Законы России
 
Навигация
Популярное в сети
Курсы валют
06.06.2015
USD
56.25
EUR
63.32
CNY
9.07
JPY
0.45
GBP
86.21
TRY
21.05
PLN
15.21
 

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФОРМАЛЬДЕГИДА В МОЧЕ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ. МУК 4.1.769-99 (УТВ. ГЛАВНЫМ ГОСУДАРСТВЕННЫМ САНИТАРНЫМ ВРАЧОМ РФ 06.07.1999)

Текст документа с изменениями и дополнениями по состоянию на ноябрь 2007 года

Обновление

Правовой навигатор на www.LawRussia.ru

<<<< >>>>


                                                             Утверждаю
                                               Главный государственный
                                                       санитарный врач
                                                  Российской Федерации
                                                          Г.Г.ОНИЩЕНКО
                                                      6 июля 1999 года
   
                                                       Дата введения -
                                                  6 сентября 1999 года
   
                4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
   
             КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФОРМАЛЬДЕГИДА В МОЧЕ
           МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
   
                          МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
                             МУК 4.1.769-99
   
       1.  Разработаны  под  редакцией  академика  РАЕН, д.м.н., проф.
   Зайцевой  Н.В.,  к.б.н.  Улановой  Т.С.,  к.б.н. Нурисламовой Т.В.,
   Карнажицкой  Т.Д.,  Суетиной Г.Н., Поповой Н.В., Митрофановой В.М.,
   Плаховой Л.В., Рудаковой Е.А. (ПНИКИ детской экопатологии).
       2.   Утверждены   Главным   государственным  санитарным  врачом
   Российской Федерации 6 июля 1999 г.
   
       Методические    указания    разработаны    в   соответствии   с
   требованиями  ГОСТа 8.563-96 "Методики выполнения измерений", ГОСТа
   Р  1.5-92  "Общие  требования к построению, изложению, оформлению и
   содержанию    стандартов".    Методика    анализа   аттестована   и
   обеспечивает  определение  формальдегида  в  диапазоне концентраций
   0,001 - 2,0 мкг/куб. см.
   
       НСНО                                        Мол. масса - 30,03
   
       Формальдегид  (муравьиный  альдегид,  метаналь) - газ с резким
   запахом.  35  -  40%-ный  водный  раствор формальдегида называется
   формалином    или   формолем.   Растворы   выделяют   газообразный
   формальдегид  при  комнатной  температуре.  Т    - минус  19,3 -С,
                                                кип
   Т      - минус 118,3 -С.   Формальдегид   растворим   в   воде   и
    плавл
   органических  растворителях  (бензол,   толуол,   ацетон,  этанол,
   этилацетат и др.).  Формальдегид  - раздражающий   газ,   вызывает
   дегенеративные процессы в паренхиматозных органах, сенсибилизирует
   кожу, действует на ЦНС. Относится ко 2 классу опасности.
       Методика   обеспечивает   выполнение   измерений   с  суммарной
   погрешностью   результата   измерений   20,0%   при   доверительной
   вероятности 0,95.
   
                             СУЩНОСТЬ МЕТОДА
   
       Методика  основана  на предварительном переводе формальдегида в
   2,4-динитрофенилгидразон  формальдегида,  концентрировании продукта
   дериватизации  из  биологического  материала  экстракцией гексаном,
   упаривании  гексанового экстракта, растворении упаренного остатка в
   ацетонитриле и анализе на жидкостном хроматографе.
       Измерение    концентрации   формальдегида   выполняют   методом
   высокоэффективной   жидкостной   хроматографии   с   использованием
   УФ-детектора.
       Нижний предел измерения в объеме пробы - 0,05 мкг.
       Определению  не  мешают  метанол,  этанол,  уксусный  альдегид,
   ацетон, муравьиная кислота и другие карбонильные соединения.
       Длительность анализа, включая подготовку пробы, - 40 мин.
   
        СРЕДСТВА ИЗМЕРЕНИЙ, ВСПОМОГАТЕЛЬНЫЕ УСТРОЙСТВА, РЕАКТИВЫ
   
       При  выполнении анализа применяют следующие средства измерений,
   вспомогательные устройства, материалы и реактивы.
   
                           Средства измерений
   
   Жидкостный хроматограф с насосом высокого
   давления (ЧССР) и ультрафиолетовым
   детектором LCD 2563 (ЧССР)
   Весы лабораторные ВЛР-200 аналитические          ТУ 25-06113-79
   Разновесы Г -210                                 ГОСТ 73208-82
              2
   Термометр лабораторный шкальный ТЛ-2,            ТУ 25-2021-003-88
   пределы 0 - 100 -С, цена деления 1 -С
   Секундомер "Агат"                                ГОСТ 5072-792.2
   Микрошприцы МШ-10                                ТУ 5Е2.833.106
   Лупа измерительная                               ГОСТ 25706-83
   Линейка металлическая измерительная,             ГОСТ 17435-72
   цена деления 1 мм
   Цилиндр мерный вместимостью 50 куб. см           ГОСТ 1770-74
   Пипетки градуированные                           ГОСТ 20292-74
   вместимостью 1, 5 и 10 куб. см
   Пробирки центрифужные мерные
   вместимостью 10 куб. см
   Колбы мерные вместимостью 50, 100 куб. см        ГОСТ 1770-74
   Стандартные образцы:
   формальдегид в воде с концентрацией              ГСО 6263-91.2.1.
   1,0 мг/куб. см
   
                       Вспомогательные устройства
   
   Колонка из кварцевого стекла длиной
   15 см и внутренним диаметром 3,3 мм,
   заполненная сорбентом Separon С 18
   с размером частиц 5 мкм
   Центрифуга СМ-4 (2750 об./мин.)
   Дистиллятор                                      ТУ 61-1-721-79
   Сушильный шкаф ШСС-80 П УХЛ 4.2                  ТУ 16.531.743-83
   ИК-лампа
   Дефлегматор длиной 300 мм                        ГОСТ 9425-60
   Холодильник шариковый ХШ-300 (6 шар.)            ГОСТ 1770-74
   Холодильник прямой ХПТ-3-300                     ГОСТ 1770-74
   Воронка Шотта (пор 16)                           ГОСТ 25336-82
   Воронки делительные вместимостью 250 куб. см     ГОСТ 23932-79
   Бюксы вместимостью 10 куб. см                    ГОСТ 25336-82
   с притертой крышкой
   Стакан термостойкий вместимостью 2 куб. дм       ГОСТ 25336-82
   Колба для перегонки круглодонная                 ГОСТ 25336-82.
   вместимостью 2 куб. дм
   
                                Реактивы
   
   Гексан, х.ч., очищенный для хроматографии        ГОСТ 6-09-4521-77
   Ацетонитрил, ч., очищенный для хроматографии     ТУ 6-09-3534-87
   Вода дистиллированная                            ГОСТ 6709-72
   2,4-динитрофенилгидразин, ч.,                    ТУ 6-09-2394-77
   очищенный перекристаллизацией
   из ацетонитрила, чистота не менее 99,0%
   2,4-динитрофенилгидразон формальдегида,
   перекристаллизованный из метанола или
   этанола, чистота не менее 99,0%
   Кислота соляная (плотность 1,19), х.ч.           ГОСТ 3118-77
   Перманганат калия, ч.                            ГОСТ 20490-75
   Калий двухромовокислый, ч.д.а.                   ГОСТ 4220-75.
   
                        ТРЕБОВАНИЯ К БЕЗОПАСНОСТИ
   
       Помещение   для  проведения  измерений  должно  соответствовать
   требованиям  "Пожарных  норм  проектирования  зданий  и сооружений"
   (СНиП  ПА-5-700)  и  "Санитарных  норм  проектирования промышленных
   предприятий" (СН 245-71) и СНиП-74.
       При    выполнении    работ    должны    быть   соблюдены   меры
   противопожарной  безопасности  в  соответствии с требованиями ГОСТа
   12.1.004-85  и правила техники безопасности в соответствии с ГОСТом
   12.1.007-76.
       При   работе   необходимо   соблюдать   "Правила   по   технике
   безопасности  и  производственной санитарии при работе в химических
   лабораториях",  утверждены  МЗ  СССР 20.12.82 (М.,1981), и "Правила
   устройства   и  безопасной  эксплуатации  сосудов,  работающих  под
   давлением",  утверждены Госгортехнадзором СССР 27.11.87 (М.: Недра,
   1989).
       При  работе  с  реактивами  соблюдают  требования безопасности,
   установленные     для     работ     с    токсичными,    едкими    и
   легковоспламеняющимися веществами по ГОСТу 12.1.005-88.
       При   выполнении   измерений   с   использованием   жидкостного
   хроматографа  соблюдают  правила электробезопасности в соответствии
   с ГОСТом 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.
   
                   ТРЕБОВАНИЯ К КВАЛИФИКАЦИИ ОПЕРАТОРА
   
       К  выполнению  хроматографических  измерений биологических проб
   допускаются   лица,   прошедшие   обучение   работе  на  жидкостном
   хроматографе.
   
                            УСЛОВИЯ ИЗМЕРЕНИЙ
   
       При   подготовке  проб  к  анализу  и  приготовлении  растворов
   соблюдают следующие условия:
       - температура воздуха (20 +/- 10) -С;
       - атмосферное давление 630 - 800 мм рт. ст.;
       -  влажность  воздуха  -  не  более  80% при температуре 25 -С.
   Выполнение   измерений   на   жидкостном  хроматографе  проводят  в
   условиях, рекомендуемых технической документацией по прибору.
   
                    ПОДГОТОВКА К ВЫПОЛНЕНИЮ ИЗМЕРЕНИЙ
   
       Перед   выполнением   измерений   проводят   следующие  работы:
   подготовка   посуды   и   растворителей,  приготовление  растворов,
   подготовка  хроматографической колонки, установление градуировочной
   характеристики.
   
                            Подготовка посуды
   
       Используемую   посуду   необходимо  тщательно  вымыть  хромовой
   смесью,   тщательно  ополоснуть  водопроводной  и  дистиллированной
   водой и просушить при температуре 120 -С.
   
                        Подготовка растворителей
   
       Очистка  ацетонитрила от примесей. В колбу вместимостью 2 куб.
   дм  помещают  1  куб.  дм  ацетонитрила  и  20 г  КМnО , кипятят с
                                                         4
   обратным   холодильником   в   течение   1  ч,  затем   перегоняют
   с дефлегматором, отбирая фракции  по 200  куб. см. Когда  в  колбе
   останется  около  200  куб.  см  продукта,  перегонку  прекращают.
   Остаток   можно   смешивать с  новой порцией растворителя.  Первую
   фракцию   отбрасывают,   а   остальные   проверяют на   поглощение
   в УФ-области.
   
                         Приготовление растворов
   
       Хромовая  смесь.  В  термостойкий стакан вместимостью 2 куб. дм
   насыпают  50 г хромовокислого калия, осторожно приливают по палочке
   частями,  тщательно перемешивая, 1 куб. дм концентрированной серной
   кислоты.
       Элюент  для  хроматографии.  50 куб. см очищенного ацетонитрила
   смешивают  с  50  куб.  см  дистиллированной  воды.  Подвижную фазу
   фильтруют    через    воронку   Шотта   (пор   16)   и   дегазируют
   барботированием  гелия или азота в течение 5 - 10 мин. со скоростью
   50 - 60 куб. об./мин.
       Соляная    кислота,    2    моль/куб.   дм.   163,0   куб.   см
   концентрированной  НСl  (плотность  1,19 г/куб. см) вносят в мерную
   колбу   вместимостью   1   куб.   дм,   доводят   объем   до  метки
   дистиллированной водой и тщательно перемешивают.
       2,4-динитрофенилгидразин,   0,2%-ный   раствор   в  2М  соляной
   кислоте.  0,2  г  2,4-динитрофенилгидразина  вносят  в мерную колбу
   вместимостью  100  куб.  см и доводят до метки 2М раствором соляной
   кислоты.
       Исходный  раствор  формальдегида  для калибровки (раствор А). 1
   куб.  см ГСО формальдегида с концентрацией 1,0 мг/куб. см переносят
   в  мерную колбу вместимостью 100 куб. см и доводят дистиллированной
   водой до метки. Срок хранения раствора - 36 ч.
       Рабочий  раствор  для  градуировки УФ-детектора. В мерную колбу
   вместимостью  100  куб.  см  вносят 10 куб. см раствора А и доводят
   дистиллированной   водой   до  метки  (раствор  Б).  Срок  хранения
   раствора - 36 ч.
       Идентификация              хроматографического             пика
   2,4-динитрофенилгидразона     формальдегида.     Готовят    раствор
   2,4-динитрофенилгидразона    формальдегида    в    ацетонитриле   с
   концентрацией   0,01   -   0,02   мг/куб.   см,  вводят  в  колонку
   хроматографа  1  -  2  куб.  мм  раствора.  Снимают хроматограмму в
   условиях    хроматографического    анализа   и   определяют   время
   удерживания 2,4-динитрофенилгидразона формальдегида.
   
                  Подготовка хроматографической колонки
   
       Колонку   устанавливают  на  хроматограф  и  подают  элюирующую
   жидкость  (ацетонитрил:вода  =  1:1) со скоростью 1 куб. см/мин. до
   установления    равновесия    колонки,    которое   определяют   по
   стабильности нулевой линии детектора.
   
               Установление градуировочной характеристики
   
       Градуировочную  характеристику,  выражающую зависимость площади
   пика   на  хроматограмме  от  концентрации  формальдегида  в  моче,
   устанавливают  по  пяти  сериям  растворов  для градуировки. Каждую
   серию, состоящую из шести растворов, готовят из растворов А и Б.
       Растворы   для   установления   градуировочной   характеристики
   готовят  в  мерных  колбах  вместимостью  50  куб.  см. Для этого в
   каждую  колбу  вносят  раствор  А  (или раствор Б) в соответствии с
   таблицей,   доводят   объем   до   метки   мочой,   не   содержащей
   формальдегид,    и   тщательно   перемешивают.   Растворы   готовят
   непосредственно перед определением.
   
                                                               Таблица
   
                РАСТВОРЫ ДЛЯ УСТАНОВЛЕНИЯ ГРАДУИРОВОЧНОЙ
        ХАРАКТЕРИСТИКИ ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ КОНЦЕНТРАЦИИ ФОРМАЛЬДЕГИДА
                         В МОЧЕ (ФРАГМЕНТ ШКАЛЫ)
   
   ---------------------------T-----T-----T-----T-----T------T-----¬
   ¦Номер раствора            ¦  1  ¦  2  ¦  3  ¦  4  ¦  5   ¦  6  ¦
   +--------------------------+-----+-----+-----+-----+------+-----+
   ¦Объем раствора А (конц. 10¦-    ¦-    ¦-    ¦-    ¦2,50  ¦6,00 ¦
   ¦мкг/куб. см), куб. см     ¦     ¦     ¦     ¦     ¦      ¦     ¦
   +--------------------------+-----+-----+-----+-----+------+-----+
   ¦Объем раствора Б (конц. 1 ¦0,05 ¦0,25 ¦1,00 ¦5,0  ¦-     ¦-    ¦
   ¦мкг/куб. см), куб. см     ¦     ¦     ¦     ¦     ¦      ¦     ¦
   +--------------------------+-----+-----+-----+-----+------+-----+
   ¦Массовая концентрация     ¦0,001¦0,005¦0,020¦0,100¦0,500 ¦1,200¦
   ¦формальдегида, мкг/куб. см¦     ¦     ¦     ¦     ¦      ¦     ¦
   L--------------------------+-----+-----+-----+-----+------+------
   
       50  куб.  см  каждого  рабочего раствора помещают в делительную
   воронку,    добавляют    2,5    куб.    см    0,2%-ного    раствора
   2,4-динитрофенилгидразина   в   2М   соляной   кислоте,   2   капли
   концентрированной   соляной   кислоты,   5   куб.   см   гексана  и
   экстрагируют  15  мин. После расслоения гексана и мочи верхний слой
   (гексановый)  переносят  в центрифужную пробирку и центрифугируют 1
   -  2  мин.  со  скоростью  2750  об./мин.,  затем 2 куб. см гексана
   переносят  в  бюкс  и  выпаривают  досуха под ИК-лампой. Высушенный
   остаток   растворяют   в  0,5  куб.  см  ацетонитрила  и  вводят  в
   хроматограф  аликвотную  часть  (10  куб.  мм).  Проводят  по  пять
   параллельных     вводов     обработанных     экстрактов     каждого
   градуировочного раствора и анализируют в условиях:
       подвижная фаза                         ацетонитрил:вода = 1:1;
       скорость движения элюента                 0,6 куб. см/мин.;
       скорость диаграммной ленты                0,3 см/мин.;
       длина волны УФ-детектора                  365 нм;
       шкала детектора                           2;
       время удерживания:
       2,4-динитрофенилгидразина                 4 мин. 20 с;
       2,4-динитрофенилгидразона формальдегида   5 мин. 50 с.
       По  средним  для  каждой точки значениям аналитического сигнала
   (площади  пика) строят градуировочную характеристику S = f (С), где
   S  -  площадь  пика,  кв.  мм  (или  усл.  ед.);  С  - концентрация
   градуировочного    раствора,    мкг/куб.   см.   По   установленной
   градуировочной  характеристике и по значению аналитического сигнала
   пробы определяют концентрацию формальдегида в исследуемом образце.
   
                               Отбор проб
   
       Для  отбора  проб  мочи  используют  чистую  стеклянную  посуду
   объемом  100  куб. см с плотно закрывающейся крышкой. Срок хранения
   пробы мочи в холодильнике - не более суток.
   
                          ВЫПОЛНЕНИЕ ИЗМЕРЕНИЙ
   
       50  куб. см анализируемой пробы помещают в делительную воронку,
   добавляют  2,5 куб. см 0,2%-ного раствора 2,4-динитрофенилгидразина
   в  2М соляной кислоте, 2 капли концентрированной соляной кислоты, 5
   куб.  см  гексана и экстрагируют 15 мин. После расслоения гексана и
   мочи  верхний слой (гексановый) переносят в центрифужную пробирку и
   центрифугируют  1 - 2 мин. со скоростью 2750 об./мин., затем 2 куб.
   см  гексана  переносят  в  бюкс  и выпаривают досуха под ИК-лампой.
   Высушенный  остаток  растворяют в 0,5 куб. см ацетонитрила и вводят
   в  хроматограф  аликвотную  часть (10 куб. мм). Анализ проводят при
   вышеуказанных   условиях   работы  хроматографа.  По  установленной
   градуировочной  характеристике и по значению аналитического сигнала
   пробы определяют концентрацию формальдегида в исследуемом образце.
   
                    ВЫЧИСЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЯ
   
       Вычисляют    значение    площади    хроматографического    пика
   2,4-динитрофенилгидразона формальдегида по формуле:
   
                           S = h x L, кв. мм,
   
       где:
       h - высота пика, мм;
       L - ширина пика на половине высоты, мм.
       По      значению      площади      хроматографического     пика
   2,4-динитрофенилгидразона     формальдегида    из    градуировочных
   характеристик  находят  массовую концентрацию формальдегида в моче,
   мкг/куб. см.
   
                     ВНУТРЕННИЙ ОПЕРАТИВНЫЙ КОНТРОЛЬ
   
       Внутренний    оперативный    контроль    качества   результатов
   контрольного  химического  анализа  (сходимость, воспроизводимость,
   точность)  осуществляют  с целью получения оперативной информации о
   качестве  анализов  и принятия при необходимости оперативных мер по
   его повышению (МИ 2335-95).
   
                     Оперативный контроль сходимости
   
       Периодичность   контроля   сходимости   измерений   зависит  от
   количества  рабочих  измерений  (2  параллельные пробы). Отбирают 2
   пробы  мочи  и  каждую  из  них анализируют в точном соответствии с
   прописью методики.
       Результаты  признаются  удовлетворительными,  если  выполняется
   условие:
   
                        |С  - С | <= 0,01d х C  ,
                          1    2              ср
   
       где:
       С  и С  - результаты анализа 1 и 2 проб;
        1    2
       d  - допустимое расхождение между двумя результатами одной   и
   той же пробы (d = 55%);
       С   - среднее значение между двумя определениями.
        ср
   
                      Оперативный контроль точности
   
       Периодичность   контроля   погрешности   измерений  зависит  от
   количества   рабочих   измерений   за   контролируемый   период   и
   определяется планами контроля.
       Образцами   для   контроля   являются   представительные  пробы
   биосред,  к  которым  делаются  добавки в виде раствора. Отбирают 2
   пробы  и  к  одной  из  них  делают  добавку  в виде раствора таким
   образом,  чтобы  их  содержание увеличилось по сравнению с исходным
   на  50  -  150%.  Каждую  пробу анализируют в точном соответствии с
   прописью  методики  и  получают  результат анализа исходной рабочей
   пробы  X и рабочей пробы с добавкой X'. Результаты анализа исходной
   рабочей  пробы  X  и  рабочей  пробы  с  добавкой X' получают не по
   возможности,  а  в  одинаковых  условиях,  т.е.  их  получает  один
   аналитик  с  использованием  одного  набора  мерной  посуды,  одной
   партии реактивов и т.д.
       Результаты   контроля   признаются   удовлетворительными,  если
   выполняется условие:
   
                           |Х' - Х - С| < К ,
                                           Д
   
       где:
       С  -  добавка к пробе   в  виде   раствора   с  концентрацией,
   мкг/куб. см;
       К  - норматив оперативного контроля погрешности,  мкг/куб. см.
        Д
       При внешнем контроле (Р = 0,95) принимают:
   
                                _________________
                               /     2          2
                        К  = \/ДЕЛЬТА   + ДЕЛЬТА ,
                         Д           Х'         Х
   
                 2            2
       где ДЕЛЬТА    и  ДЕЛЬТА   -  характеристики  погрешностей  для
                 Х'           Х
   исходной пробы и пробы с добавкой, мкг/куб. см.
   
              ДЕЛЬТА   = 0,165 х Х' и ДЕЛЬТА  = 0,165 х Х.
                    Х'                      Х
   
       При внутрилабораторном контроле (Р = 0,90) принимают, что:
   
                            K' = 0,84 х K .
                             Д           Д
   
       При  превышении  оперативного  контроля погрешности эксперимент
   повторяют.  При  повторном превышении указанного норматива выясняют
   причины,  приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и
   их устраняют.
   
   

Списки

Право 2010


Новости партнеров
Счетчики
 
Популярное в сети
Реклама
Курсы валют
06.06.2015
USD
56.25
EUR
63.32
CNY
9.07
JPY
0.45
GBP
86.21
TRY
21.05
PLN
15.21
Разное