|
Стр. 5
же флаконе.
Сыворотка кроличья нормальная - по 2 мл в ампулах ШП-5, НС-1
или НС-3 по ОСТ 64-2-485-85.
Сыворотка бруцеллезная - 2 мл в такой же ампуле.
Выпускаются в комплекте. Комплект состоит из 4-х флаконов с
диагностикумом, 1 флакона с 50%-ной взвесью формалинизированных
эритроцитов барана, 2-х ампул с сывороткой нормальной кроличьей и
1 ампулы с сывороткой бруцеллезной агглютинирующей. Единица
измерения - 1 тыс. комплектов.
Один комплект в пачке (тип II - позиция 8 по РД 42-28-36-90)
или размером 130 х 30 х 75 мм из картона коробочного по ГОСТу
7933-75. В коробку вкладывают инструкцию по применению и нож
ампульный по ТУ 400-6-169-85.
В ящик фанерный (деревянный) (N ... по ГОСТу ...) помещают от
... до ... коробок и упаковочный лист по РД 42-78-36-90. Масса
(брутто) ящика при полной загрузке ... кг".
13.4.11. После окончания текста раздела "Срок годности" на
этой же странице через 4 интервала должны быть расположены подписи
в следующей последовательности:
- директор организации-разработчика фармстатьи;
- основные исполнители от данной организации;
- директор(а) организаций-соисполнителей, принимавших участие
в разработке фармстатьи или препарата;
- основные исполнители от данных организаций;
- директор организации-разработчика препарата (если она не
является разработчиком фармстатьи)<*>;
- основные исполнители от данной организации;
- директор предприятия-изготовителя
экспериментально-производственных или производственных серий
препарата;
- основные исполнители от данной организации (см. п. 13.1.8);
- руководитель Национального органа контроля МИБП - директор и
руководитель лаборатории стандартизации НД ГИСК им. Л.А.Тарасевича
или другой организации, осуществляющей контроль препарата и
экспертизу НТД.
--------------------------------
<*> - Только для новых препаратов.
Далее следуют подписи председателя и главного ученого
секретаря Фармакопейного государственного комитета.
Под каждой подписью лиц, перечисленных выше, должна быть
проставлена дата подписания данным лицом фармстатьи. Подпись
руководителей организации должна быть скреплена печатью
учреждения.
Образец статьи с подписями представлен в приложении 12.
13.5. Порядок присвоения обозначений и регистрации ВФС и ФС
13.5.1. ВФС и ФС после утверждения регистрируют с присвоением
обозначения, которое состоит из указания категории фармакопейной
статьи, регистрационного номера, букв ВС и двух последних цифр
года утверждения или пересмотра, отделяемых от номера знаками
тире. Например: "ВФС 42-14ВС-84", "ФС 42-ВС-86".
13.5.2. Регистрационные номера присваиваются в порядке
последовательной нумерации, раздельной для ВФС и ФС.
13.5.3. На титульном листе, ниже рамки с наименованием
препарата, проставляют код ОКП данного препарата.
13.5.4. Обеспечение фармакопейными статьями предприятий и
организаций, выпускающих и контролирующих данный препарат,
производит ГИСК им. Л.А.Тарасевича в установленном порядке.
13.6. Порядок оформления изменений к фармакопейным статьям
13.6.1. Титульный лист изменения к ВФС или ФС является первым
листом изменения и для утверждения его представляют в виде,
выполненном типографским способом (приложение 13).
13.6.2. Наименование препарата на титульном листе печатают
только на русском языке.
В нижней текстовой части титульного листа должно
располагаться не более 15 строк текста изменения.
13.6.3. В графе "Старая редакция" необходимо указать
наименование раздела, страницу, абзац, исключаемый или заменяемый
текст абзаца.
13.6.4. В графе "Новая редакция", если изменяется текст
абзаца, приводят его новый текст. Если старый текст дополняется,
то указывают: "дополнить" и приводят дополнительный текст, не
повторяя в этой графе текст старой редакции.
При отмене старого текста указывают: "старый текст исключить".
Порядок подписания изменения аналогичен подписанию фармстатей.
13.7. Порядок пересмотра и переутверждения фармакопейных
статей
13.7.1. ФС пересматривают и переутверждают каждые 5 лет.
13.7.2. За год до окончания срока действия определенной ФС
предприятия, выпускающие препарат по соответствующей ФС,
направляют в организацию-разработчик ФС свои предложения для
включения в пересматриваемый документ.
13.7.3. Организация-разработчик ФС должна направить проект
пересматриваемой ФС (5 экз.) в ГИСК им. Л.А.Тарасевича за 6 мес.
до истечения срока ее действия. В пояснительной записке к ФС
должна быть приведена информация о всех изменениях, внесенных
ранее или вносимых в данную редакцию предприятиями, выпускающими
препарат по этой ФС.
13.7.4. Проект пересматриваемой ФС подписывают организации,
первоначально освоившие выпуск препарата и представившие ФС, а
также предприятия, внесшие изменения в пересматриваемую ФС.
13.7.5. После проведения научно-технической экспертизы проект
пересмотренной ФС утверждают в установленном порядке и
перерегистрируют, заменяя в обозначении ФС только год ее
утверждения.
14. Инструкция по применению медицинских
иммунобиологических препаратов
Настоящий документ определяет требования к построению,
содержанию и изложению инструкций по применению профилактических,
лечебных и диагностических медицинских иммунобиологических
препаратов.
14.1. Построение, содержание и изложение инструкций по
применению МИБП, предназначенных для введения человеку
14.1.1. Инструкция должна включать заголовок, вводную часть и
следующие разделы:
- иммунологические (или биологические) свойства;
- назначение;
- способ применения и дозировка;
- реакция на введение;
- противопоказания;
- меры предосторожности (при необходимости);
- предупреждения (при необходимости);
- форма выпуска;
- срок годности. Условия транспортирования и хранения.
Наименование разделов необходимо начинать с абзацного отступа
(через 5 пропущенных знаков), печатать прописными буквами. Текст
раздела следует продолжать на той же строке, как правило, с
прописной буквы без повторения названия раздела.
14.1.2. Заголовок инструкции начинают словами "Инструкция по
применению ...", после чего приводят русское наименование
препарата в родительном падеже в соответствии с текстом
фармакопейной статьи, а затем в скобках латинское наименование
препарата в именительном падеже.
14.1.3. Вводная часть не имеет подзаголовка и начинается с
абзацного отступа непосредственно после заголовка инструкции. Она
должна содержать сведения о составе препарата, способе его
получения и обработки, биологическом и физическом состоянии в
соответствии с основными положениями текста вводной части
фармакопейной статьи (за исключением назначения препарата) и
раздела "Описание", а также другие сведения, отсутствующие в
указанных разделах ФС, но имеющие большое значение для врача или
потребителя препарата, например, возможность наличия следового
количества антибиотиков или гетерологичной сыворотки (некоторые
живые вирусные вакцины) и т.п.
Если препарат имеет общепринятое сокращенное наименование,
последнее приводят в скобках после первого написания полного
наименования. В дальнейшем во всех разделах допустимо употребление
сокращенного наименования.
14.1.4. В разделе "Иммунологические (или биологические)
свойства" кратко описывают свойства препарата, определяющие его
профилактическое или (и) терапевтическое действие: способность
вызывать развитие специфического иммунитета, нейтрализовать токсин
(микроорганизм) антителами, содержащимися в препарате,
специфически лизировать бактерии, оказывать антимикробное
действие за счет антагонистической активности или иных свойств и
т.п. с указанием, при возможности, выраженности и длительности
достигаемого эффекта.
14.1.5. В разделе "Назначение" указывают назначение препарата:
профилактика или (и) лечение соответствующей инфекционной болезни,
вакцинация доноров с целью получения специфического
иммуноглобулина (плазмы); характеристику контингентов лиц, которым
предназначено введение препарата, включая их возраст.
14.1.6. В разделе "Способ применения и дозировка" указывают:
14.1.6.1. Схему применения и дозировку. Для препаратов,
применяемых для профилактики инфекционных болезней, указывают
возрастные дозы, кратность введения, интервалы между введениями
при вакцинации и ревакцинации, количество последних. Для вакцин,
входящих в календарь плановых прививок, указывают возраст, в
котором проводят вакцинацию и ревакцинацию, возможность проведения
прививки одновременно с введением вакцины, предназначенной для
профилактики другой инфекционной болезни (если таковая
допускается).
Для препаратов, предназначенных для лечения инфекционных
болезней, указывают возрастные разовые дозы, кратность введения в
течение суток, продолжительность лечения, возможнось проведения
повторного курса лечения, допустимость применения других
лекарственных средств.
14.1.6.2. Способ введения (внутримышечный, подкожный,
пероральный и др.) и технику введения (шприц, скарификация и др.);
место введения препарата; обработку места аппликации до и после
инъекции в том случае, если она отличается от общепринятой ; при
необходимости указывают требования к температуре вводимого
препарата и скорости его введения. Если допускается разная техника
парентерального введения и при этом используют разные дозы или
формы выпуска препарата, должны быть приведены соответствующие
указания. Для препаратов, вводимых перорально, указывают на связь
с приемом пищи, необходимость проглатывания или разжевывания
таблеток и т.п. Соответствующие необходимые сведения должны быть
приведены и для других способов введения.
14.1.6.3. Необходимые мероприятия, предшествующие введению
препарата: осмотр содержимого ампул, флаконов и т.п., разведение
сухого препарата (растворитель, его объем, условия растворения,
максимально допустимое время хранения последнего), физические
свойства растворенного препарата; указывают, в каких случаях
препарат не подлежит применению. Например: "не пригоден к
применению препарат в ампулах (флаконах) с нарушенной целостью,
маркировкой, а также при изменении его физических свойств (цвета,
прозрачности и др.), при истекшем сроке годности, при неправильном
хранении". Описывают условия и допустимые сроки хранения после
растворения или вскрытия ампулы с жидким препаратом; необходимость
встряхивания ампулы перед набором препарата в шприц; необходимость
постановки внутрикожной пробы перед введением гетерологических
сывороток и т.п.
При необходимости раздел завершают фразами: "Вскрытие ампул
(флаконов) и процедуру введения препарата осуществляют при строгом
соблюдении правил асептики и антисептики.
Проведенную прививку регистрируют в установленных учетных
формах с указанием наименования препарата, даты прививки, дозы,
института-изготовителя препарата, номера серии, реакции на
прививку".
Если препарат предназначен для профилактики и для лечения и
при этом имеются отличия в способе введения или схеме применения,
эти сведения следует изложить в подразделах: "применение с целью
профилактики"; "применение с целью лечения".
14.1.7. Раздел "Реакция на введение" включает:
- характеристику общих, в том числе температурных, и местных
реакций, которые могут или должны развиваться после введения
препарата, время их появления и продолжительность;
- допустимую частоту развития общих (температурных) и местных
реакций определенной степени выраженности;
- возможность развития поствакцинальных осложнений, их
клинические формы; в случае, если после введения препарата
возможно развитие анафилактического шока, указывают: "Учитывая
возможность развития анафилактического шока у отдельных
высокочувствительных лиц, вакцинированный должен находиться под
медицинским наблюдением не менее 30 мин. Места проведения прививок
должны быть обеспечены средствами противошоковой терапии".
Если перед массовыми прививками предусмотрено определение
реактогенности серий на ограниченных группах лиц, подлежащих
прививкам, указывают количество и возраст прививаемых, срок их
обследования после прививки, учитываемые показатели, допустимые
показатели реактогенности.
В случае, если реакция на введение препарата отсутствует,
текст раздела излагают: "Реакция на введение отсутствует".
14.1.8. В разделе "Противопоказания" перечисляют
противопоказания к введению препарата. Названия болезней приводят
в соответствие с действующей классификацией. После каждой
нозологической формы должно быть указано, через какой срок после
выздоровления допустима прививка.
Если применение препарата ограничено какими-либо
противопоказаниями, раздел должен быть закончен фразой: "С целью
выявления противопоказаний врач (фельдшер) в день прививки
проводит опрос и осмотр прививаемого с обязательной термометрией.
В случае необходимости проводят соответствующее лабораторное
обследование". (Указание на обязательность термометрии приводят в
случае, если повышение температуры тела до 37° С и выше является
противопоказанием в введению препарата).
Если препарат не имеет противопоказаний к применению, текст
раздела излагают: "Противопоказания не установлены".
14.1.9. В разделе "Меры предосторожности" приводят
соответствующий текст, связанный с процедурой введения препарата.
Например, в инструкции по применению вакцины БЦЖ он может быть:
"Следует категорически избегать подкожного введения вакцины,
поскольку при этом могут развиваться патологические реакции".
14.1.10. В разделе "Предупреждение" приводят рекомендации,
цель которых - предотвращение развития неполноценного иммунитета и
необычных реакций, обусловленных индивидуальными особенностями
привитых. Например, в инструкции по применению вакцин может быть
указано: "Прививки ... вакциной проводят не ранее чем через 1 мес.
после прививок против других инфекций"; для живых вирусных вакцин
этот текст следует дополнить: "Лиц, получивших препараты
иммуноглобулина человека или переливание крови, прививают не ранее
чем через 3 мес.; введение указанных препаратов проводят не ранее
чем через 2 недели после прививки, в противном случае вакцинацию
следует повторить". Для ряда препаратов в этот раздел могут быть
внесены такие рекомендации, как: "Детей с судорогами в анамнезе
следует прививать на фоне применения противосудорожных
препаратов".
14.1.11. В разделе "Форма выпуска" в соответствии с
фармстатьей указывают, в какой потребительской и групповой таре
(ампула, флакон и т.п.) выпускают препарат, все виды фасовки
препарата; количество доз в потребительской таре; наличие в
комплекте растворителя, разведенной сыворотки и т.п.
14.1.12. В разделе "Срок годности. Условия хранения и
транспортирования" в соответствии с требованиями фармстатьи
указывают срок годности препарата, а также требования к условиям
его хранения и транспортирования, обеспечивающие сохранность
качества и товарного вида препарата в течение срока годности.
14.1.13. Порядок изложения материала в разделах при
необходимости может быть изменен; в содержание разделов могут быть
внесены дополнительные сведения.
В конце инструкции указывают, что рекламации на физические и
другие свойства препарата направляют в Государственный
научно-исследовательский институт стандартизации и контроля
медицинских биологических препаратов им. Л.А.Тарасевича (121002,
г. Москва, Сивцев Вражек, д. 41, телефон и факс (095) 241-39-22) и
в адрес предприятия, изготовившего препарат, а также о том, что в
случаях повышенной реактогенности или развития поствакцинальных
осложнений следует сообщить по телеграфу или телефону с
последующим представлением медицинской документации в ГИСК им.
Л.А.Тарасевича.
14.2. Построение, содержание и изложение инструкций по
применению МИБП, предназначенных для лабораторной диагностики
14.2.1. Инструкция должна включать заголовок, вводную часть и
следующие разделы:
- назначение;
- способ применения;
- учет результатов;
- форма выпуска;
- срок годности. Условия хранения и транспортирования.
Наименование разделов записывают в виде заголовка (симметрично
тексту) прописными буквами.
14.2.2. Заголовок инструкции начинают словами "Инструкция по
применению ...", после чего приводят русское наименование
препарата в родительном падеже в соответствии с текстом
фармакопейной статьи, а затем в скобках наименование на английском
языке в именительном падеже.
14.2.3. Вводная часть не имеет подзаголовка и начинается с
абзацного отступа непосредственно после заголовка инструкции. Она
должна содержать сведения о составе препарата, как отдельного
наименования, так и всех входящих в набор компонентов (для
питательных сред - содержание каждого компонента в г/л среды), о
минимальной определяемости концентрации исследуемого вещества и
содержании влияющих сопутствующих факторов, а также сведения о
биологическом и физическом состоянии в соответствии с основными
положениями текста вводной части фармакопейной статьи (за
исключением назначения препарата) и раздел "Описание".
14.2.4. В разделе "Назначение" перечисляют все области
применения препарата и описывают характер его специфического
действия.
14.2.5. В разделе "Способ применения" описывают:
- вид, объем материала исследования, условия и длительность
его хранения, обработку, подготовку к анализу, меры безопасности
при работе с исследуемым материалом;
- методику (методики) применения препарата (реакцию, для
которой он предназначен, растворители, ингредиенты для контроля;
для питательных сред - методику их приготовления);
- условия и сроки хранения после растворения (для сухих
препаратов) или после вскрытия ампулы, флакона и пр. с жидкими
препаратами;
- количество препарата, расходуемого на 100 исследований.
14.2.6. Раздел "Учет результатов" включает: определение
времени и интенсивности реакций; учет роста микробов; систему
оценки результатов (применение качественных или количественных
методов оценки); диагностическую значимость (чувствительность,
специфичность) препаратов; необходимость параллельных исследований
в динамике заболевания (парные пробы).
14.2.7. В разделе "Форма выпуска" в соответствии с фармстатьей
указывают, в какой потребительской и групповой таре выпускают
препарат, все виды фасовки, наличие дополнительных ингредиентов,
необходимых для работы с препаратом (растворитель, контрольные
ингредиенты, сыворотки, антигены, эритроциты и т.п.); принцип
комплектации (одноименные препараты, набор разноименных и пр.).
14.2.8. В разделе "Срок годности. Условия хранения и
транспортирования" указывают срок годности препарата, а также
требования к условиям хранения и транспортирования препарата,
обеспечивающие сохранность его качества и товарного вида в течение
срока годности.
14.2.9. Порядок изложения материала в разделах представлен в
виде схемы; в содержание разделов могут быть внесены изменения и
дополнительные сведения.
В конце инструкции указывают, что рекламации на специфические
и физические свойства препарата направляют в Государственный
научно-исследовательский институт стандартизации и контроля
медицинских биологических препаратов им. Л.А.Тарасевича (121002,
г. Москва, Сивцев Вражек, д. 41, телефон и факс (095) 241-39-22) и
в адрес предприятия, изготовившего препарат.
Приложение 1
1. Методы определения токсичности
1.1. Метод определения острой токсичности
Животные: мыши массой не более 20 г; крысы массой от 140 до
160 г; морские свинки массой от 250 до 350 г; кролики массой от
2,0 до 2,5 кг, животные других видов. Формирование групп животных,
получающих разные дозы испытуемого препарата и препарата
сравнения, проводят методом случайной выборки (единица выборки -
животное).
При внутривенной инъекции объем вводимого препарата на 1 кг
массы животного не должен превышать: для мышей - 25 мл, для крыс и
морских свиней - 15 мл, для кроликов - 10 мл. Максимальные объемы
должны вводиться мышам в течение 5 сек, крысам и морским свинкам -
в течение 10 сек, кроликам - в течение 20 сек.
За животными наблюдают не менее 7 сут. после введения
препарата.
Величину ЛД50 рассчитывают по результатам наблюдений через 30
мин, 24 ч и через 7 сут. и выражают в массовых, объемных или
других единицах на 1 кг массы животного.
Материал для проведения гистологического исследования забирают
от животных, которым испытуемый препарат был введен внутривенно, а
также методом, предлагаемым для практики, в максимально
переносимой дозе (МПД), не вызывающей гибели животных. Допускается
проведение гистологического исследования органов одного вида
животных, оказавшегося более чувствительным к токсическому
воздействию препарата, и использование одной серии препарата, ЛД50
которой была наименьшей. Взятие материала осуществляют через 24 ч,
4 сут. и 7 сут. не менее чем от 5 животных на каждый срок, а также
от всех животных, павших в течение наблюдения (см. п. 5.2.4.).
1.2. Метод определения хронической токсичности
Животные: см. "Определение острой токсичности".
Препарат вводят не менее, чем 20 животным один раз в сутки в
оптимальной иммунизирующей (эффективной) дозе для данного вида
животного или в дозе, эквивалентной предлагаемой для человека, при
пересчете на 1 кг массы или площадь поверхности тела. Если
препарат в течение 1 мес. предполагается применять человеку от 1
до 3-х раз, количество однократных ежедневных инъекций должно быть
не менее 10, а более 3-х - не менее 20; перерыв в курсе введения
не допускается.
Наблюдение за животными проводят в течение периода введения
препарата и последующих 7 сут. При этом ежедневно регистрируют
массу животных, а также возможные клинические симптомы
интоксикации. Не менее 5 животных забивают на следующие сутки
после последнего введения препарата и не менее 5 в день окончания
наблюдения, и их органы подвергают гистологическому исследованию
(см. п. 2.4.).
Гистологическому исследованию подвергают также органы всех
животных, павших в течение периода наблюдения.
1.3. Метод определения влияния на детоксицирующую
функцию печени
Испытание проводят на беспородных белых мышах массой 18-20 г.
Необходимо учитывать, что в условиях одного опыта колебания массы
животных не должны превышать 1 г, в противном случае могут быть
получены некорректные результаты.
Испытуемый препарат и препарат сравнения вводят внутрибрюшинно
в дозе, которую предполагают использовать (используют) человеку;
препараты, предназначенные для энтерального введения, вводят через
рот.
Количество животных в каждой группе должно быть не менее 25.
Раствор гексенала на дистиллированной воде вводят внутрибрюшинно
в объеме 0,5 мл из расчета 80-90 мг/кг массы животного (в
зависимости от чувствительности животных, сезона и т.п.) через
48-72 ч после введения препарата.
Перед началом исследования рекомендуется оттитровать рабочую
дозу гексенала, которая должна вызвать у интактных мышей наркоз
продолжительностью от 30 до 40 мин. Необходимо учитывать, что
животные должны находиться на полноценном пищевом режиме, т.к.
голодание может увеличить продолжительность наркоза. Поскольку во
время наркоза температура тела животных снижается, температура в
помещении должна быть не менее 20° С.
Время введения гексенала каждому животному регистрируют с
помощью секундомера. Для удобства работы можно вводить препарат
небольшим группам (до 5) животных, фиксируя по секундомеру время
введения препарата каждой группе.
Заснувших мышей раскладывают на столе на боку. Регистрируют
время пробуждения каждого животного (проснувшимися считают мышей,
вышедших из бокового положения) и определяют продолжительность
наркоза. За продолжительность наркоза условно принимают время от
момента введения гексенала до момента пробуждения.
Длительность гексеналового наркоза для группы животных
(контрольной, получившей испытуемый препарат, препарат сравнения)
рассчитывают с помощью средней арифметической или медианы. Расчет
медианы имеет определенные преимущества, если в группах имеются
длительно непросыпающиеся животные.
1.4. Метод определения токсичности препаратов
бактериофага
Данные исследования проводят на белых мышах массой 18-20 г, в
каждой группе - не менее 20. Необходимость проведения
гистологических исследований зависит от биологических свойств
бактерий, их способности к образованию эндотоксинов.
Определение острой токсичности предполагает однократное
внутрибрюшинное введение фага в дозе, многократно превышающей
максимальную разовую для человека в пересчете на единицу массы
тела (100-200 раз). Животные не должны терять в весе, должны
отсутствовать признаки заболевания и в месте введения препарата -
инфильтраты. При исследовании периферической крови опытных
животных после введения бактериофага не должны обнаруживаться
значительные изменения в содержании лейкоцитов по сравнению с
контрольной группой.
Определение хронической токсичности предполагает ежедневное
внутрибрюшинное введение фага в течение 20 дней в дозе,
эквивалентной максимальной разовой дозе для человека в пересчете
на единицу массы тела.
Наблюдения за животными проводят в течение всего периода
введения и последующих 7 сут. с ежедневной регистрацией массы тела
животных, а также возможных клинических проявлений интоксикации.
Определение местного действия бактериофага осуществляется в
случае использования препаратов внутримышечно в дозе, предлагаемой
для применения. Оценку проводят на основании данных осмотра на
протяжении всего срока введения препарата и последующих 7 сут.
1.5. Метод определения токсичности аллергенов
Данное исследование осуществляется на двух видах животных:
белых мышах - по 0,5 мл внутрибрюшинно, морских свинках - по 1 мл
подкожно. В тех случаях, когда аллергены предназначаются для
специфической иммунотерапии, что сопряжено с многократным их
введением, оценку токсичности проводят с равным количеством
подкожных инъекций морским свинкам (или кроликам) в дозах,
рекомендуемых для практического применения.
2. Метод определения влияния МИБП на центральную
нервную систему
При проведении настоящего испытания формируют две группы
животных: получающих испытуемый препарат и соответствующий объем
дистиллированной воды (контрольная группа).
Требования к дозе испытуемого препарата, пути его введения,
экспериментальным животным и их количеству, методам статистической
обработки те же, что и при постановке гексеналовой пробы.
Тиосемикарбазид (ТСК) или коразол вводят через 24-48 ч и 14
сут. после вакцинации. При постановке судорожных проб следует
учитывать, что шум в помещении, резкие движения оператора и
животных могут спровоцировать возникновение судорог. В связи с
этим, после введения ТСК (коразола) животных следует
содержать изолированно, помещая в прозрачные пластмассовые клетки,
разделенные на мелкие отделения, или в стеклянные банки.
Введение коразола или ТСК интактным животным вызывает развитие
судорог различного характера: клонические, тонические,
клонико-тонические. Регистрируют время введения судорожного агента
каждому животному, время развития каждого судорожного приступа,
характер судорог, время гибели. Зная время введения вещества,
вызывающего судороги, и наступления гибели мыши, определяют
длительность жизни каждого животного.
2.1. Проба с ТСК
Раствор ТСК на дистиллированной воде вводят внутрибрюшинно в
объеме 0,2 мл. Перед началом исследования определяют дозу
препарата, которая должна вызвать у интактных мышей развитие
судорожных приступов и последующую гибель почти всех животных
(ЛД95). При этом первый судорожный приступ должен развиться через
(40+-5 мин), а гибель основного числа животных должна наступить
через 70-90 мин. Как правило, эта доза находится в пределах от 18
до 25 мг/кг массы.
Регистрацию времени введения ТСК каждому животному, времени
развития судорог и гибели осуществляют с помощью секундомера. За
животными наблюдают в течение 3 ч.
Определяют среднюю длительность жизни мышей опытной и
контрольной групп и достоверность различий между показателями.
2.2. Коразоловая проба
Раствор коразола на дистиллированной воде вводят подкожно в
объеме 0,2 мл. Перед началом исследования определяют дозу
препарата, которая должна вызывать у интактных мышей развитие
судорог и последующую гибель почти всех животных. Как правило, эта
доза находится в пределах от 90 до 100 мг/кг массы.
В отличие от пробы с ТСК при использовании коразола приступы
судорог развиваются уже в первые минуты после введения препарата,
а гибель основного числа животных наступает в течение 30 мин.
Регистрацию времени введения коразола, развития судорог и
гибели жевотных проводят так же, как после введения ТСК.
За животными наблюдают в течение 60 мин. Определяют среднюю
длительность жизни мышей опытной и контрольной групп и
достоверность различий между показателями.
3. Методики перорального введения МИБП
3.1. Методика орального введения белым мышам, морским
свинкам, кроликам и обезьянам орального
таблетированного МИБП
Принцип метода состоит в обеспечении контакта МИБП со
слизистой ротовой полости в течение 2-3 мин.
Нарезают губку или другой пористый материал кусочками объемом:
для белых мышей - 0,3-0,5 см (в кубе), морских свинок и кроликов -
0,5-1,0 см (в кубе), обезьян - 1-2 см (в кубе).
Таблетку измельчают и растворяют в таком количестве
дистиллированной воды, чтобы 1 доза препарата для белой мыши или
морской свинки содержалась в 0,5 мл, а для кролика - в 1 мл
суспензии. Полученную суспензию сорбируют губкой, фиксированной в
кровоостанавливающем зажиме. Мышей и морских свинок фиксируют в
руке. Кроликов помещают в ящик для иммобилизации. Обезьян
фиксируют за шею руками. Затем вводят губку в ротовую полость
животного и удерживают ее в течение 2-3 мин. Все манипуляции
выполняют острожно, чтобы не повредить слизистую ротовой полости.
3.2. Методика энтерального введения кроликам и обезьянам
жидкой формы МИБП
Принцип метода состоит во введении жидкого препарата на
неповрежденную слизистую с помощью трубки, проведенной через
верхние отделы желудочно-кишечного тракта в двенадцатиперстную
кишку.
У кроликов и обезьян натощак удаляют волосяной покров на
участке, расположенном ниже мечевидного отростка по срединной
линии живота, размером 5 х 15 см. У обезьян эту процедуру проводят
после достижения полного наркоза.
Кроликов фиксируют на операционной доске животом вверх и
наркотизируют до исчезновения болевой чувствительности. Обезьян
фиксируют на операционной доске после проведения наркоза.
Подготовленное операционное поле обрабатывают 3%-ным спиртовым
раствором йода и ограничивают его стерильными салфетками с помощью
корнцангов. После проведения верхнесрединной лапаротомии через
разрез извлекают из брюшной полости желудок с прилежащим участком
двенадцатиперстной кишки. Затем через рот, пищевод и желудок
вводят в двенадцатиперстную кишку на глубину 2-4 см газоотводную
трубку, которую фиксируют пальцами в области перехода из желудка в
кишечник. Все манипуляции выполняют через стенку желудка. После
этого другой лаборант через трубку при помощи шприца вводит 1-2 мл
жидкой вакцины с последующим промыванием трубки физиологическим
раствором объемом 20-30 мл. Желудок и кишечник помещают в брюшную
полость и вводят в нее 2 мл раствора антибиотиков (100-200 тыс.
ед/мл). Операционную рану послойно зашивают. Все манипуляции
выполняют с помощью стерильных инструментов и материалов с
соблюдением правил асептики и антисептики.
Первое кормления животных допускается на следующий день после
операции. Продолжительность наблюдения за животными - до 30 сут.
(в зависимости от цели исследования). Отход животных во время
операции и в период наблюдения составляет не более 5% и обусловлен
оперативным вмешательством.
3.3. Методика энтерального введения кроликам и обезьянам
энтерального таблетированного МИБП
Принцип метода состоит в пероральном введении энтерального
таблетированного препарата в желудок с помощью эзофагатора и
принудительной эвакуации его из желудка в кишечник.
Подготовку животных проводят так же, как при энтеральном
введении жидкой формы МИБП.
Кроликов помещают в ящик для иммобилизации и с помощью
эзофагатора проталкивают энтеральный таблетированный препарат в
глотку, исключая повреждение защитной кишечно-растворимой оболочки
во рту.
С обезьянами эту манипуляцию выполняют 2 сотрудника. Один
фиксирует животное за шею. Второй с помощью эзофагатора вводит
через рот в глотку энтеральную трубку, исключая повреждение зубами
животного защитной кишечно-растворимой оболочки.
Энтеральный таблетированный препарат вводят с таким расчетом,
чтобы срок пребывания таблетки в желудке не превышал 2 ч. При
раздражении слизистой глотки таблеткой срабатывает безусловный
глоточный рефлекс, и животное глотает таблетку, которая при этом
попадает в желудок.
Животных наркотизируют, привязывают к операционной доске,
обрабатывают операционное поле 3%-ным спиртовым раствором йода и
ограничивают его стерильными салфетками с помощью корнцангов.
После проведения верхнесрединной лапаротомии через разрез
извлекают из брюшной полости желудок с прилегающим участком
кишечника и, нащупав таблетку в желудке, проталкивают ее в
кишечник. Желудок и кишечник погружают в брюшную полость и вводят
в нее 2 мл раствора антибиотиков (100-200 тыс. ед/мл).
Операционную рану послойно зашивают. Все манипуляции выполняют с
помощью стерильных инструментов и материалов с соблюдением правил
асептики и антисептики.
Первое кормление животного допускается на следующий день после
операции. Продолжительность наблюдения за животными - до 30 сут.
(в зависимости от цели исследования). Отход животных во время
операции и в период наблюдения составляет не более 5% и обусловлен
оперативным вмешательством.
Возможности использования различных лабораторных животных для
перорального введения суммированы в таблице.
Таблица
Возможность использования различных лабораторных животных для
перорального введения
----------------------------T-----T-----T-------T-------T--------¬
¦ Методика введения ¦Белые¦Белые¦Морские¦Кролики¦Обезьяны¦
¦ ¦мыши ¦крысы¦свинки ¦ ¦ ¦
+---------------------------+-----+-----+-------+-------+--------+
¦1. Оральное введение губкой¦ + ¦ + ¦ + ¦ + ¦ + ¦
¦препарата в жидком виде ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+---------------------------+-----+-----+-------+-------+--------+
¦2. Пероральное (энтераль-¦ + ¦ + ¦ + ¦ +- ¦ ++ ¦
¦ное) введение препарата,¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦устойчивого к кислой среде¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦желудка ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+---------------------------+-----+-----+-------+-------+--------+
¦3. Пероральное введение:¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦таблетки с защитным энтеро-¦ - ¦ - ¦ - ¦ - ¦ ++ ¦
¦солюбильным покрытием (диа-¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦метром 4-9 мм) ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦экспериментальных форм¦ - ¦ + ¦ + ¦ + ¦ ++ ¦
¦(таблетки диаметром 2-3 мм,¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦гранулы) с энтеросолюбиль-¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ным защитным покрытием ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+---------------------------+-----+-----+-------+-------+--------+
¦4. Оперативное введение в¦ - ¦ - ¦ +- ¦ + ¦ + ¦
¦тонкую кишку (введение зон-¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦да) ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+---------------------------+-----+-----+-------+-------+--------+
¦Примечания. Степень пригодности для оценки свойств МИБП: ¦
¦++ наиболее полная ¦
¦+ достаточная ¦
¦+- сомнительная ¦
¦- непригодна или невозможна. ¦
L-----------------------------------------------------------------
4. Патоморфологическое исследование
Животных усыпляют эфирным наркозом. При вскрытии и осмотре
внутренних органов отмечают состояние серозных покровов и
содержимое полостей. Определяют, сравнивая с контрольной группой
животных, массу, цвет, степень кровонаполнения органов, наличие
гемодинамических нарушений. Вырезают кусочки из внутренних органов
подопытных и контрольных животных (головного и спинного мозга,
легких, печени, почек, надпочечников, желудка, тонкого и толстого
кишечника, поджелудочной железы, тимуса, эпифиза, щитовидной
железы, селезенки, лимфатических узлов разной локализации).
Спинной мозг извлекают из позвоночника после фиксации.
Фиксацию материала проводят в 10-12%-ном растворе формалина с
последующей промывкой, проводкой через спирты и заливкой в
парафин. При резке на каждое стекло помещают не менее 2-х срезов,
которые окрашивают гематоксилин-эозином. Для уточнения характера
выявленных изменений могут быть использованы гистохимические и
другие морфологические методы исследования (окраска на фибрин,
липиды, мукополисахариды и т.д.).
При изучении препаратов обращают внимание на наличие изменений
в системе микроциркуляции: признаки перераспределения крови с
депонированием ее в паренхиматозных органах; явления стаза и
плазмостаза; агрегацию эритроцитов в капиллярах и
тромбообразование; повышение проницаемости стенок сосудов с
развитием геморрагий, плазморрагии, мукоидной, фибриноидной
дезорганизации, фибриноидного некроза.
Кроме микроциркуляторных нарушений выявляют также наличие
дистрофических и воспалительных изменений во внутренних органах.
При изучении легких отмечают состояние бронхиальной системы
(бронхоспазм, отек стенок, десквамация слизистой оболочки, наличие
кровоизлияний и воспалительной реакции), обращают внимание на
признаки эмфиземы, циркуляторных и воспалительных изменений. В
сердце изучают межуточную ткань миокарда (отек стромы, мукоидное
набухание, воспалительная инфильтрация, продуктивная реакция),
саркоплазму (дискоидный распад миофибрилл, миоцитолиз), эндокард,
перикард (отек, клеточная реакция). В печени и почках определяют
вид и выраженность дистрофических и воспалительных изменений.
Описывают характер изменений в тимусе, селезенке, лимфатических
узлах разной локализации, костном мозге. В ЦНС исследуют состояние
микроциркуляторного русла, а также нейронов в коре, подкорковых
образованиях, гипоталамусе, стволе и спинном мозге.
Приложение 2
ИНДИВИДУАЛЬНАЯ КАРТА ПРИВИТОГО
Ф.И.О. N серии Возраст Способ введения (при необходимости).
Наименование препарата Прививочная доза Прочие данные (при необходимости).
Дата 1-й прививки Дата 2-й прививки Проведение лабораторно-инструменталь-
ного обследования (да, нет)
--------------------------------T---------T----------------------T---------T----------------------¬
¦ Учитываемые показатели ¦Перед 1-й¦Дни после 1-й прививки¦Перед 2-й¦Дни после 2-й прививки¦
¦ ¦прививкой¦1 2 3 4 5 ... ¦прививкой¦1 2 3 4 5 ... ¦
¦ ¦ ¦1 ч 6 ч ¦ ¦1 ч 6 ч ¦
+-------------------------------+---------+----------------------+---------+----------------------+
¦ Температура в ° С ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+-------------------------------+---------+----------------------+---------+----------------------+
¦ Частота пульса ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+-------------------------------+---------+----------------------+---------+----------------------+
¦ АД ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+-------------------------------+---------+----------------------+---------+----------------------+
¦ Недомогание ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+-------------------------------+---------+----------------------+---------+----------------------+
¦ Головная боль ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+-------------------------------+---------+----------------------+---------+----------------------+
¦ Нарушение сна ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+-------------------------------+---------+----------------------+---------+----------------------+
¦ Нарушение аппетита ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+-------------------------------+---------+----------------------+---------+----------------------+
¦ Тошнота ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+-------------------------------+---------+----------------------+---------+----------------------+
¦ Рвота ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+-------------------------------+---------+----------------------+---------+----------------------+
¦ Боли в животе ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+-------------------------------+---------+----------------------+---------+----------------------+
¦ Расстройство стула ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+-------------------------------+---------+----------------------+---------+----------------------+
¦ Болезненность в области печени¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+-------------------------------+---------+----------------------+---------+----------------------+
¦ Увеличение печени ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+-------------------------------+---------+----------------------+---------+----------------------+
¦ Увеличение отдаленных л/узлов ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+-------------------------------+---------+----------------------+---------+----------------------+
¦ Сыпь ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+-------------------------------+---------+----------------------+---------+----------------------+
¦ Геморрагии ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+-------------------------------+---------+----------------------+---------+----------------------+
¦ Инъекция конъюнктив ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+-------------------------------+---------+----------------------+---------+----------------------+
¦ Иктеричность склер ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+-------------------------------+---------+----------------------+---------+----------------------+
¦ Вегетативные стигмы кожи: ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ покраснение ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ побледнение ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ потливость ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+-------------------------------+---------+----------------------+---------+----------------------+
|
