Утверждаю
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации,
Первый заместитель
Министра здравоохранения
Российской Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
24 июня 2003 года
Дата введения:
30 июня 2003 года
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ИМИДАКЛОПРИДА В ВОДЕ,
ПОЧВЕ, ОГУРЦАХ, ТОМАТАХ, САХАРНОЙ СВЕКЛЕ, КАРТОФЕЛЕ, ПЕРЦЕ
И БАКЛАЖАНАХ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ
ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
МУК 4.1.1390-03
1. Вводная часть
Фирма-производитель: БайерКропСайенс (Германия).
Торговое название: КОНФИДОР, ГАУЧО, АДМИР.
Действующее вещество: имидаклоприд (NТN 33893).
1-(6-хлор-3-пиридилметил)-N-нитроимидазолидин-2-илиденамин
(ИЮПАК).
1-[(6-хлор-3-пиридинил)метил]-N-нитро-2-имидазолидинимин
(С.А.).
Структурная формула: (не приводится).
Эмпирическая формула: C H ClN О М. м.: 255,7
9 10 5 2
Бесцветное кристаллическое вещество со слабым характерным
запахом.
Температура плавления: 144 -С.
-7
Давление паров при 20 -С: 4 х 10 мПа.
Коэффициент распределения н-октанол/вода: К log Р = 0,57.
ow
Растворимость (г/л) при 20 -С: вода - 0,61; гексан - менее
0,1; дихлорметан - 55; изопропанол - 1,2; толуол - 0,68.
Вещество устойчиво к гидролизу при рН 5 - 11 (Т более 1
1/2
года).
Имидаклоприд относительно слабо передвигается по почвенному
профилю и очень быстро разрушается в почве под действием света и
микрофлоры. В растениях соединение постепенно метаболизируется.
Краткая токсикологическая характеристика.
Острая пероральная токсичность (LD ) для крыс - 450 мг/кг;
50
острая дермальная токсичность (LD ) для крыс - более 5000 мг/кг;
50
острая ингаляционная токсичность (LС ) для крыс - 69 мг/куб. м
50
воздуха.
Имидаклоприд не вызывает раздражения слизистой оболочки кожи у
кроликов. LС для рыб - 211 мг/л (96 ч).
50
Имидаклоприд практически не токсичен для птиц, дождевых
червей, водорослей, но опасен для пчел при прямом контакте.
Гигиенические нормативы: ОДК в почве - 0,1 мг/кг; ПДК в воде
водоемов - 0,03 мг/куб. дм ; МДУ в картофеле - 0,05, огурцах и
томатах - 0,1 мг/кг.
Область применения препарата.
Имидаклоприд - инсектицид нервно-паралитического действия,
эффективно уничтожает листовую тлю, белокрылку, минеров, трипсов,
колорадского жука, долгоносиков на хлопчатнике, рисе, картофеле,
кукурузе, сахарной свекле, овощных культурах, цитрусовых,
косточковых и семечковых плодовых в течение вегетационного
периода. Вещество обладает системной активностью и может
использоваться для обработки почвы и надземных органов растений.
Проходит регистрационные испытания в России и странах СНГ в
виде препарата Гаучо 600 FS (600 г имидаклоприда в 1 л препарата),
предназначенного для протравливания семян и посадочного материала
ряда культур, и препарата Конфидор, ВРК (200 г имидаклоприда в 1 л
препарата), рекомендованного для обработки вегетирующих растений.
2. Методика определения остаточных количеств
имидаклоприда в воде, почве, огурцах, томатах, сахарной
свекле, картофеле, перце и баклажанах методом
высокоэффективной жидкостной хроматографии
2.1. Основные положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на определении имидаклоприда методом
обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии
(ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором после извлечения препарата из
воды дихлорметаном, из почвы и растительного материала - водным
ацетоном, очистки экстрактов перераспределением в системе
несмешивающихся растворителей и на колонке с силикагелем.
Количественное определение проводится методом абсолютной
калибровки.
2.1.2. Избирательность метода
В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии
пестицидов, применяемых при возделывании сахарной свеклы,
картофеля, а также огурцов, томатов, перца и баклажанов открытого
и защищенного грунта.
2.1.3. Метрологическая характеристика метода
Таблица
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА
----------T------------------------------------------------------¬
¦Анализи- ¦ Метрологические параметры, Р = 0,95, n = 20 ¦
¦руемый +-------T-----------T-------T------T----------T--------+
¦объект ¦предел ¦диапазон ¦среднее¦стан- ¦относи- ¦довери- ¦
¦ ¦обнару-¦определяе- ¦значе- ¦дарт- ¦тельное ¦тельный ¦
¦ ¦жения, ¦мых концен-¦ние ¦ное ¦стандарт. ¦интервал¦
¦ ¦мг/куб.¦траций, ¦опреде-¦откло-¦отклоне- ¦сред- ¦
¦ ¦дм, ¦мг/куб. дм,¦ления, ¦нение,¦ние, DS, %¦него, % ¦
¦ ¦мг/кг ¦мг/кг ¦% ¦S, % ¦ ¦ ¦
+---------+-------+-----------+-------+------+----------+--------+
¦Вода ¦0,0004 ¦0,0004 - ¦84,9 ¦3,7 ¦1,7 ¦+/- 3,5 ¦
¦ ¦ ¦0,004 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+---------+-------+-----------+-------+------+----------+--------+
¦Почва ¦0,02 ¦0,02 - 0,2 ¦75,6 ¦3,8 ¦1,7 ¦+/- 3,5 ¦
+---------+-------+-----------+-------+------+----------+--------+
¦Огурцы ¦0,02 ¦0,02 - 0,2 ¦86,0 ¦6,7 ¦3,0 ¦+/- 6,3 ¦
+---------+-------+-----------+-------+------+----------+--------+
¦Томаты ¦0,02 ¦0,02 - 0,2 ¦82,1 ¦4,8 ¦2,2 ¦+/- 4,5 ¦
+---------+-------+-----------+-------+------+----------+--------+
¦Свекла ¦0,02 ¦0,02 - 0,2 ¦81,5 ¦3,8 ¦1,7 ¦+/- 3,5 ¦
¦сахарная ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+---------+-------+-----------+-------+------+----------+--------+
¦Картофель¦0,02 ¦0,02 - 0,2 ¦88,3 ¦5,4 ¦2,4 ¦+/- 5,0 ¦
+---------+-------+-----------+-------+------+----------+--------+
¦Перец ¦0,02 ¦0,02 - 0,2 ¦81,9 ¦3,7 ¦1,6 ¦+/- 3,7 ¦
+---------+-------+-----------+-------+------+----------+--------+
¦Баклажаны¦0,02 ¦0,02 - 0,2 ¦83,2 ¦4,0 ¦1,8 ¦+/- 4,0 ¦
L---------+-------+-----------+-------+------+----------+---------
2.2. Реактивы, растворы, материалы
Имидаклоприд с содержанием д.в. 99,6% (Байер,
Германия)
Ацетон ГОСТ 2603-79
Ацетонитрил, ч ТУ 6-09-3534-82
Вода бидистиллированная ГОСТ 7602-72
Гексан, ч ТУ 6-09-3375-78
Калия перманганат ГОСТ 20490-75
Кальция хлорид, хч ГОСТ 4161-77
Калий углекислый, хч ГОСТ 4221-76
Кислота серная, хч ГОСТ 4204-77
Натрий двууглекислый ГОСТ 83-79
Натрия гидроксид, хч ГОСТ 4328-77
Натрия сульфат безводный, хч ГОСТ 4166-76
Фосфора пентоксид, ч МРТУ 6-09-5759-69
Этилацетат ГОСТ 22300-76
Элюент N 1 для колоночной хроматографии:
смесь гексан-этилацетат (4:6 по объему)
Элюент N 2 для колоночной хроматографии:
смесь гексан-этилацетат (2:8 по объему)
Подвижная фаза для ВЭЖХ: смесь ацетонитрил-
вода (25:75 по объему)
Силикагель для адсорбционной хроматографии
(Вельм, Германия) 1 степени активности или
силикагель КСК (60 - 100 меш)
Стекловата
Целит 535 (2 - 15 мкм) /Серва, Германия/
или аналогичный
Фильтры бумажные "синяя лента" ТУ 6-09-1678-77.
2.3. Приборы, аппаратура, посуда
Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым
детектором фирмы Altex (США) или аналогичный
Хроматографическая колонка стальная длиной
15 см, внутренним диаметром 4 мм, заполненная
Диасорбом 130-С10СN или Диасорбом 130-С16 Т
(ЗАО БиоХимМак, РФ; 119899, Москва,
Ленинские горы)
Шприц для ввода образцов в жидкостный
хроматограф
Весы аналитические типа ВЛР-200 ГОСТ 19401-74
Водоструйный насос ГОСТ 10696-75
Встряхиватель механический ТУ 64-1-1081-73
Гомогенизатор МРТУ 42-1505-63
Ротационный испаритель, тип ИР-1М ТУ 25-11-917-76
Сито с диаметром отверстий 1 мм
Баня водяная ТУ 46-22-603-75
Воронка Бюхнера ГОСТ 0147-73
Воронки делительные вместимостью 100, 250 мл ГОСТ 25336-82
Воронки для фильтрования стеклянные ГОСТ 8613-75
Колба Бунзена ГОСТ 5614-75
Колбы круглодонные на шлифе вместимостью ГОСТ 9737-70
100 и 250 мл
Колбы конические с притертыми пробками ГОСТ 25336-82
вместимостью 250 мл
Колбы мерные вместимостью 25, 50, 100 и 1000 мл ГОСТ 1770-74
Колбы грушевидные вместимостью 100 и 250 мл ГОСТ 25336-82
Пипетки мерные вместимостью 1, 2, 5 и 10 мл ГОСТ 20292-74Е
Пробирки градуированные с притертыми ГОСТ 10515-75
пробками вместимостью 5 и 10 мл
Цилиндры мерные вместимостью 50, 100, 250 ГОСТ 1770-74.
и 500 мл
2.4. Отбор проб
Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными
правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов
питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств
пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79).
Отобранные пробы почвы, сахарной свеклы, огурцов, картофеля,
томатов, перца и баклажанов хранят в стеклянной или полиэтиленовой
таре в холодильнике не более одного дня. Для длительного хранения
пробы почвы доводят до воздушно-сухого состояния и хранят в
холодильнике; пробы растительного материала хранят до анализа в
морозильной камере при температуре -18 -С. Пробы воды хранят при
температуре не выше 4 -С в течение 3 дней, при температуре -18 -С
- в течение месяца.
Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями
диаметром 1 мм, а растительный материал измельчают.
2.5. Подготовка к определению
2.5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей
Органические растворители перед началом работы очищают, сушат
и перегоняют в соответствии с типовыми методиками. Гексан
встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты
до тех пор, пока свежая порция кислоты не перестанет окрашиваться.
Затем гексан последовательно промывают водой, 2%-ным раствором
гидроксида натрия и снова водой, после чего его сушат над
гидроксидом натрия и перегоняют.
Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1 л
ацетона 10 г KMnO и 2 г К СО ).
4 2 3
Ацетонитрил сушат над пентаксидом фосфора и перегоняют;
отогнанный растворитель повторно перегоняют над углекислым калием.
Этилацетат промывают равным объемом 5%-ного раствора
двууглекислого натрия, сушат над хлористым кальцием и перегоняют.
2.5.2. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ
Отмеряют 250 мл ацетонитрила, переносят в колбу на 1000 мл,
добавляют 750 мл бидистиллированной воды, перемешивают, фильтруют,
дегазируют.
2.5.3. Кондиционирование колонки
Промывают колонку для ВЭЖХ смесью ацетонитрил-вода (23:75 по
объему) в течение 30 мин. при скорости подачи растворителя 0,6
мл/мин. Включают детектор и ждут стабилизации базовой линии (5 -
15 мин.).
2.5.4. Приготовление стандартных растворов
Основной стандартный раствор имидаклоприда с содержанием 100
мкг/мл готовят растворением 0,010 г препарата, содержащего 99,6%
д.в., в ацетонитриле в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранят в
холодильнике при температуре -12 -С не более месяца.
Рабочие стандартные растворы с концентрациями 0,04, 0,08, 0,20
и 0,40 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора
имидаклоприда соответствующим последовательным разбавлением
подвижной фазой для ВЭЖХ (п. 2.5.2). Рабочие растворы хранят в
холодильнике не более одного дня.
При изучении полноты открывания имидаклоприда в модельных
матрицах используются ацетонитрильные растворы вещества.
2.5.5. Построение калибровочного графика
Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа
вводят по 50 мкл рабочего стандартного раствора имидаклоприда с
концентрацией 0,04; 0,08; 0,20 и 0,40 мкг/мл. Осуществляют не
менее 5 параллельных измерений и находят среднее значение высоты
хроматографического пика для каждой концентрации. Строят
калибровочный график зависимости высоты хроматографического пика в
мм от концентрации имидаклоприда в растворе в мкг/мл.
2.5.6. Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта
В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним
диаметром 1,8 см вставляют тампон из стекловаты, закрывают кран и
вносят суспензию 5 г силикагеля в 20 мл смеси гексан-этилацетат
(4:6 по объему). Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента
и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см.
Колонку последовательно промывают 50 мл смеси гексан-этилацетат
(2:8 по объему) и 30 мл смеси гексан-этилацетат (4:6 по объему) со
скоростью 1 - 2 капли в секунду, после чего она готова к работе.
2.5.7. Проверка хроматографического поведения имидаклоприда на
колонке с силикагелем
В круглодонную колбу емкостью 10 мл отбирают 0,1 мл
стандартного раствора имидаклоприда с концентрацией 10 мкг/мл.
Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в
3 мл элюента N 1 и наносят на колонку. Промывают колонку 50 мл
элюента N 1 (гексан-этилацетат, 4:6), затем 60 мл элюента N 2
(гексан-этилацетат, 2:8) со скоростью 1 - 2 капли в секунду.
Отбирают фракции по 10 мл каждая, упаривают, остаток растворяют в
2 мл подвижной фазы для ВЭЖХ (п. 2.5.2) и анализируют на
содержание имидаклоприда по п. 2.7.
Фракции, содержащие имидаклоприд, объединяют, упаривают
досуха, остаток растворяют в 4 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и вновь
анализируют по п. 2.7. Рассчитывают содержание имидаклоприда в
элюате, определяют полноту вымывания вещества из колонки и
необходимый для очистки экстракта объем элюента.
Примечание. Профиль вымывания имидаклоприда может меняться при
использовании новой партии сорбента и растворителей.
2.6. Описание определения
2.6.1. Экстракция имидаклоприда
2.6.1.1. Вода. 100 мл предварительно отфильтрованной воды
помещают в делительную воронку емкостью 250 мл и обрабатывают 10
мл гексана при встряхивании в течение 1 мин. Гексановый слой
отбрасывают и водную фазу экстрагируют дихлорметаном трижды
(30 + 30 + 20 мл). Объединенную органическую фазу промывают в
делительной воронке 20 мл 0,05 М раствора К СО , а затем
2 3
пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают на
роторном вакуумном испарителе досуха при температуре 30 -С. Сухой
остаток растворяют в 1 мл подвижной фазы для ВЭЖХ (п. 2.5.2) и
анализируют по п. 2.7.
2.6.1.2. Почва. Навеску (20 г) воздушно-сухой почвы помещают в
коническую колбу емкостью 250 мл, приливают 100 мл смеси
ацетон-вода (3:1 по объему) и суспензию перемешивают в течение 1 ч
на аппарате для встряхивания. Добавляют 2 г целита и фильтруют под
вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Осадок
переносят в колбу, приливают 50 мл указанной выше смеси,
перемешивают 30 мин. на аппарате для встряхивания и суспензию
фильтруют через бумажный фильтр. Из объединенного экстракта
отбирают аликвоту раствора (около 35 мл), эквивалентную 5 г почвы.
Дальнейшую очистку проводят по п. п. 2.6.2 и 2.6.3.
2.6.1.3. Сахарная свекла, картофель, огурцы, томаты, перец,
баклажаны. К навеске (25 г) измельченного материала добавляют 125
мл смеси ацетон-вода (3:1 по объему) и гомогенизируют 3 мин. при
10000 об./мин. К суспензии добавляют 2 г целита и фильтруют под
вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу на 250
мл. Осадок на фильтре промывают 50 мл указанного выше водного
ацетона. Из объединенного экстракта отбирают аликвоту раствора
(около 35 мл), эквивалентную 5 г растительной ткани. Дальнейшую
очистку проводят по п. п. 2.6.2 и 2.6.3.
2.6.2. Очистка экстракта
Отобранные аликвоты растительного (из п. 2.6.1.3) и почвенного
(из п. 2.6.1.2) экстрактов упаривают до объема 5 - 7 мл на
роторном испарителе при температуре 30 -С. Водный остаток
переносят в делительную воронку вместимостью 100 мл, приливают 40
мл бидистиллированной воды, 10 мл гексана и смесь встряхивают в
течение 1 мин. Органический слой отбрасывают. Обработку водной
фазы гексаном повторяют еще раз. Затем водную фазу трижды
обрабатывают дихлорметаном (30 + 30 + 20 мл) при встряхивании.
Объединенный дихлорметановый экстракт промывают в делительной
воронке 20 мл 0,05 М раствора К СО , а затем пропускают через слой
2 3
безводного сульфата натрия и упаривают досуха на роторном
испарителе при температуре 30 -С.
2.6.3. Очистка на колонке с силикагелем
Остаток в колбе, полученный при упаривании очищенных по п.
2.6.2 экстрактов почвы или растительного материала, количественно
переносят тремя порциями (1 мл) смеси гексан-этилацетат (4:6 по
объему) в подготовленную хроматографическую колонку (п. 2.5.6).
Колонку промывают 30 мл смеси гексан-этилацетат (4:6 по объему),
которые отбрасывают. Имидаклоприд элюируют 50 мл смеси
гексан-этилацетат (2:8 по объему) и собирают элюат в грушевидную
колбу емкостью 100 мл. Раствор упаривают досуха на роторном
испарителе при температуре 30 -С. Сухой остаток растворяют в 2,5
мл подвижной фазы для ВЭЖХ (п. 2.5.2) и анализируют на содержание
имидаклоприда по п. 2.7.
Примечание. При использовании новой партии сорбента или
растворителей проводится проверка хроматографического поведения
имидаклоприда на колонке с силикагелем.
2.7. Условия хроматографирования
Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором Altex
(США).
Колонка стальная длиной 15 см, внутренним диаметром 4 мм,
содержащая Диасорб 130-С10СN, зернением 5 мкм.
Температура колонки: комнатная.
Подвижная фаза: ацетонитрил-вода (25:75 по объему).
Скорость потока элюента: 0,6 мл/мин.
Рабочая длина волны: 268 нм.
Чувствительность: 0,02 ед. абсорбции на шкалу.
Объем вводимой пробы: 50 мкл.
Время выхода имидаклоприда: 6 мин. 45 с.
Линейный диапазон детектирования: 2 - 20 нг.
Образцы, дающие пики большие чем стандартный раствор с
концентрацией 0,4 мкг/мл, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.
Альтернативная неподвижная фаза: Диасорб 130-С16 Т (5 мкм).
Подвижная фаза: метанол-вода (50:50 по объему).
Скорость потока элюента: 0,7 мл/мин.
Время выхода имидаклоприда: 5 мин. 20 с.
2.8. Обработка результатов анализа
Содержание имидаклоприда рассчитывают методом абсолютной
калибровки по формуле:
Н А V
1
Х = ------,
Н m
0
где:
Х - содержание имидаклоприда в пробе, мг/кг или мг/куб. дм;
Н - высота пика образца, мм;
1
Н - высота пика стандарта, мм;
0
А - концентрация стандартного раствора имидаклоприда, мкг/мл;
V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования,
мл;
m - масса или объем анализируемой части образца, г или мл (для
воды - 100 мл; для почвы и растительного материала - 5 г).
3. Требования техники безопасности
Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при
работе с органическими растворителями, токсичными веществами,
электронагревательными приборами.
4. Контроль погрешности измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений
осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ
"Внутренний контроль качества результатов количественного
химического анализа".
5. Разработчики
Макеев А.М., к. биол. н.; Дубовая Л.В.
ВНИИ фитопатологии, 143050, Московская обл., п/о Большие
Вяземы, тел. 592-92-20.
|
