пальца берут в объеме 0,4 мл и вносят в
стерильный пенициллиновый флакон или пробирку с 1,6 мл 0,9%
раствора хлорида натрия (1:5).
8.1. Определение агглютининов в сыворотке крови
Обнаружение противохолерных антител методом развернутой
реакции агглютинации. Исследуемую сыворотку разводят 1%-ной
пептонной водой рН 7,5 +/- 0,1 в объеме 1 мл от 1:10 до 1:640. В
качестве антигена используют 3 часовую бульонную культуру,
выделенную в данном очаге, или исследуют в 3 рядах с культурами
холерных вибрионов (сероваров Огава, Инаба и O139 серогруппы). В
пробирку с раститрованной сывороткой вносят по 1 капле культуры -
антигена и ставят на 1 ч. в термостат, затем до утра в холодильник
при температуре (4,0 +/- 0,5) град. С, после чего отмечают
результаты. Реакция сопровождается контролями антигена и
сыворотки.
При определении титра реакции учитывают разведения с
агглютинацией на 3-4 креста.
Результат исследования сыворотки больного при реакции
агглютинации в разведении 1:40 и выше считается ориентировочно
положительным.
Диагностическое значение имеет не менее чем 4-кратное
нарастание титров антител.
Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) с диагностикумом
эритроцитарным холерным антигенным.
РНГА предназначена для выявления полных антител в сыворотке
крови. Это достаточно специфичная и чувствительная
двухкомпонентная реакция. По чувствительности значительно
превосходит реакцию агглютинации. Необходимые ингредиенты,
методика постановки в макро- и микрообъемах изложены в наставлении
к диагностикуму эритроцитарному холерному антигенному.
Результат исследования сыворотки больного в разведении 1:40 и
выше считается ориентировочно положительным.
Диагностическое значение имеет не менее чем 4-кратное
нарастание титров антител.
Реакция нейтрализации антигена (РНАг)
РНАг служит для выявления антител в сыворотке крови с
использованием диагностикума эритроцитарного холерного
иммуноглобулинового. РНАг - высокоспецифическая трехкомпонентная
реакция. Ее принцип заключается в специфической нейтрализации
добавляемого антигена полными и неполными антителами,
содержащимися в сыворотке. Необходимые ингредиенты, методика
постановки в макро- и микрообъемах изложены в инструкциях по
применению к диагностикуму эритроцитарному холерному
иммуноглобулиновому.
При использовании системы реакций РНГА и РНАг отпадает
необходимость в постановке контроля специфичности с каждой
исследуемой сывороткой, т.к. эти две реакции взаимно контролируют
полученные результаты.
Результат исследования сыворотки больного в РНАг в разведении
1:50 (1) и выше считается ориентировочно положительным.
Диагностическое значение имеет не менее чем 4-кратное
нарастание титров антител при исследовании парных сывороток в РНГА
и РНАг.
8.2. Определение вибриоцидных антител в сыворотке
крови (РВА)
Вибриоцидные антитела в крови больных обнаруживаются с 1-3 дня
-1 -3
болезни в титрах 10 -10 и достигают максимальных значений
-4 -8
10 -10 к 10-12 дню. Принцип метода во всех его вариантах
заключается в том, что в присутствии вибриоцидных антител не
происходит размножения холерных вибрионов.
При проведении серологических исследований в очаге,
обусловленном возбудителем холеры определенного серовара, в
реакции используют один штамм соответствующего серовара, при
отсутствии этих данных - два штамма обоих сероваров.
Материалы и оборудование:
- исследуемые сыворотки, инактивированные прогреванием 30 мин.
при температуре (56,0 +/- 0,5) град. С;
- сухой комплемент или свежеполученная сыворотка морской
свинки в разведении 1:20;
- 0,9%-ный раствор хлорида натрия рН 7,2 +/- 0,1;
- штаммы холерных вибрионов сероваров Огава и Инаба, типичные
в S-форме, не чувствительные к комплементу;
- чашки Петри со щелочным агаром;
- лоток со льдом;
- термостат на (37,0 +/- 1,0) град. С.
Методика постановки реакции.
Комплемент, разведенный 0,9%-ным раствором хлорида натрия
1:20, разливают в два ряда пробирок по 0,9 мл. В первую пробирку
вносят 0,1 мл исследуемой сыворотки и после тщательного
перемешивания последовательно переносят по 0,1 мл до разведения
-10
10, получая десятикратные разведения сыворотки в объеме 0,9 мл.
Титрацию сыворотки проводят на льду, который помещают в любую
емкость.
Из односуточной агаровой культуры холерного вибриона готовят
взвесь в 0,9%-ном растворе хлорида натрия, содержащего в 1 мл
10000-20000 м.к. Стерильной градуированной пипеткой полученную
взвесь по 0,1 мл вносят в опытные пробирки с раститрованной
сывороткой.
Необходимы следующие контроли: а) контроль комплемента (0,9 мл
комплемента и 0,1 мл культуры); б) контроль сыворотки (0,8 мл
0,9%-ного раствора хлорида натрия, 0,1 мл сыворотки и 0,1 мл
культуры); в) контроль культуры (0,9 мл 0,9%-ного раствора хлорида
натрия и 0,1 мл культуры).
Штатив с пробирками на 1 ч. помещают в водяную баню или
термостат при температуре (37,0 +/- 0,5) град. С, сделав
предварительно высев из пробирки контроля культуры на 2 пластинки
щелочного агара для определения фактической концентрации живых
вибрионов в опытной суспензии (контроль разведения).
Через 1 ч. штатив вновь ставят на лед и из каждой пробирки
отдельной стерильной пипеткой 0,1 мл культуры высевают на чашку со
щелочным агаром рН 7,0 +/- 0,1. Посев равномерно распределяют по
поверхности чашки покачиванием или шпателем. Чашки помещают на
18-24 ч. в термостат при температуре (37,0 +/- 0,5) град. С, после
чего подсчитывают количество выросших колоний.
В посевах из контрольных пробирок с культурой должно вырастать
количество колоний, близкое к контролю разведения.
Вибриоцидным титром считают максимальное разведение сыворотки,
которое вызывает гибель не менее чем 50% клеток холерного
вибриона, что выявляется при посеве на агаровые пластинки в чашки
Петри, по сравнению с количеством выросших колоний из пробирки
контроля комплемента.
Пример вычисления: при посеве из опытных пробирок с
-1 -2 -3 -4 -5 -6 -7
разведением сыворотки 10 ; 10 ; 10 ; 10 ; 10 ; 10 ; 10 и
т.д. на чашках соответственно выросло 0; 0; 5; 10; 15; 30; 38 и
т.д. колоний. При высеве из пробирки контроля комплемента также
после часовой инкубации при температуре (37,0 +/- 0,5) град. С
выросло 36 колоний, 50% от этого числа будет составлять 18. Из 5-й
пробирки выросло 15 колоний, т.е. меньше 50% от количества колоний
в контроле (18), в следующей - 30, т.е. более 50% этого же
-5
показателя. Разведение сыворотки в 5-й пробирке составляет 10 ,
следовательно, вибриоцидный титр в данном примере будет составлять
-5
10 .
Определение вибриоцидных антител (ВА) в сыворотке крови на
основе ферментации углеводов.
Об отсутствии или наличии ВА судят по ферментации сахарозы,
регистрируемой с помощью индикатора.
Материалы и оборудование:
- инактивированная сыворотка крови;
- штаммы холерного вибриона серовара Огава и Инаба;
- комплемент, разведенный 1:20 1%-ной пептонной водой,
содержащей 1% сахарозы и 1% индикатора Андреде;
- термостат на (37,0 +/- 1) град. С.
Методика постановки реакции.
Комплемент, разведенный 1:20 1%-ной пептонной водой с
сахарозой и индикатором Андреде разливают в пробирки по 0,45 мл. В
первую пробирку добавляют 0,05 мл исследуемой сыворотки и после
тщательного перемешивания переносят 0,05 мл смеси во вторую
пробирку, из второй в третью и т.д. (до разведения
-5 -9
10 -10 ). Готовят суспензию 18-20-часовой агаровой культуры
холерного вибриона и разводят 1%-ной пептонной водой до
3
концентрации 10 м.к./мл в 1 мл. Во все пробирки вносят по 0,45 мл
суспензии и помещают в термостат.
Постановку реакции сопровождают следующими контролями:
- 0,45 мл 1%-ной пептонной воды, содержащей 1% сахарозы и 1%
индикатора Андреде + 0,05 мл исследуемой сыворотки + 0,45 мл
взвеси культуры - контроль сыворотки;
- 0,45 мл комплемента с сахарозой и индикатором + 0,45 мл
культуры - контроль комплемента;
- 0,45 мл 1%-ной пептонной воды с сахарозой и индикатором +
0,45 мл культуры - контроль культуры;
- 0,45 мл 1%-ной пептонной воды с сахарозой и индикатором +
0,05 мл исследуемой сыворотки - контроль стерильности сыворотки.
Через 5-6 ч. проводят учет реакции. При этом в контроле (кроме
контроля стерильности сыворотки) цвет содержимого пробирок должен
перейти в красный или розовый. Изменение цвета индикатора в
пробирках рабочего ряда, связанное с ферментацией сахарозы
размножившимися вибрионами, свидетельствует об отсутствии
вибриоцидных антител в исследуемой сыворотке. За вибриоцидный титр
принимают то наибольшее разведение сыворотки, при котором цвет
содержимого пробирок остается неизмененным или интенсивность его
значительно отличается от окраски контрольных проб. Результат
выражают в виде десятичного логарифма разведения сыворотки,
взятого с обратным знаком.
Примечание. Для постановки РВА при холере, обусловленной
холерным вибрионом O139 серогруппы, не может быть использован
выделенный в очаге штамм в связи с возможной чувствительностью его
к комплементу. В этих случаях рекомендуется предложенный
специалистами Ростовского НИПЧИ, ctx- клон холерного вибриона
O139, направленный на депонирование в Государственную коллекцию
патогенных бактерий "Микроб" (РосНИПЧИ "Микроб").
8.3. Определение токсиннейтрализующих антител
в сыворотке крови
РНГА с эритроцитарным холерным энтеротоксическим
диагностикумом (ЭХЭД) предназначена для выявления
токсиннейтрализующих антител в сыворотке крови больных холерой и
вибриононосителей, у которых инфицирование обусловлено холерными
вибрионами O1 и O130 серогрупп. Токсиннейтрализующие антитела
появляются на 5-7 день болезни, достигая максимума на 14-21 день,
затем их титр постепенно снижается. Иммуноглобулины к холерному
токсину, в сравнении с вибриоцидными и другими специфическими
холерными антителами, дольше циркулируют в сыворотке крови после
перенесенной инфекции (до 8-10 и более месяцев). Условно
положительным титром РНГА с ЭХЭД следует считать 1:160 и выше.
Целесообразно исследовать парные сыворотки. Результат РНГА с ЭХЭД
позволяет сделать заключение о токсигенности (эпидемичности)
циркулирующего в очаге штамма холерного вибриона, в т.ч. и без
выделения культуры.
Приложение N 1
(рекомендуемое)
НАПРАВЛЕНИЕ ПРОБ ОТ ЛЮДЕЙ
в лабораторию ________________________________________________
для исследования на ___________ от "___" _____________ 200_ г.
-------T----T----T------T------T----T----T-----T-----T------T----¬
¦N ¦N ¦Пер-¦Харак-¦Ф.И.О.¦Воз-¦Диа-¦Адрес¦Место¦Время ¦При-¦
¦регис-¦про-¦вич-¦тер ¦ ¦раст¦гноз¦места¦рабо-¦отбора¦ме- ¦
¦траци-¦бы ¦ное ¦мате- ¦ ¦ ¦ ¦жи- ¦ты ¦пробы ¦ча- ¦
¦онный ¦ ¦или ¦риала ¦ ¦ ¦ ¦тель-¦ ¦ ¦ние ¦
¦<*> ¦ ¦пов-¦ ¦ ¦ ¦ ¦ства ¦ ¦ ¦<**>¦
¦ ¦ ¦тор-¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ное ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+------+----+----+------+------+----+----+-----+-----+------+----+
¦ 1 ¦ 2 ¦ 3 ¦ 4 ¦ 5 ¦ 6 ¦ 7 ¦ 8 ¦ 9 ¦ 10 ¦ 11 ¦
L------+----+----+------+------+----+----+-----+-----+------+-----
--------------------------------
<*> Регистрационный номер проставляют в лаборатории.
<**> Указать принимал(а) ли антибиотики (если да - то какие,
когда и сколько).
Пробы отбирали: ______________________________________________
______________________________________________
(Ф.И.О., должность) (Подписи)
Пробы доставил: ______________________________________________
______________________________________________
(Ф.И.О., должность) (Подпись)
Время доставки проб __________________________________________
(дата, время - часы, минуты)
Приложение N 2
(рекомендуемое)
НАПРАВЛЕНИЕ
ПРОБ ИЗ ОБЪЕКТОВ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ
в лабораторию ________________________________________________
для исследования на ___________ от "___" _____________ 200_ г.
---------T-----T------T------------T---------T------------T------¬
¦N регис-¦ N ¦Место ¦ Объект ¦Характер ¦ Объем ¦Время ¦
¦трацион-¦пробы¦отбора¦ для ¦материала¦(количество)¦отбора¦
¦ный ¦ ¦ проб ¦исследования¦ ¦ ¦пробы ¦
¦<*> ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦(час.,¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦мин.) ¦
+--------+-----+------+------------+---------+------------+------+
¦ 1 ¦ 2 ¦ 3 ¦ 4 ¦ 5 ¦ 6 ¦ 7 ¦
L--------+-----+------+------------+---------+------------+-------
--------------------------------
<*> Регистрационный номер проставляют в лаборатории.
Пробы отбирали: ______________________________________________
______________________________________________
(Ф.И.О., должность) (Подписи)
Пробы доставил: ______________________________________________
______________________________________________
(Ф.И.О., должность) (Подпись)
Время доставки проб __________________________________________
(дата, время - часы, минуты)
Приложение N 3
(обязательное)
УКЛАДКА ДЛЯ ЗАБОРА НАТИВНОГО МАТЕРИАЛА ОТ БОЛЬНОГО
С ПОДОЗРЕНИЕМ НА ЗАБОЛЕВАНИЕ ХОЛЕРОЙ (ДЛЯ
ЛЕЧЕБНО - ПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ УЧРЕЖДЕНИЙ СПЕЦИАЛЬНОГО
НАЗНАЧЕНИЯ, СТАНЦИЙ СКОРОЙ И НЕОТЛОЖНОЙ МЕДИЦИНСКОЙ
ПОМОЩИ, АМБУЛАТОРНО - ПОЛИКЛИНИЧЕСКИХ УЧРЕЖДЕНИЙ,
СКП, СКО, ПСКП)
----T----------------------------------------------T------T------¬
¦ N ¦ Наименование ¦ Ед. ¦Кол-во¦
¦п/п¦ ¦измер.¦ ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦ 1 ¦ 2 ¦ 3 ¦ 4 ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦ 1 ¦Банки широкогорлые с крышками или притертыми ¦шт. ¦ 2 ¦
¦ ¦пробками, емкостью не менее 100 мл (стерильн.)¦ ¦ ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦ 2 ¦Трубка стеклянная с резиновой грушей малого ¦шт. ¦ 2 ¦
¦ ¦калибра или ложки (стерильн.) ¦ ¦ ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦ 3 ¦Петли алюминиевые (стерильн.) ¦шт. ¦ 2 ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦ 4 ¦Пробирки бактериологические (стерильн.) ¦шт. ¦ 5 ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦ 5 ¦Тампоны ватные (стерильн.) ¦шт. ¦20-30 ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦ 6 ¦Шпатель деревянный (металлический) (стерильн.)¦шт. ¦ 1 ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦ 7 ¦Штатив складной на 6 гнезд ¦шт. ¦ 1 ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦ 8 ¦Пептонная вода 1%-ная во флаконах по 50 мл ¦шт. ¦ 2 ¦
¦ ¦(стерильн.) <*> ¦ ¦ ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦ 9 ¦Спирт ректификат 96 град. ¦мл ¦ 250 ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦10 ¦Салфетки марлевые ¦шт. ¦ 5 ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦11 ¦Спиртовка ¦шт. ¦ 1 ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦12 ¦Пинцет анатомический ¦шт. ¦ 1 ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦13 ¦Шпагат ¦м ¦ 2 ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦14 ¦Спички ¦кор. ¦ 1 ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦15 ¦Клеенка медицинская подкладная ¦м ¦ 1 ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦16 ¦Пакеты полиэтиленовые ¦шт. ¦ 5 ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦17 ¦Бумага писчая ¦лист ¦ 20 ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦18 ¦Бумага копировальная ¦лист ¦ 2 ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦19 ¦Направление на анализ (бланк) ¦шт. ¦ 3 ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦20 ¦Лейкопластырь ¦уп. ¦ 1 ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦21 ¦Простой карандаш ¦шт. ¦ 1 ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦22 ¦Карандаш по стеклу ¦шт. ¦ 1 ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦23 ¦Бикс (металлический контейнер) для доставки ¦шт. ¦ 1 ¦
¦ ¦проб ¦ ¦ ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦24 ¦Инструкция по забору материала ¦шт. ¦ 1 ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦25 ¦Хлорамин в пакетах по 30 г, рассчитанный на ¦шт. ¦ 10 ¦
¦ ¦приготовление 1 л 3%-ного раствора ¦ ¦ ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦26 ¦Емкость на 1 л для приготовления 3% хлорамина ¦шт. ¦ 1 ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦27 ¦Сухая хлорная известь в пакете из расчета ¦шт. ¦ 1 ¦
¦ ¦200 г на 1 кг выделений ¦ ¦ ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦28 ¦Перчатки резиновые ¦пар ¦ 2 ¦
L---+----------------------------------------------+------+-------
--------------------------------
<*> Под резиновыми пробками, завальцованными металлическими
колпачками.
Приложение N 4
(обязательное)
УКЛАДКА ДЛЯ ЗАБОРА ПРОБ ИЗ ОБЪЕКТОВ ОКРУЖАЮЩЕЙ
СРЕДЫ НА ХОЛЕРУ (ДЛЯ ЦЕНТРОВ ГОССАНЭПИДНАДЗОРА)
----T----------------------------------------------T------T------¬
¦ N ¦ Наименование ¦ Ед. ¦Кол-во¦
¦п/п¦ ¦измер.¦ ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦ 1 ¦Ящик тарный на 20 гнезд ¦шт. ¦ 1 ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦ 2 ¦Ящик металлический - укладка ¦шт. ¦ 1 ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦ 3 ¦Бутылки 0,5 л с ватно - марлевыми (и ¦шт. ¦ 20 ¦
¦ ¦резиновыми) пробками, с пергаментными ¦ ¦ ¦
¦ ¦бумажными колпачками ¦ ¦ ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦ 4 ¦Спирт 96 град. ¦мл ¦ 100 ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦ 5 ¦Вата ¦г ¦ 100 ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦ 6 ¦Карандаш по стеклу ¦шт. ¦ 2 ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦ 7 ¦Карандаш простой ¦шт. ¦ 1 ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦ 8 ¦Бумага писчая ¦лист ¦ 10 ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦ 9 ¦Направление на анализ (бланк) ¦шт. ¦ 10 ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦10 ¦Бумага копировальная ¦лист ¦ 5 ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦11 ¦Пинцет ¦шт. ¦ 1 ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦12 ¦Банка 0,5 л с матерчатыми салфетками (15 шт.) ¦шт. ¦ 1 ¦
¦ ¦для отбора проб сточных вод ¦ ¦ ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦13 ¦Термометр до 50 град. ¦шт. ¦ 1 ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦14 ¦Бумага индикаторная для определения рН (1-12) ¦упак. ¦ 1 ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦15 ¦Банка с притертой крышкой с ватными тампонами ¦шт. ¦ 1 ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦16 ¦Пробирки с тампонами для взятия смывов ¦шт. ¦ 20 ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦17 ¦Штатив на 20 гнезд ¦шт. ¦ 1 ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦18 ¦Батометр ¦шт. ¦ 1 ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦19 ¦Шпагат - мотки по 5, 10 и 30 м ¦м ¦ 45 ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦20 ¦Хлорамин в пакетах по 30 г, рассчитанный на ¦шт. ¦ 2 ¦
¦ ¦приготовление 1 л 3%-ного раствора ¦ ¦ ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦21 ¦Емкость на 1 л для приготовления 3% хлорамина ¦шт. ¦ 1 ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦22 ¦Пакеты полиэтиленовые ¦шт. ¦ 5 ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦23 ¦Халат медицинский и шапочка ¦шт. ¦ 2 ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦24 ¦Перчатки резиновые ¦пары ¦ 2 ¦
+---+----------------------------------------------+------+------+
¦25 ¦Фартук и нарукавники клеенчатые ¦шт. ¦ 1 ¦
L---+----------------------------------------------+------+-------
Приложение N 5
(справочное)
ПЕРЕЧЕНЬ
КОММЕРЧЕСКИХ ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ
ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ХОЛЕРЫ
----------------------------------T------------------------------¬
¦ Наименование питательной среды, ¦ Предприятие - изготовитель ¦
¦ микротест - системы ¦ ¦
+---------------------------------+------------------------------+
¦ 1 ¦ 2 ¦
+---------------------------------+------------------------------+
¦Питательная среда для выделения ¦АО "Биомед" им. И.И.Мечникова,¦
¦и культивирования холерного ¦143422 Московская обл., ¦
¦вибриона, сухая (щелочной агар) ¦Красногорский р-он, п/о ¦
¦ ¦Петрово - Дальнее; ¦
¦ ¦НИПЧИ Сибири и Дальнего ¦
¦ ¦Востока 664047 г. Иркутск, ¦
¦ ¦ул. Трилиссера, 78; ¦
¦ ¦ФГУП "Аллерген", 355004 ¦
¦ ¦г. Ставрополь, ¦
¦ ¦ул. Биологическая, 20 ¦
+---------------------------------+------------------------------+
¦Пептон основной сухой ¦АО "Биомед" им. И.И.Мечникова,¦
¦ ¦НПО "Питательные среды", ¦
¦ ¦367025, г. Махачкала, ¦
¦ ¦ул. Левоневского, 24 ¦
+---------------------------------+------------------------------+
¦Питательная среда элективная ¦Ростовский НИПЧИ, 344007 ¦
¦диагностическая для выделения ¦г. Ростов-на-Дону, ¦
¦холерного вибриона сухая (СЭДХ) ¦ул. Горького, 117 ¦
+---------------------------------+------------------------------+
¦Питательная среда для определения¦НПО "Питательные среды" ¦
¦чувствительности микроорганизмов ¦г. Махачкала ¦
¦к антибиотикам, сухая (АГВ) ¦ ¦
+---------------------------------+------------------------------+
¦Микротест - система для ¦НПО "Питательные среды" ¦
¦идентификации вибрионов (МТС - V)¦г. Махачкала ¦
+---------------------------------+------------------------------+
¦Микротест - система для ¦НПО "Питательные среды" ¦
¦ускоренного определения групп ¦г. Махачкала ¦
¦вибрионов по Хейбергу (МТС - X) ¦ ¦
+---------------------------------+------------------------------+
¦Мультимикротест - система для ¦ФГУП "Аллерген" ¦
¦биохимической идентификации ¦г. Ставрополь ¦
¦Vibrionacae ¦ ¦
+---------------------------------+------------------------------+
¦Системы индикаторные бумажные ¦Нижегородское предприятие по ¦
¦для идентификации микроорганизмов¦производству бактерийных ¦
¦(набор N 1 для вибрионов; ¦препаратов, г. Н. Новгород ¦
¦набор N 2 - для межродовой ¦803950, ул. Грузинская, 44 ¦
¦дифференциации энтеробактерий) ¦ ¦
+---------------------------------+------------------------------+
¦Бактериофаги диагностические ¦РосНИПЧИ "Микроб", 410005 ¦
¦холерные классический и эльтор ¦г. Саратов, ¦
¦сухие ¦ул. Университетская, 46 ¦
+---------------------------------+------------------------------+
¦Фаг дифференциально - ¦РосНИПЧИ "Микроб", г. Саратов ¦
¦диагностический (ДДФ) вида ¦ ¦
¦V. Cholerae жидкий ¦ ¦
+---------------------------------+------------------------------+
¦Среды Гисса с углеводами и ¦НПО "Питательные среды" ¦
¦спиртами: глюкозой, лактозой, ¦г. Махачкала; ¦
¦сахарозой, мальтозой, маннитом, ¦АО "Биомед" им. И.И.Мечникова ¦
¦дульцитом;среда Клиглера; ¦ ¦
¦глюкозофосфатный бульон Кларка ¦ ¦
+---------------------------------+------------------------------+
¦Тест - система диагностическая ¦РосНИПЧИ "Микроб", г. Саратов ¦
¦для выявления V. cholerae ctx ¦ ¦
¦методом ПЦР ¦ ¦
+---------------------------------+------------------------------+
¦Бактериофаги диагностические ¦РосНИПЧИ "Микроб", г. Саратов ¦
¦холерные эльтор ctx+ и ctx- ¦ ¦
¦жидкие ¦ ¦
+---------------------------------+------------------------------+
¦Сыворотка диагностическая ¦РосНИПЧИ "Микроб", г. Саратов;¦
¦холерная O1 адсорбированная и ¦НИПЧИ Сибири и Дальнего ¦
¦неадсорбированная сухая для РА ¦Востока, г. Иркутск ¦
+---------------------------------+------------------------------+
¦Сыворотка диагностическая ¦РосНИПЧИ "Микроб", г. Саратов;¦
¦холерная Инаба адсорбированная ¦(адрес см. выше) ¦
¦сухая ¦НИПЧИ Сибири и Дальнего ¦
¦ ¦Востока, г. Иркутск ¦
+---------------------------------+------------------------------+
¦Сыворотка диагностическая ¦РосНИПЧИ "Микроб", г. Саратов;¦
¦холерная Огава адсорбированная ¦НИПЧИ Сибири и Дальнего ¦
¦сухая ¦Востока, г. Иркутск ¦
+---------------------------------+------------------------------+
¦Сыворотка диагностическая ¦РосНИПЧИ "Микроб", г. Саратов ¦
¦холерная РО адсорбированная сухая¦ ¦
¦для РА ¦ ¦
+---------------------------------+------------------------------+
¦Иммуноглобулины диагностические ¦РосНИПЧИ "Микроб", г. Саратов ¦
¦флуоресцирующие холерные ¦ ¦
¦адсорбированные лошадиные сухие ¦ ¦
+---------------------------------+------------------------------+
¦Бактериофаги диагностические ¦РосНИПЧИ "Микроб", г. Саратов ¦
¦холерные типирующие /1-7/ жидкие ¦ ¦
¦ТЭПВ ¦ ¦
+---------------------------------+------------------------------+
¦Диагностикум эритроцитарный ¦Казахский НИПЧИ, г. Алма-Ата, ¦
¦холерный иммуноглобулиновый сухой¦480074 Казахстан, г. Алма-Ата,¦
¦ ¦ул. Копальская, 14 ¦
+---------------------------------+------------------------------+
¦Диагностикум эритроцитарный ¦Казахский НИПЧИ, г. Алма-Ата ¦
¦холерный энтеротоксический ¦ ¦
¦антигенный сухой ¦ ¦
+---------------------------------+------------------------------+
¦Сыворотки диагностические ¦РосНИПЧИ "Микроб", г. Саратов;¦
¦холерные не 01 группы ¦Ростовский НИПЧИ, ¦
¦поливалентная 02-040, групповые ¦г. Ростов-на-Дону ¦
¦N 1-5, моноварные 02-83 кроличьи ¦ ¦
¦адсорбированные жидкие, 0139 ¦ ¦
¦адсорбированная жидкая, 0139 ¦ ¦
¦адсорбированная сухая для РА ¦ ¦
L---------------------------------+-------------------------------
Приложение N 6
(рекомендуемое)
СПОСОБ ОТБОРА КОЛОНИЙ ВИБРИОНОВ
С ПОМОЩЬЮ СТЕРЕОСКОПИЧЕСКОГО МИКРОСКОПА
В КОСО ПРОХОДЯЩЕМ СВЕТЕ
Принцип метода заключается в том, что при просмотре колоний
различных микробов под малым увеличением микроскопа или лупы при
освещении их пучком света, косо падающим на поверхность агара,
колонии приобретают способность светиться и кажутся окрашенными.
К стереоскопическому микроскопу МБС-2 или МБС-1
приспосабливают устройство для получения узкого пучка света и
зеркало от микроскопа на подвижном шарнире для освещения чашки
снизу под углом 45-50 град. С.
Чашки с посевами просматривают после 12-18 ч. инкубации. При
величине угла падения луча света к поверхности агара в 40-50
град. С колонии вибрионов по своей окраске заметно отличаются от
других микроорганизмов.
Цвет колоний, выросших на щелочном агаре, при косом освещении:
Микроорганизмы Цвет колонии
Холерные вибрионы Преобладает серо - голубой с оттенком
зеленовато - серым, синевато -
зеленым, реже - зеленый с верхним краем
красно - бурого или коричневого оттенка
Сальмонеллы Розовый оттенок
Шигеллы Розовый с фиолетовым оттенком
Кишечная палочка Ярко - красный
Протей Красный с фиолетовым оттенком
Приспособления для просмотра колоний в косо проходящем свете.
1. Столик стереоскопического микроскопа МБС-1 или МБС-2
заменяют специальным приспособлением для освещения чашки снизу под
углом 45-50 град. С. Источником света служит осветитель от
микроскопа, на который надевают кожух с отверстием диаметром 5 мм
против спирали лампочки для получения узкого пучка света. Узкий
пучок света направляют в центр вогнутого зеркала, которое
перемещается на подвижном шарнире поворотом винта в зависимости от
необходимости угла падения света. Угол вычисляют по соотношению
расстояния от зеркала до чашки, которое меняется произвольно, и
расстояние от чашки до поверхности стола, остающегося неизменным.
Для удобства исследования осветитель и зеркало можно
вмонтировать в ящик со стеклянной крышкой, на которую помещают
чашку с посевом. Это дает возможность быстро находить нужный угол
падения света, передвигая зеркало поворотом винта по
вмонтированной шкале.
2. Приспособление, смонтированное из основных узлов
стереоскопического микроскопа БМС-1 и прибора для счета колоний.
Из раструба верхней крышки прибора для подсчета колоний
удалить оба стекла вместе с упорным кольцом и снять верхнюю
крышку. Из скобы передней панели вывинтить вертикальную ось, после
чего убрать диск со светофильтрами. Освободить два винта,
прикрепляющие патрон лампочки освещения к кронштейну на задней
панели. В крышку снизу вставить вертикальную штангу от узла лупы с
таким расчетом, чтобы в рабочем положении прибора муфта с
прижимным винтом оказалась на дне под кронштейном импульсного
счетчика. В муфту зажать держатель с угловыми губками (из
комплекта лабораторного штатива), предварительно укороченный до
110 мм. Держателем закрепить патрон с лампочкой в вертикальном
положении. Крышку фиксировать винтами на своем обычном месте.
Штатив микроскопа МБС-1 вместе с бинокулярной насадкой
отсоединить от столика и установить непосредственно на корпус
прибора для счета колоний так, чтобы 3 сферических ножки основания
штатива охватили раструб крыши прибора, а окно основания было
обращено к наблюдателю. Подлежащие к просмотру чашки с посевами
устанавливают над открытым окном. Нужную освещенность и угол
падения света находят изменением положения лампы, которое
достигается поворотом штанги, после чего последнюю фиксируют
цанговым зажимом.
Приложение N 7
(рекомендуемое)
ЖУРНАЛ РЕГИСТРАЦИИ
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ МАТЕРИАЛА
ОТ БОЛЬНЫХ (ТРУПОВ) ЛЮДЕЙ С ПОДОЗРЕНИЕМ
НА ХОЛЕРУ И ДРУГИЕ КАРАНТИННЫЕ ИНФЕКЦИИ
----------T------T-------T---T---------T----------T--------------¬
¦N ¦Ф.И.О.¦Возраст¦Пол¦ Место ¦ Место ¦Клинический ¦
¦Регистра-¦ ¦ ¦ ¦ работы, ¦жительства¦(патолого- ¦
¦ционный ¦ ¦ ¦ ¦должность¦ (адрес) ¦анатомический)¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦диагноз ¦
+---------+------+-------+---+---------+----------+--------------+
¦ 1 ¦ 2 ¦ 3 ¦ 4 ¦ 5 ¦ 6 ¦ 7 ¦
L---------+------+-------+---+---------+----------+---------------
-------------T------------T----------T------------T--------------T-----------T------------T-----------T-------¬
¦Учреждение, ¦ Цель ¦ N, дата ¦ Применение ¦ Дата и время ¦Исследуемый¦ Результаты ¦ Дата ¦Подпись¦
¦направляющее¦исследования¦первичного¦антибиотиков+------T-------+ материал ¦исследования¦направления¦ врача ¦
¦ пробу ¦ ¦ анализа ¦ ¦взятия¦приема ¦ ¦ ¦ ответа ¦ ¦
¦ ¦ ¦ (год, ¦ ¦пробы ¦анализа¦ ¦ ¦ (месяц, ¦ ¦
¦ ¦ ¦ месяц, ¦ ¦(год, ¦(месяц,¦ ¦ ¦ число) ¦ ¦
¦ ¦ ¦ число) ¦ ¦число,¦число, ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ час) ¦ час) ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+------------+------------+----------+------------+------+-------+-----------+------------+-----------+-------+
¦ 8 ¦ 9 ¦ 10 ¦ 11 ¦ 12 ¦ 13 ¦ 14 ¦ 15 ¦ 16 ¦ 17 ¦
L------------+------------+----------+------------+------+-------+-----------+------------+-----------+--------
Приложение N 8
(рекомендуемое)
ЖУРНАЛ РЕГИСТРАЦИИ
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ ПРОБ ИЗ ОБЪЕКТОВ
ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ
----------T------------T------T-----------T------------T----------------------T------------T-------¬
¦N ¦ Объект ¦Адрес,¦Количество,¦Наименование¦ Дата и время ¦ Результат ¦Подпись¦
¦Регистра-¦исследования¦место ¦ (объем) ¦учреждения, +------T-------T-------+исследования¦ ¦
¦ционный ¦ ¦отбора¦ пробы ¦направившего¦отбора¦приема ¦выдачи ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ проб ¦ ¦ пробы ¦пробы ¦ пробы ¦ответа ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦(год, ¦(месяц,¦(месяц,¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦месяц,¦число, ¦число, ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦число,¦ час) ¦ час) ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ час) ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+---------+------------+------+-----------+------------+------+-------+-------+------------+-------+
¦ 1 ¦ 2 ¦ 3 ¦ 4 ¦ 5 ¦ 6 ¦ 7 ¦ 8 ¦ 9 ¦ 10 ¦
L---------+------------+------+-----------+------------+------+-------+-------+------------+--------
Приложение N 9
(рекомендуемое)
ЖУРНАЛ ИДЕНТИФИКАЦИИ КУЛЬТУР
ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ
------T-----T----T-----T------T------T-----T------T------T------T------T------T-----------T---------------------------¬
¦N ¦N ¦Вид ¦Дата ¦Объект¦Морфо-¦Под- ¦Морфо-¦Индо- ¦Лизин-¦Орни- ¦Арги- ¦Расщепление¦ Ферментация ¦
¦Реги-¦штам-¦мик-¦выде-¦иссле-¦логия ¦виж- ¦логия ¦фенол-¦декар-¦тинде-¦нинди-¦глюкозы в +-----T------T----T----T----+
¦стра-¦ма ¦роба¦ления¦дова- ¦клетки¦ность¦коло- ¦окси- ¦бокси-¦карбо-¦гидро-¦среде Хью -¦саха-¦араби-¦ман-¦ман-¦ино-¦
¦цион-¦ ¦ ¦(чис-¦ния ¦ ¦ ¦ний ¦даза ¦лаза ¦ксила-¦лаза ¦Лейфсона ¦розы ¦нозы ¦нозы¦нита¦зита¦
¦ный ¦ ¦ ¦ло, ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦за ¦ +-----T-----+ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ме- ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦аэро-¦ана- ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦сяц, ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦бное ¦эроб-¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦год) ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ное ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+-----+-----+----+-----+------+------+-----+------+------+------+------+------+-----+-----+-----+------+----+----+----+
¦ 1 ¦ 2 ¦ 3 ¦ 4 ¦ 5 ¦ 6 ¦ 7 ¦ 8 ¦ 9 ¦ 10 ¦ 11 ¦ 12 ¦ 13 ¦ 14 ¦ 15 ¦ 16 ¦ 17 ¦ 18 ¦ 19 ¦
L-----+-----+----+-----+------+------+-----+------+------+------+------+------+-----+-----+-----+------+----+----+-----
Продолжение прилож. N 9
-----------------T-------------------T--------------------------------T-------------------------T------T-------T------¬
¦ Ферментация ¦ Образование ¦ Взаимодействие с холерными ¦Чувствительность к фагам ¦Реак- ¦Чувст- ¦Гемо- ¦
¦ ¦ ¦ иммуноглобулинами в реакциях ¦ холерным ¦ция ¦витель-¦лити- ¦
+----T-----T-----+-----T-----T-------+----------------------T-----T---+-----T----T----T----T----+гемаг-¦ность к¦ческая¦
¦лак-¦крах-¦жела-¦индо-¦серо-¦ацетил-¦ агглютинации ¦РНГА,¦МФА¦клас-¦эль-¦ctx+¦ctx-¦тэпв¦глюти-¦полими-¦актив-¦
¦тозы¦мала ¦тины ¦ла ¦водо-¦метил- +--T-----T-----T--T----+РТПГА¦ ¦си- ¦тор ¦ ¦ ¦1-7 ¦нации ¦ксину В¦ность ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦рода ¦карби- ¦O1¦огава¦Инаба¦РО¦O139¦ ¦ ¦чес- ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦50 ¦в про-¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦нола ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦кому ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ед./мл ¦бе ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦Грейга¦
+----+-----+-----+-----+-----+-------+--+-----+-----+--+----+-----+---+-----+----+----+----+----+------+-------+------+
¦ 20 ¦ 21 ¦ 22 ¦ 23 ¦ 24 ¦ 25 ¦26¦ 27 ¦ 28 ¦29¦ 30 ¦ 31 ¦32 ¦ 33 ¦ 34 ¦ 35 ¦ 36 ¦ 37 ¦ 38 ¦ 39 ¦ 40 ¦
L----+-----+-----+-----+-----+-------+--+-----+-----+--+----+-----+---+-----+----+----+----+----+------+-------+-------
---------T--------T------T-----------------------------------------------------------------------------T-----T-----¬
¦Токси- ¦ ПЦР ¦ ¦ Чувствительность к антибиотикам ¦Зак- ¦Под- ¦
¦генность¦ ¦ +-----------------------------------------T-----------------------------------+люче-¦пись ¦
¦ ¦ ¦ ¦ дискодиффузионный метод ¦ метод серийных разведений ¦ние ¦врача¦
+--------+---T----+------+-----T-----T-----T-----T-----T-----T-----+-----T-----T-----T-----T-----T-----+ <*> ¦ ¦
¦на кро- ¦Ctx¦tcpA¦ДНК- ¦тет- ¦лево-¦док- ¦цип- ¦нит- ¦ко- ¦дру- ¦тет- ¦лево-¦док- ¦цип- ¦нит- ¦ко- ¦ ¦ ¦
¦ликах - ¦AB ¦ ¦зонди-¦раци-¦мице-¦сици-¦роф- ¦рофу-¦три- ¦гие ¦раци-¦мице-¦сици-¦роф- ¦рофу-¦три- ¦ ¦ ¦
¦сосунках¦ ¦ ¦рова- ¦клин ¦тин ¦клин ¦лок- ¦ран- ¦мок- ¦(впи-¦клин ¦тин ¦клин ¦лок- ¦ран- ¦мок- ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ние на¦ ¦ ¦ ¦сацин¦тоин ¦сазол¦сать)¦ ¦ ¦ ¦сацин¦тоин ¦сазол¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ctx AB¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+--------+---+----+------+-----+-----+-----+-----+-----+-----+-----+-----+-----+-----+-----+-----+-----+-----+-----+
¦ 41 ¦42 ¦ 43 ¦ 44 ¦ 45 ¦ 46 ¦ 47 ¦ 48 ¦ 49 ¦ 50 ¦ 51 ¦ 52 ¦ 53 ¦ 54 ¦ 55 ¦ 56 ¦ 57 ¦ 58 ¦ 59 ¦
L--------+---+----+------+-----+-----+-----+-----+-----+-----+-----+-----+-----+-----+-----+-----+-----+-----+------
Примечание: <*> таксономическое определение, токсигенность с
указанием метода определения, чувствительность к антибиотикам
(значения МПК, мкг/мл); при необходимости дифференциации от других
видов патогенных вибрионов добавляют тесты: рост без NaCl;
расщепление салицина, дульцита, целлобиозы, тест на
бета-галактозидазу, наличие нитратредуктазы.
Приложение N 10
(обязательное)
ЖУРНАЛ
УЧЕТА ВЫДЕЛЕННЫХ ШТАММОВ МИКРООРГАНИЗМОВ
(ФОРМА N 513/У)
|
