Утверждаю
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
30 декабря 1999 года
Дата введения:
с момента утверждения
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ИЗМЕРЕНИЮ КОНЦЕНТРАЦИЙ ДИБИОМИЦИНА В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ
МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МУК 4.1.815-99
Методические указания подготовлены коллективом специалистов в
рамках Проблемной Комиссии "Научные основы гигиены труда и
профпатологии". Утверждены Первым заместителем Министра
здравоохранения Российской Федерации, Председателем Комиссии по
государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию,
Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации
Г.Г. Онищенко в декабре 1999 г.
Методические указания по измерению концентраций вредных
веществ в воздухе рабочей зоны (сборник 35) разработаны с целью
обеспечения контроля соответствия фактических концентраций вредных
веществ их предельно допустимым концентрациям (ПДК) и
ориентировочным безопасным уровням воздействия (ОБУВ) -
санитарно-гигиеническим нормативам и являются обязательными при
осуществлении санитарного контроля.
Методические указания разработаны и подготовлены в
соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 ССБТ "Воздух рабочей
зоны. Общие санитарно-гигиенические требования".
Методики выполнены с использованием современных методов
исследования, метрологически аттестованы и дают возможность
контролировать концентрации химических веществ на уровне и меньше
их ПДК и ОБУВ в воздухе рабочей зоны, установленных в ГН
2.2.5.686-98 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных
веществ в воздухе рабочей зоны" и ГН 2.2.5.687-98 "Ориентировочные
безопасные уровни воздействия (ОБУВ) вредных веществ в воздухе
рабочей зоны".
(Структурная формула не приводится)
М. м. 1216,1
Дибиомецин - {N,N'-дибензилэтилендиаминовая соль
хлортетрациклина, или 7-хлор-4-(диметиламино)-1,4,4а,5,5а,6,11,12-о
-пентагидрокси-6-метил-1,11-диоксо-2-нафтаненкарбоксамид,
соединение с 1 N,N'-бис-(фенилметил)-1,2-этандиамином (2:1)} -
кристаллическое вещество светло-коричневого цвета. Растворим в
водных растворах минеральных кислот и фосфатных буферах с pH выше
7,2. Мало растворим в воде. pH насыщенного раствора 6,0 - 7,0. Не
растворим в этиловом и метиловом спиртах. Ограниченно растворим в
ацетонитриле. Не растворим в эфире и хлороформе. Разлагается при
нагревании свыше 100 -С.
В воздухе находится в виде аэрозоля.
Обладает общетоксическим действием.
ПДК в воздухе - 0,1 мг/куб м.
Характеристика метода
Метод основан на использовании высокоэффективной жидкостной
хроматографии с применением УФ-детектора.
Отбор проб производится с концентрированием на фильтр.
Нижний предел измерения дибиомицина в хроматографируемом
объеме пробы - 0,225 мкг.
Нижний предел измерения в воздухе дибиомицина - 0,05 мг/куб. м
(при отборе 50 л воздуха).
Диапазон измеряемых концентраций в воздухе дибиомицина от 0,05
до 1 мг/куб. м.
Определению не мешает присутствие доксорубицина и рубомицина.
Суммарная погрешность измерения не превышает +/- 20%.
Время выполнения измерения, включая отбор пробы, около 30
минут.
Приборы, аппаратура, посуда
Микроколоночный жидкостной хроматограф "Милихром" или другие
модели с УФ-детектором.
Хроматографическая колонка длиной 120 мм, внутренним диаметром
<...> мм, заполненная сорбентом "Силасорб CN" с размером зерен
<...> мкм.
Электроаспиратор ЭА-1, ОСТ 95.10052-84.
Фильтродержатель, ТУ 95-7205-77.
Микроскоп отсчетный типа МПБ-2, ТУ 3.3-824-79.
Стеклянная ректификационная колонна длиной 550 мм и внутренним
диаметром 20 мм, флегмовое число 5 (или другая такого же типа).
Колбы мерные вместимостью 25, 100 мл и 1 л, ГОСТ 1770-74.
Пипетки вместимостью 10 мл, ГОСТ 20292-74.
Пробирки с пришлифованными пробками вместимостью 10 мл, ГОСТ
10515-75.
Реактивы, растворы и материалы
Дибиомицин фармакопейный, содержание основного вещества не
менее 98%.
Калий марганцовокислый (калий перманганат), ТУ 20490-75.
Ацетонитрил очищенный. Ацетонитрил очищенный получают из
ацетонитрила, ТУ 6-09-3534-82, ч., путем ректификации с
предварительной химической обработкой, которая заключается в
кипячении растворителя с обратным холодильником в присутствии
перманганата калия из расчета 1 г перманганата калия на 1 л
растворителя. Кипячение проводится до полного перехода
перманганата калия в двуокись марганца. Перед ректификацией осадок
двуокиси марганца отделяют путем фильтрации через фильтр Шотта N
4. Ректификационная колонна длиной 550 мм и внутренним диаметром
20 мм, флегмовое число 5. Насадка - спиральки Левина из
нержавеющей стали (2 х 2 х 0,2 мм). Основную фракцию отбирают при
температуре 81,6 -С (атмосферное давление) в пределах колебаний
+/- 0,1 -С.
Натрий фосфорнокислый двузамещенный 12-водный, Na НРО x 12Н О
2 4 2
(динатрийфосфат), ТУ 4172-76.
Калий фосфорнокислый однозамещенный KH PO (калий фосфат),
2 4
ТУ 4198-75.
0,067 М раствор динатрийфосфата готовят растворением 23,986 г
натрия фосфорнокислого двузамещенного 12-водного в воде в мерной
колбе вместимостью 1 л.
0,067 М раствор калийфосфата готовят растворением 9,078 г
калия фосфорнокислого однозамещенного в воде в мерной колбе
вместимостью 1 л.
0,067 М фосфатный буфер (pH 7,2) готовят смешивая 720 мл 0,067
М раствора динатрийфосфата и 280 мл 0,067 М раствора калий
фосфата.
Фосфатный буфер устойчив при хранении в холодильнике в течение
месяца.
Растворитель: 0,067 М фосфатный буфер (pH 7,2).
Элюент: 0,067 М фосфатный буфер (pH 7,2) - ацетонитрил (7:1).
Стандартный раствор N 1 с концентрацией дибиомицина 500 мкг/мл
готовят растворением 0,05 г дибиомицина в растворителе в мерной
колбе вместимостью 100 мл.
Стандартный раствор N 2 с концентрацией дибиомицина 10 мкг/мл
готовят соответствующим разбавлением стандартного раствора N 1
растворителем. Растворы устойчивы в течение суток.
Фильтры АФА-ВП-10, ТУ 85-743-80.
Отбор пробы воздуха
Воздух с объемным расходом 5 мл/мин. аспирируют через фильтр
АФА-ВП-10. Для определения 0,5 ПДК достаточно отобрать 50 л
воздуха.
Пробы можно хранить в закрытых сосудах в холодильнике в
течение месяца.
Подготовка к измерению
Хроматографическая колонка промышленного изготовления.
Количественный анализ проводят методом абсолютной калибровки с
использованием градуировочных растворов, которые готовят с
концентрацией от 0,0005 до 0,01 мкг/мкл путем соответствующего
разбавления стандартного раствора N 2 растворителем.
Растворы устойчивы в течение суток при хранении в холодильнике
в закрытых сосудах.
Инжектируют в хроматограф от 0,225 до 4,5 мкг дибиамицина. Для
этого набирают в капилляр микродозатора 100 мкл растворителя,
затем 150 мкл градуировочного раствора и наносят набранные 250 мкл
на колонку со скоростью 200 мкл/мин. Операцию повторяют 2 раза,
после чего наносят еще 150 мкл хроматографируемого раствора и
включают подачу элюента.
Условия хроматографирования градуировочных смесей и
анализируемых проб:
Скорость подачи элюента (0,067 М фосфатный 200 мкл/мин.
буфер (pH 7,2) - ацетонитрил, 7:1)
Длина волны УФ-детектора 300 нм
Скорость движения диаграммной ленты 1,5 мм/мин.
Диапазон чувствительности детектора 0,4
Диапазон измерения самопишущего потенциометра 50 мВ
Объем вводимой пробы 450 мкл
Время удерживания дибиомицина 4 мин.
Элюирующий объем 800 мкл
Эффективность колонки по дибиомицину 100 тт
На полученной хроматограмме измеряют площади пиков и строят
градуировочный график, выражающий зависимость площади пиков (кв.
мм) от содержания дибиомицина в хроматографируемом объеме пробы
(мкл).
Построение градуировочных графиков необходимо проводить не
менее чем по 6 точкам, выполняя по 5 параллельных измерений для
каждого инжектируемого объема. Проверку градуировочных графиков
следует проводить при изменении условий анализа, но не реже 1 раза
в месяц.
Проведение измерения
Фильтр с отобранной пробой помещают в пробирку с
пришлифованной пробкой, добавляют 5 мл растворителя и оставляют на
15 минут при комнатной температуре и периодическом помешивании.
Степень десорбции с фильтра дибиомицина - не менее 96,5%.
450 мкл анализируемого раствора инжектируют в колонку
хроматографа. Для этого набирают в капилляр микродозатора 100 мкл
растворителя, затем 150 мкл раствора и наносят набранные 250 мкл
на колонку со скоростью 200 мкл/мин. Операцию повторяют 2 раза,
после чего наносят еще 150 мкл раствора и включают подачу элюента.
Хроматографирование анализируемого раствора проводят в тех же
условиях по отношению к тем же элюентам, что и при построении
градуировочных графиков.
Количественное определение содержания дибиомицина в
хроматографируемом объеме проводят по соответствующему
предварительно построенному градуировочному графику.
Расчет концентрации
Концентрацию дибиомицина "С" в воздухе (мг/куб. м) вычисляют
по формуле:
а х в
C = -----,
б х V
где:
а - содержание дибиомицина в хроматографируемом объеме пробы,
найденное по градуировочному графику, мкг;
б - объем пробы, взятый для анализа, мл;
в - общий объем анализируемого раствора, мл;
V - объем воздуха, отобранный для анализа и приведенный к
стандартным условиям, л (см. Приложение 1).
Приложение 1
Приведение объема воздуха к стандартным условиям (температура
20 -С и давление 760 мм рт. ст.) проводят по формуле:
V (273 + 20) х Р
t
V = ------------------,
(273 + t) х 101,33
где:
V - объем воздуха, отобранный для анализа, л;
t
Р - барометрическое давление, кПа
(101,33 кПа = 760 мм рт. ст.);
t - температура воздуха в месте отбора пробы, -С.
Для удобства расчета V следует пользоваться таблицей
20
коэффициентов (Приложение 2). Для приведения воздуха к стандартным
условиям надо умножить V на соответствующий коэффициент.
t
Приложение 2
КОЭФФИЦИЕНТЫ ДЛЯ ПРИВЕДЕНИЯ ОБЪЕМА
ВОЗДУХА К СТАНДАРТНЫМ УСЛОВИЯМ
----T--------------------------------------------------------------------------¬
¦-С ¦ Давление Р, кПа/мм рт. ст. ¦
¦ +------T------T------T------T------T-------T-------T-------T-------T-------+
¦ ¦97,33/¦97,86/¦98,4/ ¦98,93/¦99,46/¦100/750¦100,53/¦101,06/¦101,33/¦101,86/¦
¦ ¦ 730 ¦ 734 ¦ 738 ¦ 742 ¦ 746 ¦ ¦ 754 ¦ 758 ¦ 760 ¦ 764 ¦
+---+------+------+------+------+------+-------+-------+-------+-------+-------+
¦-30¦1,1582¦1,1646¦1,1709¦1,1772¦1,1836¦1,1899 ¦1,1963 ¦1,2026 ¦1,2058 ¦1,2122 ¦
+---+------+------+------+------+------+-------+-------+-------+-------+-------+
¦-26¦1,1393¦1,1456¦1,1519¦1,1581¦1,1644¦1,1705 ¦1,1768 ¦1,1831 ¦1,1862 ¦1,1925 ¦
+---+------+------+------+------+------+-------+-------+-------+-------+-------+
¦-22¦1,1212¦1,1274¦1,1336¦1,1396¦1,1458¦1,1519 ¦1,1581 ¦1,1643 ¦1,1673 ¦1,1735 ¦
+---+------+------+------+------+------+-------+-------+-------+-------+-------+
¦-18¦1,1036¦1,1097¦1,1158¦1,1218¦1,1278¦1,1338 ¦1,1399 ¦1,1460 ¦1,1490 ¦1,1551 ¦
+---+------+------+------+------+------+-------+-------+-------+-------+-------+
¦-14¦1,0866¦1,0926¦1,0986¦1,1045¦1,1105¦1,1164 ¦1,1224 ¦1,1284 ¦1,1313 ¦1,1373 ¦
+---+------+------+------+------+------+-------+-------+-------+-------+-------+
¦-10¦1,0701¦1,0760¦1,0819¦1,0877¦1,0986¦1,0994 ¦1,1053 ¦1,1112 ¦1,1141 ¦1,1200 ¦
+---+------+------+------+------+------+-------+-------+-------+-------+-------+
¦-6 ¦1,0540¦1,0599¦1,0657¦1,0714¦1,0772¦1,0829 ¦1,0887 ¦1,0945 ¦1,0974 ¦1,1032 ¦
+---+------+------+------+------+------+-------+-------+-------+-------+-------+
¦-2 ¦1,0385¦1,0442¦1,0499¦1,0556¦1,0613¦1,0669 ¦1,0726 ¦1,0784 ¦1,0812 ¦1,0869 ¦
+---+------+------+------+------+------+-------+-------+-------+-------+-------+
¦0 ¦1,0309¦1,0366¦1,0423¦1,0477¦1,0535¦1,0591 ¦1,0648 ¦1,0705 ¦1,0733 ¦1,0789 ¦
+---+------+------+------+------+------+-------+-------+-------+-------+-------+
¦+2 ¦1,0234¦1,0291¦1,0347¦1,0402¦1,0459¦1,0514 ¦1,0571 ¦1,0627 ¦1,0655 ¦1,0712 ¦
+---+------+------+------+------+------+-------+-------+-------+-------+-------+
¦+6 ¦1,0087¦1,0143¦1,0198¦1,0253¦1,0309¦1,0363 ¦1,0419 ¦1,0475 ¦1,0502 ¦1,0557 ¦
+---+------+------+------+------+------+-------+-------+-------+-------+-------+
¦+10¦0,9944¦0,9999¦1,0054¦1,0108¦1,0162¦1,0216 ¦1,0272 ¦1,0326 ¦1,0353 ¦1,0407 ¦
+---+------+------+------+------+------+-------+-------+-------+-------+-------+
¦+14¦0,9806¦0,9860¦0,9914¦0,9967¦1,0027¦1,0074 ¦1,0128 ¦1,0183 ¦1,0209 ¦1,0263 ¦
+---+------+------+------+------+------+-------+-------+-------+-------+-------+
¦+18¦0,9671¦0,9725¦0,9878¦0,9880¦0,9884¦0,9936 ¦0,9989 ¦1,0043 ¦1,0069 ¦1,0122 ¦
+---+------+------+------+------+------+-------+-------+-------+-------+-------+
¦+20¦0,9605¦0,9658¦0,9711¦0,9783¦0,9816¦0,9868 ¦0,9921 ¦0,9974 ¦1,0000 ¦1,0053 ¦
+---+------+------+------+------+------+-------+-------+-------+-------+-------+
¦+22¦0,9539¦0,9592¦0,9645¦0,9696¦0,9749¦0,9800 ¦0,9853 ¦0,9906 ¦0,9932 ¦0,9985 ¦
+---+------+------+------+------+------+-------+-------+-------+-------+-------+
¦+24¦0,9475¦0,9527¦0,9579¦0,9631¦0,9683¦0,9735 ¦0,9787 ¦0,9839 ¦0,9865 ¦0,9917 ¦
+---+------+------+------+------+------+-------+-------+-------+-------+-------+
¦+26¦0,9412¦0,9464¦0,9516¦0,9566¦0,9618¦0,9669 ¦0,9721 ¦0,9773 ¦0,9799 ¦0,9851 ¦
+---+------+------+------+------+------+-------+-------+-------+-------+-------+
¦+28¦0,9349¦0,9401¦0,9453¦0,9503¦0,9555¦0,9605 ¦0,9657 ¦0,9708 ¦0,9734 ¦0,9785 ¦
+---+------+------+------+------+------+-------+-------+-------+-------+-------+
¦+30¦0,9288¦0,9339¦0,9391¦0,9440¦0,9432¦0,9542 ¦0,9594 ¦0,9645 ¦0,9670 ¦0,9723 ¦
+---+------+------+------+------+------+-------+-------+-------+-------+-------+
¦+34¦0,9167¦0,9218¦0,9268¦0,9318¦0,9368¦0,9418 ¦0,9468 ¦0,9519 ¦0,9544 ¦0,9595 ¦
+---+------+------+------+------+------+-------+-------+-------+-------+-------+
¦+38¦0,9049¦0,9099¦0,9149¦0,9199¦0,9248¦0,9297 ¦0,9347 ¦0,9397 ¦0,9421 ¦0,9471 ¦
L---+------+------+------+------+------+-------+-------+-------+-------+--------
|
