|
Стр. 12
в пробирку со средой NNN. Манипуляцию делают несколько раз,
засевая каждый раз новую пробирку. Ватные пробки заливают
парафином или надевают на них резиновые колпачки и помещают
пробирки в термостат при 22-24 град. С.
Оценка результатов. Посевы просматривают под микроскопом
ежедневно до обнаружения возбудителя. Просмотр проводят в нативном
препарате, приготовленном по методу раздавленной капли с
объективом х40. Результат посева считают отрицательным, если через
40 дней возбудитель не обнаруживается. Культуральные лейшмании
приобретают удлиненную форму (10-12 мкм со жгутом).
Отсутствие лейшманий в посеве не является основанием для
установления отрицательного диагноза.
Применение культурального метода наиболее целесообразно при
туберкулоидной форме лейшманиоза, диагноз которой другими методами
может оказаться менее эффективным.
Литература.
Добржанская Р.С. Туберкулоидный кожный лейшманиоз. Ашхабад,
1964.
Кожевников П.В., Добротворская Н.В., Латышев Н.И. Учение о
кожном лейшманиозе. М., 1947.
5.2. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ БИОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА НА
НАЛИЧИЕ ГЕЛЬМИНТОВ, ИХ ФРАГМЕНТОВ И ЯИЦ
5.2.1. Обнаружение гельминтов в фекалиях
Принцип. Гельминты или их фрагменты хорошо заметны на темном
фоне, их обнаруживают при просматривании разжиженных водой
фекалий.
Реактивы.
Глицерин.
Специальное оборудование.
Лупа.
Черные фотографические кюветы или чашки Петри.
Пинцеты или препаровальные иглы.
Предметные стекла.
Микроскоп.
Ход обнаружения. Фекалии размешивают с водой до получения
равномерной суспензии, после чего при хорошем освещении тщательно
просматривают отдельными небольшими порциями в черных
фотографических кюветах или на темном фоне в чашках Петри.
Пинцетом или препаровальными иглами извлекают все подозрительные
белые частицы. Крупные образования, подозрительные на фрагменты
гельминтов, рассматривают под лупой между двумя предметными
стеклами.
Если по клиническим показаниям предполагают обнаружение мелких
форм гельминтов (карликовых цепней и других гельминтов) или
головок цестод после лечения, то подозрительные частицы
просматривают под лупой в капле глицерина, а в случае
необходимости, и под микроскопом.
Оценка результатов исследования. Дифференциальная диагностика
между отдельными видами гельминтов основывается на их анатомо -
морфологических признаках. Определение видовой принадлежности
нематод, как правило, возможно лишь по целым экземплярам, реже -
по крупным фрагментам, сохранившим характерные для диагностики
органы. Цестоды можно диагностировать по зрелым членикам,
гермафродитным членикам и сколексам. Видовая дифференциальная
диагностика приводится в прилагаемой литературе.
Примечание. При отсутствии глицерина препараты можно
рассматривать в капле воды.
Литература.
1. Методические материалы по оздоровлению населения от
гельминтозов. М., 1969.
2. Подъяпольская В.П., Капустин В.Ф. - Глистные болезни
человека. М., 1958.
5.2.2. Обнаружение яиц гельминтов в фекалиях
методом толстого мазка (метод Като)
Принцип. Яйца гельминтов обнаруживают в толстом мазке фекалий,
просветленных глицерином и подкрашенных малахитовой зеленью.
Реактивы.
1. 3% водный раствор малахитовой зелени.
2. Глицерин.
3. 6% водный раствор фенола.
4. Смесь Като. 6 мл 3% водного раствора малахитовой зелени,
500 мл глицерина, 500 мл 6% раствора фенола. Стабилен при хранении
в закрытой посуде при комнатной температуре.
5. Целлофановые покровные пластинки по Като. Гидрофильный
целлофан разрезают на пластинки размером 20х40 мм и погружают в
смесь Като так, чтобы они прилегали друг к другу (3-5 мл раствора
Като на 100 пластинок). Через 24 часа они готовы к употреблению.
Хранят готовые пластинки в растворе Като, в хорошо закрытой посуде
при комнатной температуре.
Специальное оборудование.
Микроскоп.
Предметные стекла.
Ход обнаружения. Кусочек фекалий, величиной с горошину, без
добавления воды или какой - либо другой жидкости наносят на
предметное стекло, покрывают вместо покровного стекла целлофановой
покровной пластинкой по Като и придавливают резиновой пробкой так,
чтобы фекалии размазались по предметному стеклу в пределах
целлофановой пластинки, но не выдавливались из-под нее. Мазок
оставляют при комнатной температуре для осветления, после чего
просматривают его под микроскопом. Время осветления мазка зависит
от температуры, но даже в прохладном помещении не должно превышать
один час; в жаркое время года во избежание пересушивания мазок
микроскопируют через 30-40 минут. В некоторых случаях, чтобы
избежать чрезмерного высыхания препарата, на целлофановую
покровную пластинку приготовленного препарата следует класть
влажную губку.
Оценка результатов исследования. Подсчитывают обнаруженные
яйца гельминтов во всем толстом мазке с учетом их видовой
принадлежности. Описанным методом можно выявить заражение
аскаридами, власоглавами, лентецами, трематодами, тениидами и
другими видами; в меньшей степени - анкилостомидами и карликовым
цепнем.
Литература.
Katsuya, Katoh. - Мед. паразитол. и паразит. болезни, 1970, 6,
733-734.
5.2.3. Обнаружение яиц гельминтов в фекалиях
методом обогащения
Принцип. Фекалии суспендируют в флотационном растворе, имеющем
больший удельный вес, чем яйца гельминтов. Яйца гельминтов
всплывают на поверхность; образовавшуюся пленку исследуют под
микроскопом.
Реактивы.
1. Флотационный раствор по Калантарян. 1 кг азотнокислого
натрия растворяют в 1 литре воды, смесь кипятят до образования
пленки и переливают без фильтрования в сухие бутыли. Удельный вес
раствора - 1,38.
или
2. Флотационный раствор по Брудастову и Красноносу. 900 г
азотнокислого натрия и 400 г азотнокислого калия растворяют при
подогревании в 1 литре воды. Удельный вес раствора - 1,47-1,48.
Специальное оборудование.
Микроскоп.
Химические стаканы или склянки с широким горлом, объемом не
менее 100 мл.
Стеклянные палочки.
Предметные стекла.
Ход обнаружения. В химических стаканах или склянках тщательно
размешивают стеклянной палочкой 5-10 г фекалий со 100-200 мл
одного из флотационных растворов. Сразу же по окончании
размешивания стеклянной палочкой удаляют всплывшие на поверхность
крупные частицы. К поверхности солевого раствора прикладывают
предметное стекло. Если между смесью и предметным стеклом остается
пустое пространство, то добавляют солевой раствор до полного
соприкосновения смеси с предметным стеклом. Оставляют для
отстаивания на 20-30 минут, после чего предметное стекло снимают,
кладут под микроскоп пленкой кверху и просматривают без покровного
стекла всю пленку, прилипшую к поверхности предметного стекла. Во
избежание высыхания препарата во время микроскопирования пленку
можно смешать с 2-3 каплями 50% раствора глицерина.
Оценка результатов исследования. Учитывают все обнаруженные в
препарате яйца гельминтов. Описанным методом можно выявить
заражение аскаридами, власоглавами, анкилостомидами, тениидами,
трематодами, лентецами и другими видами гельминтов.
Литература.
Калантарян Е.В. - Мед. паразитол. и паразитар. болезни, 1938,
1, 142.
Брудастов А.Н., Рустамов Б.Р., Краснонос Л.Н. - В кн.:
Актуальные проблемы мед. паразитологии и тропич. медицины.
Тбилиси, 1970, 185.
5.2.4. Обнаружение яиц гельминтов в фекалиях
с применением детергентов (метод Красильникова)
Метод I
Принцип. Под действием поверхностно - активных веществ,
входящих в состав детергентов, яйца гельминтов освобождаются от
фекальных масс и концентрируются в осадке.
Реактивы.
1. 1% раствор стирального порошка "Лотос". Порошок "Лотос"
высушивают в сушильном шкафу при 100 град. С в течение 1-2 часов;
10 г порошка растворяют в 1 л водопроводной воды.
Специальное оборудование.
Микроскоп.
Сушильный шкаф.
Склянки с широким горлом с крышками, емкостью 30-50 мл.
Предметные стекла.
Покровные стекла или целлофановые покровные пластинки по Като.
Пастеровские пипетки с высоко отбитым концом.
Ход обнаружения. В склянку, емкостью 30-50 мл, наливают 20-30
мл раствора детергента; туда же помещают небольшую порцию фекалий,
размером с лесной орех. Соотношение раствора и фекалий должно быть
примерно 1:20. Фекалии должны находиться в растворе не менее
суток. За это время на дне флакона образуется двух - трехслойный
осадок. Нижний слой состоит из грубых тяжелых частиц, в среднем
слое концентрируются яйца гельминтов, под которыми иногда оседают
легкие хлопья. Пастеровскую пипетку с высоко отбитым концом вводят
в средний слой осадка, возможно более низко, но не касаясь дна
склянки, и набирают 1-3 капли жидкости; переносят их на предметное
стекло. Каплю покрывают покровным стеклом или целлофановой
покровной пластинкой по Като и исследуют под микроскопом. На одном
стекле должно быть приготовлено 2 препарата.
Метод II
Принцип. Тот же.
Реактивы. Те же.
Специальное оборудование. То же.
Ход обнаружения. Фекалии помещают в раствор детергента в
весовом соотношении примерно 1:10 и перемешивают их до образования
суспензии. Через 30 минут содержимое пробирки встряхивают 1-2
минуты и центрифугируют 5 минут при 1.000-1.500 об/мин. Из осадка
готовят два препарата на одном стекле.
Оценка результатов исследования. Просматривают под микроскопом
оба препарата полностью, учитывая все обнаруженные яйца
гельминтов. Описанным методом можно выявить яйца всех видов
гельминтов, выделяемых с фекалиями.
Примечания.
1. При отсутствии "Лотоса" можно пользоваться и другими
стиральными порошками, но для каждого из них необходимо подобрать
соответствующую концентрацию раствора: для его приготовления берут
такую максимальную навеску стирального порошка, которая
растворяется без образования осадка.
2. Фекалии для исследования желательно помещать в раствор
детергента не более чем через 1 час после дефекации.
Литература.
Красильников А.А. - Мед. параз. и параз. бол., 1970, 3, 31.
5.2.5. Обнаружение яиц гельминтов в перианально - ректальных
соскобах с применением деревянного шпателя
Принцип. Яйца гельминтов, находящиеся в нижнем отрезке
кишечника и в перианальных складках, счищают деревянным шпателем и
исследуют под микроскопом.
Реактивы.
1. 50% раствор глицерина или
2. 1% раствор двууглекислого натрия (NaHCO3).
Специальное оборудование.
Микроскоп.
Предметные стекла.
Покровные стекла.
Деревянные шпатели (можно пользоваться отточенной в виде
шпателя спичкой).
Ход обнаружения. Соскоб с перианальных складок делают или
утром, до дефекации (у женщин - и до мочеиспускания), или вечером
(через 2-3 часа после того как пациент лег спать). Соскабливание
производят осторожно с поверхности складок в окружности ануса и в
нижних отделах прямой кишки деревянным шпателем, смоченным в 50%
растворе глицерина или в 1% растворе двууглекислого натрия.
Полученный материал, тщательно счищенный со шпателя краем
покровного стекла, помещают на предметное стекло в каплю того же
раствора, которым смочен шпатель, накрывают этим же покровным
стеклом и исследуют под микроскопом. Шпатель после однократного
использования сжигают.
Оценка результатов исследования. Просматривают весь препарат и
отмечают все обнаруженные яйца гельминтов. Метод применяется для
диагностики тениаринхоза и энтеробиоза.
Литература. Подъяпольская В.П., Капустин В.Ф. - Глистные
болезни человека. М., 1958.
5.2.6. Обнаружение личинок гельминтов в фекалиях
(метод Бермана)
Принцип. Метод основан на способности личинок гельминтов
мигрировать по направлению к теплу.
Реактивы. Не требуются.
Специальное оборудование.
Микроскоп.
Металлический штатив.
Металлическая сетка.
Металлические зажимы.
Воронки.
Резиновые трубки.
Предметные стекла.
Ход обнаружения. На узкий конец стеклянной воронки надевают
резиновую трубку с зажимом и укрепляют ее на металлическом
штативе. В воронку помещают металлическую сетку, на которой
находится 5-10 г фекалий. Приподняв сетку, заполняют воронку
подогретой до 40-50 град. С водой так, чтобы нижняя часть сетки с
фекалиями была погружена в воду. Личинки из фекалий активно
переходят в теплую воду и скапливаются в нижней части резиновой
трубки, надетой на воронку. Через 4 часа зажим на трубке открывают
и спускают жидкость в одну - две центрифужные пробирки. После
центрифугирования в течение 2-3 минут надосадочную жидкость быстро
сливают, а осадок переносят на предметное стекло и исследуют под
микроскопом.
Оценка результатов исследования. В осадке отыскивают личинки
стронгилоидес. Исследование проводится при подозрении на
стронгилоидоз.
Литература. Подъяпольская В.П., Капустин В.Ф. Глистные болезни
человека. М., 1958.
5.2.7. Обнаружение личинок гельминтов в фекалиях
культивированием их на фильтровальной бумаге
(метод Харада и Мори)
Принцип. В тепле на влажной фильтровальной бумаге из яиц
анкилостом или некаторов, выделяемых с фекалиями, развиваются
филяриевидные личинки, которые могут быть легко обнаружены.
Реактивы. Не требуются.
Специальное оборудование.
Лупа.
Термостат на 28 град. С.
Предметные стекла.
Микроскоп.
Ход обнаружения. На полоску фильтровальной бумаги, размером
15х1,5 см наносят 0,5 г фекалий таким образом, чтобы полоски на
концах оставались свободными. Бумагу с фекалиями помещают в
пробирку, на 1/4 заполненную водой, так, чтобы один край полоски,
свободный от фекалий, был погружен в воду, а другой конец выступал
из пробирки и удерживался пробкой. Пробирку на 5-6 дней помещают в
термостат при 28 град. С. Филяриевидные личинки, развившиеся из
яиц за это время, спускаются по фильтровальной бумаге и оседают на
дне пробирки. По окончании инкубации бумагу извлекают из пробирки
и уничтожают, а жидкость исследуют под лупой или невооруженным
глазом при боковом освещении дна пробирки. В сомнительных случаях
жидкость центрифугируют и осадок исследуют под микроскопом.
Оценка результатов исследования. Под лупой или невооруженным
глазом при боковом освещении дна пробирки выявляют филяриевидные
личинки анкилостом или некаторов. Описанным методом можно выявить
заражение анкилостомами или некаторами и провести дифференциальную
диагностику заболеваний, ими вызываемых.
Примечания.
1. В теплое время года можно оставлять пробирки при комнатной
температуре, но время инкубации при этом увеличивается до 8-10
дней.
2. Фекалии для исследования должны быть взяты не более чем
через 1 час после дефекации.
Литература.
Махмудова М.А. - Мед. паразит. и паразит. бол., 1962, 2, 180.
5.2.8. Обнаружение яиц гельминтов в дуоденальном
содержимом и желчи
Принцип. Яйца гельминтов, паразитирующих в печени, желчном
пузыре, в поджелудочной железе и двенадцатиперстной кишке, могут
быть обнаружены в желчи или в дуоденальном содержимом, получаемом
при дуоденальном зондировании.
Реактивы.
Серный эфир.
Специальное оборудование.
Микроскоп.
Химические стаканы или склянки.
Предметные стекла.
Покровные стекла или целлофановые покровные пластинки по Като.
Ход обнаружения. Дуоденальное содержимое и желчь (порция А, В
и С) получают обычным путем при помощи зондирования. Для порции В
рекомендуется обязательно получать рефлекс желчного пузыря
введением через зонд 33% раствора сернокислой магнезии. Из
исследуемой жидкости сначала выбирают и просматривают под
микроскопом плавающие в ней хлопья, а затем смешивают ее с равным
количеством серного эфира. Смесь тщательно взбалтывают и
центрифугируют. Надосадочную жидкость сливают, а весь осадок
исследуют под микроскопом.
Оценка результатов исследования. Учитывают все яйца
гельминтов, обнаруженные в осадке и хлопьях. Исследование желчи и
дуоденального содержимого производится при подозрении на
гельминтозы печени и желчного пузыря (описторхоз, клонорхоз,
фасциолез, дикроцелиоз) и двенадцатиперстной кишки
(отронгилоидоз).
Примечание. При отсутствии гноя и слизи желчь и дуоденальное
содержимое центрифугируют, не смешивая с эфиром.
Литература.
Василькова З.Г. - Методы гельминтологических исследований. М.,
1955.
Приложение N 3
к приказу Министерства
здравоохранения СССР
от 15.10.1974 г. N 960
ТЕРМИНОЛОГИЯ
К УНИФИЦИРОВАННЫМ КЛИНИЧЕСКИМ ЛАБОРАТОРНЫМ МЕТОДАМ
ИССЛЕДОВАНИЯ
---------------------------------T------------------------------¬
¦ Название ¦ Значение ¦
+--------------------------------+------------------------------+
¦Обнаружение ¦Качественная проба ¦
+--------------------------------+------------------------------+
¦Определение ¦Количественная проба ¦
+--------------------------------+------------------------------+
¦Биологический материал ¦Материал, в котором проводится¦
¦для исследования ¦обнаружение или определение¦
+--------------------------------+------------------------------+
¦Образец ¦Количество биологического¦
¦ ¦материала, поступившее в¦
¦ ¦лабораторию для исследования ¦
+--------------------------------+------------------------------+
¦Опытная проба ¦Проба биологического¦
¦ ¦материала, подвергшаяся¦
¦ ¦обработке в процессе¦
¦ ¦обнаружения, определения ¦
+--------------------------------+------------------------------+
¦Холостая проба ¦Проба, подвергшаяся обработке¦
¦ ¦так же, как опытная проба, но¦
¦ ¦состоящая: ¦
¦ ¦1) из реактивов без¦
¦ ¦биологического материала (или¦
¦ ¦без калибровочного раствора) ¦
¦ ¦2) из биологического¦
¦ ¦материала, разбавленного так,¦
¦ ¦как опытная проба, но без¦
¦ ¦реактивов ¦
¦ ¦3) из реактивов и¦
¦ ¦инактивированного ¦
¦ ¦биологического материала ¦
+--------------------------------+------------------------------+
¦Контрольная проба ¦Проба контрольного материала,¦
¦ ¦подвергшаяся обработке так же,¦
¦ ¦как опытная проба, для¦
¦ ¦выявления возможных ошибок и¦
¦ ¦контроля качества работы. ¦
+--------------------------------+------------------------------+
¦Калибровочный раствор ¦Раствор, который применяется¦
¦ ¦для построения калибровочного¦
¦ ¦графика ¦
+--------------------------------+------------------------------+
¦Калибровочная проба ¦Проба калибровочного раствора,¦
¦ ¦подвергшаяся обработке так же,¦
¦ ¦как опытная проба ¦
+--------------------------------+------------------------------+
¦Стандартный раствор ¦Раствор стандартного образца ¦
+--------------------------------+------------------------------+
¦Стандартный образец ¦Вещество, которое точно¦
¦ ¦охарактеризовано химическими и¦
¦ ¦физическими испытаниями ¦
+--------------------------------+------------------------------+
¦Расчет результатов ¦Проводится при определении ¦
+--------------------------------+------------------------------+
¦Оценка результатов ¦Проводится при обнаружении ¦
L--------------------------------+-------------------------------
|
