Утверждаю
Главный государственный
санитарный врач
Российской федерации,
Первый заместитель
Министра здравоохранения
Российской Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
20 сентября 2001 года
Дата введения:
с момента утверждения
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
МЕТОД МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ИЗМЕРЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ
ПРЕПАРАТА ЭМ-1 "БАЙКАЛ" ПО ОДНОМУ ИЗ ВЕДУЩИХ КОМПОНЕНТОВ
(LACTOBACILLUS CASEI-21) В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
МУК 4.2.1071-01
1. Разработаны к.м.н. Сергеюк Н.П. (Научно-исследовательский
центр "Экос").
2. Утверждены и введены в действие Главным государственным
санитарным врачом Российской Федерации - Первым заместителем
Министра здравоохранения Российской Федерации 20 сентября 2001 г.
3. Введены впервые.
1. Общие положения и область применения
Настоящие методические указания устанавливают методику
проведения микробиологического количественного анализа
концентраций клеток штамма Lactobacillus casei-21, являющегося
ведущим компонентом консорциума микроорганизмов (препарат ЭМ-1
"Байкал") в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентрации от 100
до 50000 клеток в 1 куб. м воздуха.
Методические указания разработаны с целью обеспечения
микробиологического контроля концентрации препарата "Байкал ЭМ-1"
по одному из ведущих компонентов Lactobacillus casei-21 в воздухе
рабочей зоны и производственных помещений и оценки соответствия
уровня его содержания гигиеническим нормативам на основе учета
требований ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие
санитарно-гигиенические требования", ГОСТ Р 8.563-96 "ГСИ.
Методики выполнения измерений".
Методические указания предназначены для центров
госсанэпиднадзора, санитарных лабораторий биотехнологических
предприятий, микробиологических лабораторий,
научно-исследовательских институтов, работающих в области гигиены
окружающей среды и аккредитованных в установленном порядке на
право проведения микробиологических исследований.
2. Характеристика штамма Lactobacillus casei-21
Семейство: Lactobacillaceae
Род: Lactobacillus
Вид: casei
Штамм: 21.
На поверхности плотных питательных сред образует мелкие
круглые колонии. Глубинные колонии - вогнутые, иногда с выростами.
Форма клеток - палочки разной длины, образуют короткие и длинные
цепочки, неподвижные, неспорообразующие, грамположительные.
Отмечена также тенденция к образованию заметно искривленных
(изогнутых) клеток.
3. Пределы измерений
Методика обеспечивает выполнение измерений количества клеток
Lactobacillus casei-21 в воздушной среде в диапазоне концентраций
от 100 до 50000 клеток в 1 куб. м воздуха при доверительной
вероятности 0,95. ПДК - 2000 кл./куб. м.
р.з.
4. Метод измерений
Метод основан на аспирации из воздуха клеток Lactobacillus
casei-21 на поверхность плотной питательной среды и подсчете
выросших колоний по типичным морфологическим признакам.
5. Средства измерений, вспомогательные устройства,
реактивы и материалы
При выполнении измерений применяют следующие средства
измерений, вспомогательные устройства и материалы.
5.1. Средства измерений,
вспомогательные устройства, материалы
Прибор для бактериологического анализа воздуха, ТУ 64-12791-77
модель 818 (щелевой прибор Кротова)
Термостаты электрические суховоздушные или
водяные
Автоклав электрический ГОСТ 9586-75
Бокс, оборудованный бактерицидными лампами
Холодильник бытовой
Весы лабораторные аналитические типа
ВЛА-200
Микроскоп биологический с иммерсионной системой
типа "Биолам" Л-211
Лупа с увеличением х10 ГОСТ 25706-83
Чашки Петри бактериологические плоскодонные
диаметром 100 мм
Пробирки биологические вместимостью 20 и 35 мл ГОСТ 10515-75
Пипетки мерные на 1, 5 и 10 мл ГОСТ 10515-75
Колбы конические вместимостью 250 и 500 мл ГОСТ 1770-74
Секундомер ГОСТ 9586-75
Барометр ГОСТ 24696-79
Марля медицинская ГОСТ 9412-77
Вата медицинская гигроскопическая ГОСТ 25556-81.
5.2. Реактивы, растворы
Агар микробиологический ГОСТ 17206-96
Селективная среда для молочнокислых палочек
Lactobacillus casei-21
Среда Рогозы (состав питательной среды %):
дрожжевой экстракт - 0,5;
триптический гидролизат казеина - 1,0;
твин-80 - 0,1;
глюкоза - 2,0;
натрий уксуснокислый - 2,5;
лимоннокислый аммоний - 0,2;
ледяная уксусная кислота - 0,132;
соль Б - (магний сернокислый - 11,5 г; марганец
сернокислый - 2,86 г; железо сернокислое -
0,58 г; вода 100 мл) - 0,5;
калий фосфорнокислый однозамещенный - 0,6,
рН среды 0,6;
вода водопроводная - 100 мл;
агар-агар - 1,5.
Стерилизация при 3/4 атмосферы 20 мин. После остывания
раствора добавляют 9 мл этилового спирта для подавления
посторонней микрофлоры и разливают данный раствор асептично по 20
мл в чашки Петри.
6. Требования безопасности
При выполнении измерений концентрации клеток Lactobacillus
casei-21 в воздушной среде соблюдают:
- правила техники безопасности при работе с химическими
реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.005-88;
- правила электробезопасности при работе с электроустановками
в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцию по эксплуатации
прибора;
- требования, изложенные в руководстве "Положение об
организации работы по технике безопасности в микробиологической
промышленности" (1980);
- положения "Инструкций по устройству, требованиям
безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических
лабораториях предприятий микробиологической промышленности"
(1977).
7. Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются
лица с высшим или средним специальным образованием, прошедшие
соответствующую подготовку и имеющие навыки работы в области
микробиологических исследований.
8. Условия измерений
Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу
проводят в нормальных условиях в соответствии с ГОСТ 15150-69 при
температуре воздуха (20 +/- 5) -С, атмосферном давлении 630 - 800
мм рт. ст. и влажности воздуха не более 80%.
9. Проведение измерений
9.1. Условия отбора проб воздуха
Для определения микроорганизма воздух аспирируют при помощи
аппарата Кротова со скоростью 10 л/мин. на поверхность плотной
питательной среды. Время аспирации воздуха 20 мин. Аппарат Кротова
перед каждым отбором пробы воздуха тщательно протирают спиртом.
Особенно тщательно обрабатывают поверхность подвижного диска и
внутреннюю стенку прибора, наружную и внутреннюю стенку крышки. На
подвижный диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой,
одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают.
Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо. После отбора
пробы воздуха и остановки диска прибор открывают, быстро снимают
чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки
Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату
отбора пробы.
9.2. Выполнение анализа
Метод предполагает учет количества типичных по морфологическим
признакам колоний, выросших на 3 - 4 сутки после посева воздуха.
Прямой метод позволяет учитывать на чашке до 200 колоний.
Селективную среду тщательно перемешивают и разливают по 20 мл
в стеклянные чашки Петри на горизонтальной поверхности. Чашки с
застывшей средой помещают в термостат на сутки при температуре 37
-С, после чего проросшие чашки бракуют, стерильные чашки
используют для контроля воздуха.
После отбора проб воздуха чашки Петри инкубируют в термостате
при 36 -С, через 72 ч производят подсчет выросших типичных
колоний. При необходимости культуру подвергают микрокопированию.
10. Вычисление результатов измерений
Расчет концентрации клеток в 1 куб. м воздуха производят по
формуле:
N х 1000
X = --------, кл./куб. м,
V
где:
Х - концентрация клеток в воздухе;
N - количество колоний, выросших на чашке;
1000 - коэффициент перерасчета на 1 куб. м воздуха;
V - объем воздуха, л (произведение скорости на время
аспирации).
Препарат "Байкал ЭМ-1" представляет собой консорциум
микроорганизмов, в котором Lactobacillus casei-21 составляют 30%
от общего числа микроорганизмов, Streptococcus lactis - 30%,
бактерии фотосинтеза Phodopseudomonas palistris - 30%,
сахаромицеты - Saccaromyces cerevisial - 10%. Концентрацию
препарата "Байкал ЭМ-1" рассчитывают исходя из процентного
отношения микроорганизмов, входящих в его состав, по формуле:
А = 100 х N / d,
где:
А - концентрация консорциума (кл./куб. м);
N - концентрация контрольного микроорганизма (кл/куб. м);
d - содержание контрольного микроорганизма в консорциуме (%).
Контрольным микроорганизмом для данной методики является
Lactobacillus casei-21.
11. Оформление результатов измерений
Результаты измерений оформляют протоколом по форме.
Протокол N ____
количественного микробиологического анализа препарата
ЭМ-1 "Байкал" в воздухе рабочей зоны
Дата проведения анализа ____________________________
Место отбора пробы _________________________________
Название лаборатории _______________________________
Юридический адрес организации ______________________
Результаты микробиологического анализа
--------------------T----------------------T---------------------¬
¦ Шифр или N пробы ¦ Определяемый ¦ Концентрация, ¦
¦ ¦ микроорганизм ¦ кл./куб. м ¦
+-------------------+----------------------+---------------------+
L-------------------+----------------------+----------------------
Ответственный исполнитель
Научный руководитель
|
