Законы России
 
Навигация
Популярное в сети
Курсы валют
18.10.2017
USD
57.34
EUR
67.46
CNY
8.67
JPY
0.51
GBP
76.15
TRY
15.68
PLN
15.95
 

МЕТОД МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ИЗМЕРЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ КЛЕТОК МИКРООРГАНИЗМА TRICHODERMA VIRIDE 44-11-62/3 ПРОДУЦЕНТА КОМПЛЕКСА ЦЕЛЛЮЛОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ В АТМОСФЕРНОМ ВОЗДУХЕ НАСЕЛЕННЫХ МЕСТ. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ. МУК 4.2.1775-03 (УТВ. ГЛАВНЫМ ГОСУДАРСТВЕННЫМ САНИТАРНЫМ ВРАЧОМ РФ 24.10.2003)

Текст документа с изменениями и дополнениями по состоянию на ноябрь 2007 года

Обновление

Правовой навигатор на www.LawRussia.ru

<<<< >>>>


                                                             Утверждаю
                                               Главный государственный
                                                       санитарный врач
                                                 Российской Федерации,
                                                    Первый заместитель
                                              Министра здравоохранения
                                                  Российской Федерации
                                                          Г.Г.ОНИЩЕНКО
                                                  24 октября 2003 года
   
                                                       Дата введения -
                                                   1 декабря 2003 года
   
            4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
   
         МЕТОД МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ИЗМЕРЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ КЛЕТОК
        МИКРООРГАНИЗМА TRICHODERMA VIRIDE 44-11-62/3 - ПРОДУЦЕНТА
           КОМПЛЕКСА ЦЕЛЛЮЛОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ В АТМОСФЕРНОМ
                         ВОЗДУХЕ НАСЕЛЕННЫХ МЕСТ
   
                          МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
                             МУК 4.2.1775-03
   
       1.    Разработаны    Российским   государственным   медицинским
   университетом (к.б.н. Н.И. Шеиной).
       2.  Утверждены  Первым  заместителем  министра  здравоохранения
   Российской  Федерации  -  Главным государственным санитарным врачом
   Российской Федерации 24 октября 2003 г.
       3. Введены в действие с 1 декабря 2003 г.
       4. Введены впервые.
   
                 1. Общие положения и область применения
   
       Настоящие    Методические   указания   устанавливают   методику
   проведения      микробиологического     количественного     анализа
   концентрации  клеток  штамма  -  Trichoderma  viride  44-11-62/3  -
   продуцента   комплекса   целлюлолитических   ферментов  (целлюлаза,
   ксиланаза)  в  атмосферном  воздухе  населенных  мест  в  диапазоне
   концентраций от 100 до 5000 клеток в 1 куб. м воздуха.
       Методические    указания    разработаны    в   соответствии   с
   требованиями  ГОСТ  17.2.4.02-81  "Охрана природы. Атмосфера. Общие
   требования  к  методам  определения  загрязняющих веществ" и ГОСТ Р
   8.563-96 "Методики выполнения измерений".
       Методические    указания   предназначены   для   применения   в
   лабораториях     предприятий,     организаций     и     учреждений,
   аккредитованных   в   установленном  порядке  на  право  проведения
   микробиологических исследований.
       Методические   указания   одобрены   и   рекомендованы  секцией
   "Гигиенические   аспекты  биотехнологии  и  микробного  загрязнения
   окружающей  среды"  Проблемной  комиссии  "Научные  основы  гигиены
   окружающей среды".
   
                   2. Характеристика штамма-продуцента
                      Trichoderma viride 44-11-62/3
   
       На  агаризованной среде сусло-агар (содержание солодового сусла
   5  -  6-  по  Баллингу)  на  5 день развития микроорганизм образует
   характерные  колонии до 5,0 - 5,5 см в диаметре с гладкой подошвой,
   слегка  приподнятые над поверхностью среды, не врастающие в агар, с
   волнистым   краем,  пушистым  воздушным  мицелием,  который  покрыт
   спорами   лимонно-желтого   цвета.  На  3  день  развития  в  среду
   выделяется  ярко-желтый  пигмент  лимонного  оттенка.  Гифы мицелия
   бесцветные, септированные, многократно ветвистые.
   
       Систематическое положение микроорганизма
   
       Класс                           Fungi imperfecti
       Порядок                         Hyphomycetales
       Род                             Trichoderma
       Вид                             viride
       Штамм                           44-11-62/3
   
       Штамм     Trichoderma     viride    44-11-62/3    получен    во
   ВНИИбиотехнология   в   лаборатории  Биосинтеза  ферментов  методом
   индуцированной     селекции    с    применением    этиленимина    и
   нитрозометилмочевины  из  исходной культуры Trichoderma viride 44 -
   продуцента целлюлазы и депонирован в ЦМПМ ВНИИгенетика.
       Штамм-продуцент     синтезирует     высокоактивный     комплекс
   целлюлолитических  ферментов для производства ферментного препарата
   целловиридин  Г3х.  Максимальная активность целлюлазы составляет 35
   ед./мл, ксиланазы - 42 ед./мл.
       Штамм-продуцент   растет  на  жидких  и  агаризованных  средах.
   Культивирование  гриба  происходит  5 суток при температуре 36 - 38
   -С,  затем  5  суток  при  комнатной температуре. Для размножения и
   хранения используется сусло-агар 5 - 6 -Б, рН среды - 5,0 - 6,0.
       Предельно  допустимая  концентрация (ПДК) в атмосферном воздухе
   населенных мест - 200 кл./куб. м, пометка А.
   
                          3. Пределы измерений
   
       Методика  обеспечивает  выполнение  измерений количества клеток
   штамма-продуцента  в  атмосферном  воздухе в диапазоне концентраций
   от  100  до  5000  клеток  в  1  куб.  м  воздуха при доверительной
   вероятности 0,95.
   
                           4. Метод измерений
   
       Прямой  метод  измерения концентрации штамма-продуцента основан
   на   аспирации   из  воздуха  микробных  клеток  (спор,  фрагментов
   мицелия)  на  поверхность  плотной  питательной  среды сусло-агар и
   подсчета    выросших    колоний   по   культурально-морфологическим
   признакам на день развития.
       Косвенный   метод   измерения   концентрации  штамма-продуцента
   основан  на  аспирации  из  воздуха микробных клеток на поверхность
   плотной  питательной  селективной среды и подсчета выросших колоний
   по  зонам  просветления, образующихся вокруг каждой колонии штамма,
   как   результат   продукции   целлюлазы   на   среде  с  окрашенной
   целлюлозой.
   
           5. Средства измерений, вспомогательные устройства,
                          реактивы и материалы
   
       При   выполнении   измерений   применяют   следующие   средства
   измерений, вспомогательные устройства и материалы.
   
                        5.1. Средства измерений,
                  вспомогательные устройства, материалы
   
   Прибор для бактериологического анализа              ТУ 64-12791-77
   воздуха, модель 818 (щелевой прибор Кротова)
   Термостаты электрические суховоздушные
   или водяные
   Автоклав электрический                              ГОСТ 9586-75
   Бокс, оборудованный бактерицидными лампами
   Холодильник бытовой
   Весы лабораторные, аналитические типа ВЛА-200
   Микроскоп биологический с иммерсионной
   системой типа "Биолам" Л-211
   Лупа с увеличением х10                              ГОСТ 25706-83
   Чашки Петри бактериологические плоскодонные,
   стеклянные, диаметром 100 мм
   Пробирки биологические                              ГОСТ 10515-75
   вместимостью 20 и 35 мл
   Пипетки мерные на 1, 5 и 10 мл                      ГОСТ 10515-75
   Пипетки мерные на 1, 5 и 10 мл                      ГОСТ 1770-74
   Колбы конические вместимостью 250 и 500 мл          ГОСТ 1770-74
   Секундомер                                          ГОСТ 9586-75
   Барометр                                            ГОСТ 24696-79
   Марля медицинская                                   ГОСТ 9412-77
   Вата медицинская гигроскопическая                   ГОСТ 25556-81
   
                         5.2. Реактивы, растворы
   
   Агаризованное пивное сусло 5 - 6 -Б
   для штамма-продуцента (агар - 1,8%, рН 5,0 - 6,0,
   режим стерилизации 1,1 - 1,2 ати в течение 30 мин.)
   Молочная кислота,                                   ГОСТ 490-79
   синоним - альфа-оксипропионовая
   кислота (из расчета 0,4 мл на 100 мл среды
   сусло-агар для подавления посторонней
   бактериальной флоры)
   Бенгальский розовый
   Диметилсульфоксид
   Спирт этиловый ректификат                           ГОСТ 5962-67
   Селективная среда для штамма-продуцента,
   состав среды: КН РО  - 1 г; МgSО  7Н О - 0,5 г;
                   2  4            4   2
   (NН ) SО  - 0,7 г; целлюлоза порошковая
      4 2  4
   в пересчете на сухое вещество - 0,9 г; лактоза
   - 0,3 г; дрожжевой экстракт - 0,5 г; агар - 18 г;
   вода дистиллированная - до 1000 мл
   
                       6. Требования безопасности
   
       При  выполнении измерений концентрации клеток штамма-продуцента
   в атмосферном воздухе соблюдают следующие требования:
       6.1.  Правила  техники  безопасности  при  работе с химическими
   реактивами по ГОСТ 12.1.005-88.
       6.2.  Электробезопасность  при  работе  с электроустановками по
   ГОСТ 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора.
       6.3.  "Инструкции  по  устройству,  требованиям  безопасности и
   личной   гигиены   при  работе  в  микробиологических  лабораториях
   предприятий микробиологической промышленности" (1977).
       6.4.  Все  виды  работ  с реактивами проводят только в вытяжном
   шкафу  при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом
   осуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами.
   
                 7. Требования к квалификации операторов
   
       К  выполнению  измерений  и  обработке их результатов допускают
   лиц  с  высшим  или  средним  специальным  образованием,  прошедших
   соответствующую  подготовку  и  имеющих  навыки  работы  в  области
   микробиологических исследований.
   
                          8. Условия измерений
   
       Процессы  приготовления  растворов  и подготовки проб к анализу
   проводят  в  нормальных  условиях при температуре воздуха (20 +/- 5
   -С),  атмосферном давлении 630 - 800 мм рт. ст. и влажности воздуха
   не более 80%.
   
                         9. Проведение измерения
   
                    9.1. Условия отбора проб воздуха
   
       Для  определения  концентрации  клеток штамма-продуцента воздух
   аспирируют  при  помощи  аппарата Кротова со скоростью 10 л/мин. на
   поверхность  плотной  питательной среды. Время аспирации воздуха (5
   -   20   мин.)   зависит   от  предполагаемой  концентрации  клеток
   продуцента  (прямой  метод  позволяет  учитывать  на  чашке  до 200
   колоний продуцента, косвенный - до 30 - 50 колоний на чашке).
       Аппарат  Кротова  перед  каждым отбором пробы воздуха тщательно
   протирают  спиртом.  Особенно  тщательно  обрабатывают  поверхность
   подвижного   диска   и   внутреннюю   стенку  прибора,  наружную  и
   внутреннюю   стенку   крышки.   На   подвижной  диск  устанавливают
   подготовленную  чашку  Петри  со  средой, одновременно снимая с нее
   крышку.  Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой
   недопустимо.  После  отбора  пробы воздуха и остановки диска прибор
   открывают,  быстро  снимают  чашку  Петри  и  закрывают  крышкой от
   данной  чашки.  На  дне  чашки  Петри  стеклографом  отмечают точку
   контроля, время аспирации и дату отбора пробы.
   
                         9.2. Выполнение анализа
   
       При  выполнении анализа воздуха прямым методом среду сусло-агар
   расплавляют,  остужают до 50 - 60 -С, добавляют молочной кислоты из
   расчета  0,4  мл  на  100  мл  среды  (для  подавления  посторонней
   бактериальной  микрофлоры),  тщательно  перемешивают  и разливают в
   чашки Петри.
       При  выполнении  анализа  воздуха косвенным методом селективную
   среду   расплавляют,   остужают   до   60  -С,  добавляют  50  мг/л
   бенгальского  розового,  растворенного  в  1 мл диметилсульфоксида,
   тщательно  перемешивают  и  разливают  по  10 мл в стеклянные чашки
   Петри    на   горизонтальной   поверхности.   Бенгальский   розовый
   предназначен   для   специфического  окрашивания  целлюлозы  и  для
   ограничения разрастания колоний на чашках.
       Чашки  с  застывшей  средой  помещают  в термостат на сутки при
   температуре  37  -С, после чего проросшие чашки бракуют, стерильные
   чашки используют для контроля воздуха.
       После  отбора  проб воздуха чашки Петри помещают в термостат на
   42   -С   (для   интенсификации  развития  гриба).  Через  3  суток
   производят         подсчет        выросших        колоний        по
   культурально-морфологическим  признакам  и  характерной пигментации
   среды  (прямой  метод) или зон просветления вокруг выросших колоний
   продуцента    (косвенный    метод)    как    результат    продукции
   целлюлолитических ферментов на среде с окрашенной целлюлозой.
   
                  10. Вычисление результатов измерения
   
       Расчет  концентрации  клеток продуцента в пересчете на 1 куб. м
   воздуха производят по формуле:
   
                            N х 1000
                        Х = --------, кл./куб. м,
                               V
   
       где:
       Х - концентрация клеток продуцента в воздухе;
       N - количество колоний продуцента, выросших на чашке;
       1000 - коэффициент пересчета на 1 куб. м воздуха;
       V   -   объем   воздуха,  л  (произведение  скорости  на  время
   аспирации).
   
                  11. Оформление результатов измерений
   
       Результаты измерений оформляют протоколом по форме.
   
                               Протокол N
               количественного микробиологического анализа
             штамма-продуцента Trichoderma viride 44-11-62/3
                  в атмосферном воздухе населенных мест
   
       1. Дата проведения анализа _______________________________
       2. Место отбора пробы ____________________________________
       3. Название лаборатории __________________________________
       4. Юридический адрес организации _________________________
   
                 Результаты микробиологического анализа
   
   -----------------T----------------------T------------------------¬
   ¦Шифр или N пробы¦     Определяемый     ¦Концентрация, кл./куб. м¦
   ¦                ¦     микроорганизм    ¦                        ¦
   +----------------+----------------------+------------------------+
   L----------------+----------------------+-------------------------
   
       Ответственный исполнитель
       Научный руководитель
   
                            Список литературы
   
       1.   Руководство   по   контролю   загрязнения   атмосферы:  РД
   52.04.186-96. М., 1991. 693 с.
       2. ГОСТ Р 8.563-96. ГСИ "Методики выполнения измерений".
       3.  Положение  об  организации работы по технике безопасности в
   микробиологической промышленности. М., 1980. 27 с.
       4.  Инструкции по устройству, требованиям безопасности и личной
   гигиены  при  работе  в микробиологических лабораториях предприятий
   микробиологической промышленности. М., 1977. 7 с.
       5.   ГОСТ   17.2.4.02-81   "Охрана  природы.  Атмосфера.  Общие
   требования  к методам определения загрязняющих веществ". М.: Изд-во
   стандартов, 1981. 3 с.
       6. Бабьева И.П., Зенова Г.М. Биология почв. М.: МГУ. 122 с.
   
   

Списки

Право 2010


Новости партнеров
Счетчики
 
Популярное в сети
Реклама
Курсы валют
18.10.2017
USD
57.34
EUR
67.46
CNY
8.67
JPY
0.51
GBP
76.15
TRY
15.68
PLN
15.95
Разное