|
Стр. 1
Утверждаю
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации,
Первый заместитель
Министра здравоохранения
Российской Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
6 июля 2001 года
Дата введения -
1 октября 2001 года
2.1.4. ПИТЬЕВАЯ ВОДА И ВОДОСНАБЖЕНИЕ
НАСЕЛЕННЫХ МЕСТ
ОРГАНИЗАЦИЯ ВНУТРЕННЕГО КОНТРОЛЯ
КАЧЕСТВА САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ
ИССЛЕДОВАНИЙ ВОДЫ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
МУ 2.1.4.1057-01
1. Разработаны Федеральным центром госсанэпиднадзора Минздрава
России (Л.Г. Подунова, Н.С. Кривопалова, Р.С. Сорокина),
Аналитическим центром контроля качества воды ЗАО "Роса" (Г.П.
Кашкарова, Е.Н. Ахапкина, С.Н. Тымчук, А.И. Дородников, А.В.
Карташова, В.Е. Ларин), Федеральным научным центром гигиены им.
Ф.Ф. Эрисмана (Г.М. Трухина), Центром госсанэпиднадзора в Тульской
области (Т.А. Попова).
2. Утверждены Главным государственным санитарным врачом
Российской Федерации - Первым заместителем Министра
здравоохранения Российской Федерации Г.Г. Онищенко 6 июля 2001 г.
3. Введены впервые.
1. ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ
Методические указания "Организация внутреннего контроля
качества санитарно-микробиологических исследований воды" (далее -
Методические указания) предназначены для лабораторий, выполняющих
санитарно-микробиологические исследования воды при обеспечении
государственного санитарно-эпидемиологического и производственного
контроля качества воды: питьевого, хозяйственно-бытового
водоснабжения, водных объектов рекреации, спорта и др.
Настоящие Методические указания являются первым опытом
обобщения научных данных и практических рекомендаций международных
и отечественных документов в этой области, а также результатов их
использования в производственных условиях.
Авторы рассматривают представленный документ как один из
этапов совершенствования организации внутреннего контроля в
отношении качества микробиологических исследований.
Методические указания представляют собой свод отдельных
методик и процедур контроля качества, выполняемых на различных
этапах микробиологических исследований, и направлены на их
унификацию в целях получения надежных и сопоставимых результатов
анализа.
Данные Методические указания являются обязательными для
выполнения лабораториями, аккредитованными (аттестованными) на
проведение санитарно-микробиологических исследований воды.
Руководство по качеству аккредитованной испытательной лаборатории
должно включать или иметь ссылки на процедуры, описанные в
Методических указаниях.
Документальное представление результатов выполнения методик и
процедур, содержащихся в Методических указаниях, является
неотъемлемой частью при подтверждении технической компетенции
лабораторий, аккредитуемых в области микробиологических
исследований воды.
2. НОРМАТИВНЫЕ ССЫЛКИ
1. ГОСТ 18963-73 "Вода питьевая. Методы
санитарно-бактериологического анализа".
2. ГОСТ 26670-91 "Продукты пищевые. Методы культивирования
микроорганизмов".
3. ГОСТ Р ISO/МЭК 17025-2000 "Общие требования к
компетентности испытательных и калибровочных лабораторий".
4. ГОСТ Р 51446-99 (ISO 7218-96) "Микробиология. Продукты
пищевые. Общие правила микробиологических исследований".
5. XI Государственная фармакопея СССР. М., 1998.
6. Инструкции по микробиологическому контролю производства на
предприятиях молочной промышленности. М., 1987.
7. Методические рекомендации к контролю питательных сред по
биологическим показателям. МЗ СССР. М., 1980.
8. Методические рекомендации по контролю стерилизации с
использованием индикаторов стерилизации НПФ "Винар", N 11-8/03-54
от 11.06.93. МЗ РФ.
9. МУ 2.1.4.682-97 Методические указания по внедрению и
применению санитарных правил и норм СанПиН 2.1.4.559-96 "Питьевая
вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных
систем питьевого водоснабжения. Контроль качества".
10. МУК 4.2.1018-01 "Санитарно-микробиологический анализ
питьевой воды".
11. МУК 4.2.577-96 "Методы микробиологического контроля
продуктов детского питания и лечебного, их компонентов".
12. МУК 4.2.734-99 "Микробиологический мониторинг
производственной среды".
13. ОСТ 42-21-2-85 "Стерилизация и дезинфекция изделий
медицинского назначения. Методы, средства и режимы". МЗ СССР,
1985.
14. Приказ N 720 Минздрава СССР от 31 июля 1978 г., п. 4
"Мероприятия, обеспечивающие асептические условия при посевах".
15. Приказ Минздрава РФ от 07.02.00 N 45 "О системе мер по
повышению качества клинических лабораторных исследований в
учреждениях здравоохранения Российской Федерации".
16. Руководство Министерства здравоохранения Российской
Федерации Р 3.1.683-98 "Использование ультрафиолетового излучения
для обеззараживания воздуха и поверхностей в помещениях". М.,
1998.
17. Руководство Р 2.2.755-99 "Гигиенические критерии оценки и
классификации условий труда по показателям вредности и опасности
факторов производственной среды, тяжести и напряженности трудового
процесса".
18. Сборник инструкций по общим методам контроля стерильности,
физико-химических свойств, пирогенности, на отсутствие
контаминирующих агентов и токсичности медицинских
иммунобиологических препаратов. Утв. Приказом МЗ СССР N 31 от
13.01.83.
19. Система аккредитации испытательных лабораторий (центров)
государственной санитарно-эпидемиологической службы Российской
Федерации. М., 1997.
20. СП 1.2.731-99 "Безопасность работы с микроорганизмами III
- IV групп патогенности и гельминтами". М., 1999.
21. СП 1.2.036-95 "Порядок учета, хранения, передачи и
транспортирования микроорганизмов I - IV групп патогенности". М.,
1996.
22. ФС 42-3377-97 "Питательный агар для культивирования
микроорганизмов сухой (ГРМ-агар)".
23. ФС 42-3378-97 "Питательный бульон для культивирования
микроорганизмов сухой (ГРМ-бульон)".
24. ФС 42-3504-97 "Питательная среда для выделения
энтеробактерий сухая (агар Эндо)".
25. ФС 42-3588-98 "Питательная среда для выделения сальмонелл
сухая (висмут-сульфит агар)".
Использованные документы международного уровня указаны в
разделе "Библиография".
3. ТЕРМИНЫ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ
1. Бокс (боксированное помещение) - изолированное помещение с
тамбуром (предбоксником).
2. Бокс биологической безопасности (ламинарное укрытие,
ламинарный шкаф) - конструкция, используемая для физической
изоляции (удержания и контролируемого удаления из рабочей зоны)
микроорганизмов с целью предотвращения возможности заражения
персонала и контаминации воздуха рабочей зоны и окружающей среды.
3. Запас рабочей культуры - культура эталонного штамма в
условиях временного хранения (полужидкий агар, 4 - 8 °C).
4. Запас эталонной культуры - культура эталонного штамма в
условиях длительного хранения (-70 °C, жидкий азот).
5. Культура для целевого использования - культура эталонного
штамма, прошедшая не более 2 пассажей после высева со среды
временного хранения (из запасов рабочей культуры), предназначенная
для использования в анализе.
6. Лиофилизированная культура - лиофильно высушенная культура
эталонного штамма.
7. Патогенные биологические агенты (ПБА) - патогенные для
человека микроорганизмы (бактерии, вирусы, хламидии, риккетсии,
простейшие, грибы, микоплазмы), генно-инженерно-модифицированные
микроорганизмы, яды биологического происхождения (токсины),
гельминты, а также материал, подозрительный на содержание
перечисленных агентов (включая кровь, другие биологические
жидкости и объекты окружающей среды).
8. Посевная - рабочее помещение, предназначенное для
выполнение первого этапа санитарно-микробиологического
исследования воды: концентрирования, разведения и/или посева в
питательные среды.
9. Посевная доза - объем конкретного разведения, содержащий
необходимое для посева количество жизнеспособных клеток тестового
микроорганизма.
10. Разбавитель - жидкость определенного состава, служащая для
приготовления серийных разведений исследуемой воды или модельных
бактериальных культур.
11. Субкультура - культура бактерий, полученная путем пассажа
через полноценные питательные среды.
4. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ ОРГАНИЗАЦИИ ВНУТРЕННЕГО
КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО
ИССЛЕДОВАНИЯ ВОДЫ
Ведущим аспектом деятельности современной лаборатории является
разработка Системы качества и обеспечение ее функционирования.
Система качества - это совокупность организационной структуры,
методик, процессов и ресурсов, необходимых для осуществления
общего руководства качеством (ISO 8401:1994-04-01).
Система качества охватывает широкий спектр позиций, начиная от
нормативно-методической документации, всесторонне регламентирующей
деятельность лаборатории, ее планировки и технического оснащения,
квалификации, численности и расстановки кадров до организации
внутреннего контроля качества выполняемых анализов.
Согласно МУ 2.1.4.682-97 по внедрению и применению
СанПиН 2.1.4.559-96 внутрилабораторный (внутренний) контроль
качества является обязательным звеном в обеспечении качества
исследований воды.
Внутренний контроль качества микробиологических исследований -
это комплекс выполняемых лабораторией мероприятий и процедур,
направленных на обеспечение и контроль стабильности требуемых
условий развития искомого микроорганизма, а также предупреждение
неблагоприятного воздействия факторов, возникающих в процессе
подготовки, выполнения и оценки результатов анализа, способных
повлиять на достоверность результата.
Особенностью санитарно-микробиологических исследований воды
является необходимость количественной оценки полученного
результата.
Специфика объекта микробиологических исследований, живого
микроорганизма, обладающего индивидуальными (родовыми, видовыми,
штаммовыми) свойствами и особенностями жизнедеятельности в
условиях водной среды, создает не зависящие от исследователя
проблемы в оценке точности количественного результата и
обусловливает погрешность микробиологических методов, достигающую
сотен процентов.
К наиболее значимым объективным факторам, влияющим на
результат анализа, относятся следующие:
- неравномерность распределения микроорганизмов,
обусловливающая разброс данных при анализе двух одинаковых объемов
одной пробы воды;
- способность адсорбироваться на взвешенных веществах с
образованием трудноразделимых в процессе взбалтывания комплексов,
которые при посевах могут регистрироваться как один микроорганизм;
- влияние сопутствующих микробов-антагонистов, тормозящих
развитие искомых микроорганизмов при их наличии в анализируемой
пробе воды;
- возможное присутствие в исследуемой воде посторонних
химических веществ либо образование их соединений с компонентами
питательной среды, которые могут угнетать (стимулировать) рост
исследуемых микроорганизмов, а также влиять на изменение видовых
биохимических идентификационных признаков;
- нахождение микроорганизма в "стрессовом" состоянии под
воздействием неблагоприятных условий водной среды, в результате
которого затормаживается его способность к развитию.
Исходя из этого основной задачей микробиологических
исследований является создание оптимальных условий для развития
выделяемого микроорганизма в целях получения надежных,
сопоставимых количественных результатов.
Организация внутреннего контроля качества на всех этапах
выполнения микробиологического анализа воды является основой
получения качественного результата.
Основные направления организации внутреннего контроля
качества:
1. Контроль за соблюдением требований к условиям проведения
анализа (лабораторные помещения, воздушная среда, температурные
режимы инкубации и хранения, режимы дезинфекции и стерилизации и
т.д.).
2. Выполнение регламентированных процедур ведения тестовых
культур.
3. Контроль качества питательных сред.
4. Контроль качества мембранных фильтров.
5. Контроль качества дистиллированной воды.
6. Оценка достоверности качественного результата путем
использования заведомо положительных и отрицательных контролей.
7. Оценка доверительных границ полученного количественного
результата.
8. Систематический анализ результатов контрольных процедур в
целях совершенствования руководства по качеству.
Структура организации внутреннего контроля качества,
периодичность и частота выполняемых процедур представлены в
Прилож. 1, 2.
Описания процедур контроля соблюдения требований к условиям
проведения анализа, ведения эталонных бактериальных культур,
контроля качества питательных сред и мембранных фильтров,
постановки положительных и отрицательных контролей и др.
представлены в тексте Методических указаний и иллюстрированы в
Приложениях.
Документальное оформление результатов проведенных контрольных
процедур осуществляется в произвольной форме, удобной исполнителю
и наглядной для других специалистов, привлекаемых к участию в
различных комиссиях по проверке работы лаборатории (по аттестации,
аккредитации и др.). При этом могут быть использованы журнальные
формы учета или формы отдельных контрольных листов, которые
впоследствии брошюруются за определенный период времени (месяц,
квартал, год) в зависимости от кратности и вида контроля.
Регистрация и хранение контрольных результатов могут
осуществляться на электронных носителях.
Приведенные в Приложении к Методическим указаниям некоторые
учетные формы носят информационный характер и даны в качестве
возможного варианта учета результатов. Исключение составляют
Прилож. 4 и 8.1, в которых приведены формы учета, утв. Минздравом
России.
В информационном Прилож. 11 представлен Перечень современного
оборудования, применение которого будет способствовать повышению
качества выполняемых санитарно-микробиологических исследований
воды и надежности получаемых результатов.
Обязательным разделом внутреннего контроля качества является
проведение периодического, но не реже 1 раза в год, анализа
результатов выполненных контрольных процедур, с учетом которого
осуществляется корректировка руководства по качеству испытательной
лаборатории.
Обеспечение качества выполняемых исследований возможно только
при наличии квалифицированного персонала. К работе по выполнению
санитарно-микробиологических анализов воды допускаются специалисты
с высшим и средним специальным медицинским / биологическим
(микробиологическим) образованием, проходящие не реже 1 раза в
пять лет курс повышения квалификации в объеме, определенном
Минздравом России для бактериологов, с выдачей удостоверения
установленного образца.
Требования к набору помещений и их размещению, организации и
безопасности работ микробиологических лабораторий с патогенными
биологическими агентами изложены в санитарных правилах
"Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп
патогенности и гельминтами", СП 1.2.731-99.
Требования к процедурам выполнения исследований и
метрологическому обеспечению оборудования представлены в
соответствующих нормативных документах и не являются предметом
рассмотрения данных Методических указаний.
Вопрос оценки достоверности количественных результатов
микробиологических исследований воды на сегодняшний день в России
остается не решенным. Действующий ГОСТ 27384-87, представляющий
нормы погрешностей для бактериологических исследований воды, не
обеспечивает возможности оценки получаемых результатов, т.к.
входит в противоречие с реальными методиками анализа.
В случае возникновения проблем сопоставимости и достоверности
результатов санитарно-микробиологических исследований воды
ориентировочную оценку можно получить обращением к табл.
ГОСТа 51446-99 "Продукты пищевые. Общие правила микробиологических
исследований", разработанного на основе международного документа
ИСО 7218:96.
5. КОНТРОЛЬ ТЕМПЕРАТУРНЫХ РЕЖИМОВ
ИНКУБАЦИИ И ХРАНЕНИЯ
5.1. Процедура контроля температуры в термостатах
Контроль температуры в термостатах проводят ежедневно перед
началом работы.
Для контроля используют поверенные термометры.
Цена деления термометра не должна превышать половины величины
допустимого отклонения температуры инкубации, определенного
нормативно-методической документацией. Например: для температуры
37 °C допустимое отклонение температуры составляет +/- 1 °C. Для
контроля температуры в термостате, поддерживающем данную
температуру, необходимо использовать термометры с ценой деления не
более 0,5 °C. Соответственно для температуры 44 °C при допустимом
отклонении температуры +/- 0,5 °C цена деления контрольного
термометра не должна превышать 0,25 °C.
Подготовительный этап
Для устранения искажения показаний термометра из-за быстрого
изменения температуры в термостате при открывании дверцы термометр
помещают в пробирку с глицерином либо с расплавленным парафином.
После застывания парафина подготовленный термометр можно размещать
в горизонтальном положении.
Методика контроля
Термометр размещают в центре камеры. При выявлении в процессе
аттестации термостата экстремальных точек термометры размещают в
экстремальных точках.
Ежедневно перед началом работы снимают показания контрольного
термометра, результаты измерений заносят в журнал (контрольный
лист) и заверяют подписью исполнителя (Прилож. 3).
В журнале для каждого термостата должно быть отмечено
допустимое отклонение температуры с учетом требований методов, для
исполнения которых используется конкретный термостат.
В случае превышения допустимых отклонений температуры
сотрудник, проводящий регистрацию, должен немедленно сообщить об
этом руководителю подразделения для принятия мер.
5.2. Процедура контроля температуры в холодильниках
Контроль температуры в холодильниках проводят один раз в
неделю. Температура в холодильнике должна быть в пределах (4 - 8)
°C. Для контроля используют поверенные термометры, подготовленные
как указано в п. 5.1.
Методика контроля
Термометр помещают в центр камеры холодильника.
Один раз в неделю перед началом работы снимают показания
контрольных термометров, результаты измерений заносят в журнал
(контрольный лист) и заверяют подписью исполнителя (Прилож. 3).
В случае превышения допустимых отклонений температуры
сотрудник, проводящий регистрацию, должен поставить в известность
руководителя подразделения и провести регулировку для компенсации
выявленных отклонений. Регулировку проводят переводом регулятора
температуры холодильника в нужное положение. После приведения
температуры до уровней допустимых значений двукратно, через 4 часа
и на следующий день, проводят регистрацию температуры.
После приведения к норме режима работы холодильника переходят
к обычной схеме контроля температуры.
6. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА СТЕРИЛИЗАЦИИ И ДЕЗИНФЕКЦИИ
6.1. Процедура контроля режимов паровой
и суховоздушной стерилизации
Для контроля режимов стерилизации необходимо использовать три
вида контроля.
-----------------------------T------------------------------------
| Вид контроля | Кратность контроля |
+----------------------------+-----------------------------------+
|Химический |каждый цикл стерилизации |
+----------------------------+-----------------------------------+
|Термический |1 раз в 2 недели |
+----------------------------+-----------------------------------+
|Биологический |2 раза в год |
L----------------------------+------------------------------------
Термический и химический контроль режима стерилизации
проводится оператором парового стерилизатора, прошедшим курс
специальной подготовки по безопасной эксплуатации автоклавов.
Биологический контроль осуществляется бактериологом
лаборатории, проводящей санитарно-бактериологические исследования
воды, или дезинфекционными станциями по заказу лаборатории.
Обо всех случаях неудовлетворительного прохождения какого-либо
из видов контроля стерилизации ответственный исполнитель
информирует руководителя подразделения.
При неудовлетворительном прохождении контроля использование
всей партии материалов запрещается. Материал требует повторной
обработки. До выяснения причин неудовлетворительной работы
стерилизатор не используется.
Причину неудовлетворительной работы стерилизатора
устанавливают представители "Медтехники" или технических служб
предприятия. После устранения причины процедуру контроля работы
стерилизатора повторяют.
6.1.1. Химический тестовый контроль
Химический контроль проводят при каждом рабочем цикле. Для
контроля используют бумажные индикаторы стерилизации (НПО "Винар")
или тестовые химические вещества, рекомендованные в прилож. 7.6
санитарных правил 1.2.731-99.
Методика контроля паровой стерилизации
В контрольных точках рабочей камеры укладывают герметично
запаянные ампулы с химическим тестовым веществом или индикаторные
полоски ИС длиной 2 - 3 см, которые прикрепляют к стерилизационным
коробкам или стерилизуемым изделиям.
Число контрольных точек зависит от емкости камеры.
-------------------------------T----------------------------------
| Емкость камеры | Число контрольных точек |
| парового стерилизатора (л) | в стерилизационной камере |
+------------------------------+---------------------------------+
|100 | 5 |
+------------------------------+---------------------------------+
|100 - 750 | 11 |
+------------------------------+---------------------------------+
|Свыше 750 | 13 |
L------------------------------+----------------------------------
Для стерилизатора объемом до 100 л точки 1 и 2 находятся: для
горизонтального автоклава 1-я - у загрузочной двери, 2-я - у
противоположной стенки, для вертикального автоклава - в верхней и
нижней части камеры, соответственно. В точках 1 и 2 тесты
располагают вне стерилизуемых изделий. В остальных точках тесты
располагают в центре стерилизационных коробок или внутри
стерилизуемых упаковок.
Для стерилизаторов больших объемов тесты располагают согласно
схеме, приводимой в инструкции по использованию индикаторов
стерилизации.
Методика контроля суховоздушной стерилизации
В контрольных точках рабочей камеры укладывают герметично
запаянные ампулы с химическим тестовым веществом или индикаторные
полоски ИС длиной 2 - 3 см, которые прикрепляют к упаковкам или
стерилизуемым изделиям.
Число контрольных точек зависит от емкости камеры.
--------------------------------T---------------------------------
| Емкость камеры | Число контрольных точек |
| воздушного стерилизатора (л) | в стерилизационной камере |
+-------------------------------+--------------------------------+
|До 80 | 5 |
+-------------------------------+--------------------------------+
|Свыше 80 однокамерные | 15 |
+-------------------------------+--------------------------------+
|Свыше 80 двухкамерные | 30 |
L-------------------------------+---------------------------------
В случае 5 точек - точка 1 располагается в центре камеры, а
точки 2, 3, 4 и 5 располагаются в нижней части камеры по углам.
Точки 2 и 5 находятся перед загрузочной дверью справа и слева
(соответственно), а точки 3 и 4 в глубине камеры у задней стенки
также справа и слева.
В случае 15 точек - точки 1, 2 и 3 располагаются в центре
камеры на трех уровнях (полках) сверху вниз, соответственно, а
точки 4 - 15 по углам также на трех уровнях (точки 4 - 7 - низ;
точки 8 - 11 - середина; точки 12 - 15 - верх). Угловые точки
нумеруются против часовой стрелки, начиная с правого ближнего
угла.
В случае 30 точек - расположение как для 15 точек повторяется
для каждой камеры.
Каждая контрольная точка должна быть расположена на расстоянии
не ближе 5 см от стенок камеры.
Регистрация результатов
По окончании цикла стерилизации ИС (ампулы с химическим
тестовым веществом) извлекают из контрольных точек и сравнивают с
эталоном. Цвет индикатора стерилизации светлее эталона или
нерасплавленный химический тест в пробирке в какой-либо точке
указывают на неэффективную стерилизацию. Результаты контроля
заносят (вклеивают ИС) в журнал по регистрации режимов
стерилизации и заверяют подписью сотрудника, осуществляющего
контроль (Прилож. 4). Один раз в неделю результаты просматриваются
и заверяются ответственным бактериологом.
6.1.2. Термический контроль
Термический контроль проводят 2 раза в месяц. Для контроля
используют поверенный максимальный термометр с ценой деления не
более 1 °C и диапазоном измерений, превышающим контролируемую
температуру. Термометр размещают в середине стерилизационной
камеры. После окончания цикла стерилизации и остывания термометра
до комнатной температуры снимают показания. Для определения
истинного значения максимальной температуры цикла стерилизации к
снятому с термометра показанию прибавляют соответствующую
поправку, указанную в паспорте на данный термометр.
Результаты заносят в журнал по регистрации режимов
стерилизации и заверяют подписями исполнителя и ответственного
бактериолога (Прилож. 4).
6.1.3. Биологический контроль
Биологический контроль осуществляется 2 раза в год. При
выполнении биологического контроля используют биотесты, в т.ч.
коммерческие, предназначенные для конкретного вида паровой или
суховоздушной стерилизации, разрешенные к применению Минздравом
РФ.
Методика контроля
(на примере использования коммерческого
набора Испытательного лабораторного центра Московского
городского центра дезинфекции)
Процедуру контроля осуществляют в соответствии с паспортом
биотеста. Пронумерованные пакеты с биотестами размещают в
контрольных точках стерилизатора. Количество контрольных точек и
правила размещения тестов указаны в п. 6.1.1. После завершения
процесса стерилизации в пробирки с биотестами асептически вносят
0,5 мл цветной питательной среды, начиная со стерильной пробирки
для контроля питательной среды и заканчивая контрольным тестом, не
подвергавшимся стерилизации (контроль культуры). Далее
осуществляют инкубацию пробирок согласно паспорту на набор.
После термостатирования проводят учет изменения цвета
питательной среды. В отрицательном контроле (стерильная пробирка)
цвет среды не должен измениться. В пробирке с контролем культуры
цвет среды должен измениться на цвет, указанный в паспорте, что
свидетельствует о наличии жизнеспособных спор.
Работа парового стерилизатора считается удовлетворительной,
если цвет питательной среды во всех биотестах, подвергавшихся
стерилизации, остался неизменным. Если цвет изменился хотя бы в
одном тесте, стерилизация признается неэффективной.
Результат заносят в журнал по регистрации режимов стерилизации
и заверяют подписью исполнителя (Прилож. 4).
Раздел составлен на основе:
СП 1.2.731-99 "Безопасность работы с микроорганизмами III - IV
групп патогенности и гельминтами";
Методических рекомендаций по контролю стерилизации с
использованием индикаторов стерилизации НПФ "Винар" N 11-8/03-54
от 11.06.93 Министерства здравоохранения Российской Федерации.
6.2. Процедура контроля микробной
обсемененности воздуха
В производственных лабораториях бактериологические
исследования воздуха на обсемененность предусматривают определение
общего содержания микроорганизмов в 1 куб. м воздуха.
Контроль воздуха на микробную обсемененность проводят в
посевных комнатах, боксах или в ламинарных укрытиях перед началом
проведения работ.
Контроль выполняет ответственный исполнитель.
Подготовительный этап
Для контроля используют плотную полноценную неселективную
среду (питательный агар, ГРМ-агар и др.) проверенной ранее серии.
Проверка среды осуществляется, как указано в разделе 11.
Питательный агар разливают в чашки Петри диаметром 90 - 100 мм
слоем не менее 2 мм. Для контроля стерильности среды одну чашку из
приготовленной и разлитой партии среды инкубируют при температуре
37 °C в течение 24 часов. Учитывают наличие (отсутствие) пророста
среды. При обнаружении роста микроорганизмов среду выбраковывают.
Методика контроля
Контроль воздуха на обсеменность проводят седиментационным или
аспирационным методом.
Седиментационный метод
В двух точках посевной комнаты, бокса и (или) ламинарного
шкафа ставят открытые чашки Петри с питательным агаром на 15 мин.
После экспозиции чашки закрывают, переворачивают и помещают в
термостат. Посевы инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C в
течение (24 +/- 2) часов. После инкубации проводят учет количества
выросших колоний микроорганизмов.
Аспирационный метод
Отбор проб воздуха проводят с помощью пробоотборных устройств
для бактериологического анализа, зарегистрированных в Госстандарте
Российской Федерации. Отбор пробы воздуха в количестве 100 л
проводят согласно инструкции к пробоотборнику. После отбора пробы
снимают чашку Петри и термостатируют при температуре (37 +/- 1) °C
в течение (24 +/- 2) часов. После инкубации проводят учет
количества выросших колоний микроорганизмов.
Использование аспирационного метода не допускается для
контроля воздуха укрытий с ламинарным потоком.
Результат заносят в журнал регистрации микробной
обсемененности воздуха и заверяют подписью исполнителя
(Прилож. 5).
Допускается пророст не более 3 колоний на чашке при
исследовании седиментационным методом и не выше 500 КОЕ/куб. м при
использовании аспирационного метода. При превышении указанных
уровней общего содержания микроорганизмов немедленно извещают
руководителя подразделения. Работы в боксах приостанавливают.
Проводят внеплановую генеральную уборку бокса с обработкой всех
поверхностей с использованием дезинфицирующих средств и
обеззараживанием воздуха ультрафиолетовым облучением. После
окончания мероприятий контроль микробной обсемененности воздуха
повторяют. При повторном получении неудовлетворительных
результатов производят оценку эффективности применения
ультрафиолетового бактерицидного излучения для обеззараживания
воздуха, как указано в разделе 6.4.
Лаборатории центров госсанэпиднадзора для контроля микробной
обсемененности воздуха руководствуются соответствующими Приказами
Минздрава (N 720 и др.).
Раздел составлен на основе:
МУК 4.2.734-99 "Микробиологический мониторинг производственной
среды";
Приказа МЗ СССР N 720 от 31.07.78 "Об улучшении медицинской
помощи больным с гнойными хирургическими заболеваниями и усилении
мероприятий по борьбе с внутрибольничной инфекцией".
6.3. Процедура исследования микробной
обсемененности поверхностей
В производственных лабораториях бактериологическое
исследование микробной обсемененности поверхностей помещений и
оборудования проводится с целью проверки эффективности их
дезинфекции и направлено на обнаружение общих и термотолерантных
колиформных бактерий.
Исследование проводят перед работой методом смыва не реже
одного раза в месяц. Смывы проводят с поверхности рабочих столов
на каждом рабочем месте, с дверных ручек, наружных деталей
приборов, со стен бокса.
Подготовительный этап
Для контроля используют:
- пробирки с 5 мл стерильной 1%-ной пептонной воды, в пробки
которых вмонтированы стерильные ватные тампоны на палочках.
Тампоны не должны смачиваться питательной средой;
- среду Эндо проверенной ранее серии (раздел 11).
1%-ную пептонную воду предварительно проверяют на
стерильность. Для этого 2 пробирки от приготовленной партии среды
инкубируют при температуре 37 °C в течение 24 часов. Учитывают
наличие (отсутствие) пророста среды.
В зависимости от применяемого дезинфицирующего агента в
качестве нейтрализатора используют стерильные растворы следующих
химических веществ:
- тиосульфат натрия (0,5%-ный раствор) - при использовании для
дезинфекции хлорсодержащих, перекисных, йодсодержащих препаратов.
Препарат может быть добавлен в 1%-ный раствор пептонной воды;
- сульфонол с молоком (на 1 л раствора используют 200 г
сульфонола, 100 мл обезжиренного молока и 700 мл дистиллированной
воды) - при использовании четвертичных аммониевых соединений;
- мыло банное (0,5%-ный раствор) - при использовании
препаратов на основе анионных поверхностно активных веществ,
гибитана;
- водопроводная вода - при использовании препаратов на основе
фенола, глютарового альдегида;
- аммиак (0,5%-ный раствор) - при использовании формальдегида
или препаратов на его основе.
Методика контроля
Стерильный тампон, вмонтированный в пробку пробирки, погружают
в 1%-ную пептонную воду. Смоченным тампоном тщательно протирают
исследуемую поверхность. При контроле мелких предметов смывы
проводят с поверхности всего предмета. При контроле предметов с
большой поверхностью смывы проводят с площади не менее 100 кв. см.
После взятия смыва тампон помещают на 10 - 15 мин. в пробирку
с раствором нейтрализатора, затем переносят в пробирку с
питательной средой, погрузив тампон в пептонную воду.
Контрольные смывы инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C в
течение 18 - 24 часов.
После инкубации проводят высев из 1%-ной пептонной воды на
среду Эндо.
Посевы на среде Эндо и незасеянную чашку среды этой же партии
(отрицательный контроль) инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C
в течение 18 - 24 часов.
При отсутствии роста на контрольной чашке и наличии роста в
посевах смывов дальнейшее исследование проводят согласно МУК по
санитарно-микробиологическому анализу воды.
Результат заносят в журнал по регистрации микробной
обсемененности поверхностей и заверяют подписью исполнителя.
Обнаружение микроорганизмов в смывах с исследуемых
поверхностей свидетельствует об их неадекватной дезинфекции. В
этом случае извещают руководителя подразделения и выясняют
возможные причины неэффективной дезобработки поверхностей.
Лаборатории центров госсанэпиднадзора для контроля микробной
обсемененности поверхностей руководствуются соответствующими
Приказами Минздрава (N 720 и др.), согласно которым
предусматривается выявление стафилококка, синегнойной палочки,
бактерий группы кишечной палочки и, строго по показаниям,
аэромонад.
Раздел составлен на основе:
МУК 4.2.734-99 "Микробиологический мониторинг производственной
среды";
Руководства Минздрава России Р 3.1.683-98 "Использование
ультрафиолетового излучения для обеззараживания воздуха и
поверхностей в помещениях";
Приказа МЗ СССР N 720 от 31.07.78 "Об улучшении медицинской
помощи больным с гнойными хирургическими заболеваниями и усилении
мероприятий по борьбе с внутрибольничной инфекцией".
6.4. Оценка эффективности ультрафиолетового
бактерицидного излучения
Качество обеззараживания воздуха ультрафиолетовым облучением
зависит от мощности бактерицидного излучения. Мощность
бактерицидного излучения определяется количеством облучателей и
эффективностью их функционирования.
В связи с тем, что количество облучателей определяют при
организации лаборатории согласно требованиям, предъявляемым к
помещениям данного назначения, методика расчета количества
установок для ультрафиолетового облучения в настоящем документе не
рассматривается. Правильность расчета можно проверить по паспорту
на используемый бактерицидный облучатель (УФ-лампы) или согласно
Руководству МЗ РФ Р 3.1.683-98 "Использование ультрафиолетового
излучения для обеззараживания воздуха и поверхностей в
помещениях".
В процессе работы мощность потока бактерицидного излучения
лампы снижается. В связи с этим при выработке 1/3 ресурса (ресурс
лампы указан в паспорте на лампу) время экспозиции необходимо
увеличить в 1,2 раза, а после 2/3 номинального срока службы - в
1,3 раза. При выработке гарантированного срока службы лампа
подлежит замене, даже если она функционирует.
Для обеспечения качественной работы ультрафиолетовых ламп
необходимо:
- фиксировать дату начала эксплуатации, вести учет времени
работы лампы, вносить коррективы времени экспозиции и осуществлять
замену согласно отработанному ресурсу лампы;
- не менее 1 раза в месяц протирать лампы от пыли.
Эффективность ультрафиолетового облучения помещения оценивают
по результатам микробной обсемененности воздуха.
Применение ультрафиолетового бактерицидного излучения для
обеззараживания воздуха считают эффективным, если уровень
микробной обсемененности после облучения не превышает допустимых
пределов - пророст не более 3 колоний на чашке при использовании
седиментационного метода и не выше 500 КОЕ/куб. м при
использовании аспирационного метода
В случаях пророста на чашках более 3 колоний или
обсемененности воздуха > 500 КОЕ/куб. м выполняют внеплановую
генеральную уборку бокса с обработкой всех поверхностей с
использованием дезинфицирующих средств и обеззараживанием воздуха
ультрафиолетовым облучением.
После окончания мероприятий контроль микробной обсемененности
воздуха повторяют.
Если при повторном определении уровень обсемененности воздуха
снова превышает нормативы, определяют бактерицидную эффективность
облучения.
Бактерицидная эффективность является процентным выражением
степени снижения микробной обсемененности воздуха после
ультрафиолетового облучения.
Методика контроля
Для расчета бактерицидной эффективности производят определение
микробной обсемененности воздуха аспирационным методом, как
указано в п. 6.2, до и после облучения. Бактерицидную
эффективность рассчитывают по формуле:
БЭ = ((N - N ) / N ) x 100%,
д п д
где:
БЭ - бактерицидная эффективность облучения в данном помещении;
N - число микроорганизмов до облучения;
д
N - число микроорганизмов после облучения.
п
Применение ультрафиолетового бактерицидного излучения для
обеззараживания воздуха считают эффективным, если бактерицидная
эффективность составляет не менее 99%.
При получении неудовлетворительных результатов контроля ставят
в известность руководителя лаборатории и принимают меры по
выяснению причин недостаточной эффективности обеззараживания.
Если установленная бактерицидная эффективность
|
