Законы России
 
Навигация
Популярное в сети
Курсы валют
16.08.2016
USD
64.21
EUR
71.73
CNY
9.67
JPY
0.64
GBP
82.94
TRY
21.72
PLN
16.8
 

МЕТОД МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ИЗМЕРЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ КЛЕТОК МИКРООРГАНИЗМА PENICILLIUM CANESCENS F-832 ВКПМ ПРОДУЦЕНТА КСИЛАНАЗЫ В АТМОСФЕРНОМ ВОЗДУХЕ НАСЕЛЕННЫХ МЕСТ. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ. МУК 4.2.1774-03 (УТВ. ГЛАВНЫМ ГОСУДАРСТВЕННЫМ САНИТАРНЫМ ВРАЧОМ РФ 24.10.2003)

Текст документа с изменениями и дополнениями по состоянию на ноябрь 2007 года

Обновление

Правовой навигатор на www.LawRussia.ru

<<<< >>>>


                                                             Утверждаю
                                               Главный государственный
                                                       санитарный врач
                                                 Российской Федерации,
                                                    Первый заместитель
                                              Министра здравоохранения
                                                  Российской Федерации
                                                          Г.Г.ОНИЩЕНКО
                                                  24 октября 2003 года
   
                                                       Дата введения -
                                                   1 декабря 2003 года
   
            4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
   
         МЕТОД МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ИЗМЕРЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ КЛЕТОК
      МИКРООРГАНИЗМА PENICILLIUM CANESCENS F-832 ВКПМ - ПРОДУЦЕНТА
             КСИЛАНАЗЫ В АТМОСФЕРНОМ ВОЗДУХЕ НАСЕЛЕННЫХ МЕСТ
   
                          МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
                             МУК 4.2.1774-03
   
       1.    Разработаны    Российским   государственным   медицинским
   университетом (к.б.н. Н.И. Шеиной).
       2.  Утверждены  Первым  заместителем  министра  здравоохранения
   Российской  Федерации  -  Главным государственным санитарным врачом
   Российской Федерации 24 октября 2003 г.
       3. Введены в действие с 1 декабря 2003 г.
       4. Введены впервые.
   
                 1. Общие положения и область применения
   
       Настоящие    Методические   указания   устанавливают   методику
   проведения      микробиологического     количественного     анализа
   концентрации  клеток  штамма  Penicillium  canescens  F-832  ВКПМ -
   продуцента  ксиланазы  в  атмосферном  воздухе  населенных  мест  в
   диапазоне концентраций от 10 до 3000 клеток в 1 куб. м воздуха.
       Методические    указания    разработаны    в   соответствии   с
   требованиями  ГОСТ  17.2.4.02-81  "Охрана природы. Атмосфера. Общие
   требования к методам определения загрязняющих веществ".
       Методические    указания   предназначены   для   применения   в
   лабораториях     предприятий,     организаций     и     учреждений,
   аккредитованных   в   установленном  порядке  на  право  проведения
   микробиологических исследований.
   
              2. Характеристика штамма-продуцента ксиланазы
   
       Микроорганизм  Penicillium canescens F-832 является продуцентом
   фермента  ксиланазы.  Культура образует цепочки спор, обычно прямые
   с  гладкой  оболочкой.  Штамм  растет  на различных агаризованных и
   жидких  средах.  На сусло-агаре на 3 сутки роста при температуре 30
   -С  образует  округлые  радиально-складчатые  морщинистые колонии с
   кремовым  или сероватым налетом, диаметром 2 - 3 мм. На 4 - 5 сутки
   инкубации  размеры  колонии  достигают  5  -  7  мм, конфигурация и
   складчатость  колоний  не  изменяется, образуется воздушный мицелий
   со     спорами     бежевато-серого     цвета,    подошва    колоний
   оранжево-коричневая.
       Штамм   устойчив   практически   ко   всем   широко   известным
   антибиотикам.
       ПДК штамма в атмосферном воздухе 200 кл./куб. м, пометка А.
   
                          3. Пределы измерений
   
       Методика  обеспечивает  выполнения  измерений количества клеток
   продуцента  ксиланазы  в  атмосферном  воздухе  населенных  мест  в
   диапазоне  концентраций от 10 до 3000 клеток в 1 куб. м воздуха при
   доверительной вероятности 0,95.
   
                           4. Метод измерений
   
       Метод   основан  на  аспирации  из  воздуха  клеток  продуцента
   ксиланазы  на  поверхность  плотной  питательной  среды  и подсчете
   выросших колоний по типичным морфологическим признакам.
       Косвенный   метод   измерения   концентрации  штамма-продуцента
   основан  на  аспирации  из  воздуха микробных клеток на поверхность
   плотной  питательной  селективной среды и подсчете выросших колоний
   по  зонам  просветления, образующихся вокруг каждой колонии штамма,
   как   результат   продукции   ксиланазы   на   среде  с  окрашенной
   целлюлозой.
   
           5. Средства измерений, вспомогательные устройства,
                          реактивы и материалы
   
       При   выполнении   измерений   применяют   следующие   средства
   измерений, вспомогательные устройства и материалы.
   
                        5.1. Средства измерений,
                  вспомогательные устройства, материалы
   
   Прибор для бактериологического анализа воздуха,     ТУ 64-12791-77
   модель 818 (щелевой прибор Кротова)
   Термостаты электрические суховоздушные
   или водяные
   Автоклав электрический                              ГОСТ 9586-75
   Бокс, оборудованный бактерицидными лампами
   Холодильник бытовой
   Весы лабораторные аналитические типа ВЛА-200
   Микроскоп биологический с иммерсионной
   системой типа "Биолам" Л-211
   Лупа с увеличением х10                              ГОСТ 25706-83
   Чашки Петри бактериологические плоскодонные
   стеклянные диаметром 100 мм
   Пробирки биологические вместимостью 20 и 35 мл      ГОСТ 10515-75
   Пипетки мерные на 1, 5 и 10 мл                      ГОСТ 10515-75
   Пипетки мерные на 1, 5 и 10 мл                      ГОСТ 1770-74
   Колбы конические вместимостью 250 и 500 мл          ГОСТ 1770-74
   Секундомер                                          ГОСТ 9586-75
   Барометр                                            ГОСТ 24696-79
   Марля медицинская                                   ГОСТ 9412-77
   Вата медицинская гигроскопическая                   ГОСТ 25556-81
   
                         5.2. Реактивы, растворы
   
   Антибиотики: группы пенициллина,
   тетрациклина, цефалоспорина и др.,
   нистатин или амфотерицин.
   Спирт этиловый ректификат                           ГОСТ 5962-67
   Среда для штамма-продуцента:
   агаризованное пивное сусло 5 - 6 -Б
   для штамма-продуцента (агар - 1,8%,
   рН 5,9 - 6,1, режим стерилизации
   1,1 - 1,2 атм. в течение 30 мин.)
   Бенгальский розовый
   Диметилсульфоксид
   Селективная среда для штамма-продуцента,
   состав среды: КН РО  - 1 г; МgSО  7Н О - 0,5 г;
                   2  4            4   2
   (NН ) SО  - 0,7 г; целлюлоза порошковая
      4 2  4
   в пересчете на сухое вещество - 0,9 г;
   лактоза - 0,3 г; дрожжевой экстракт - 0,5 г;
   агар - 18 г; вода дистиллированная - до 1000 мл
   Спирт этиловый ректификат                           ГОСТ 5962-67
   
                       6. Требования безопасности
   
       При   выполнении   измерений   концентрации  клеток  продуцента
   ксиланазы   в   атмосферном   воздухе   населенных  мест  соблюдают
   следующие требования:
       6.1.  Правила  техники  безопасности  при  работе с химическими
   реактивами по ГОСТ 12.1.005-88.
       6.2.  Электробезопасность  при  работе  с электроустановками по
   ГОСТ 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора.
       6.3.  "Инструкции  по  устройству,  требованиям  безопасности и
   личной   гигиены   при  работе  в  микробиологических  лабораториях
   предприятий микробиологической промышленности" (1977).
       6.4.  Все  виды  работ  с реактивами проводят только в вытяжном
   шкафу  при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом
   осуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами.
   
                 7. Требования к квалификации операторов
   
       К  выполнению  измерений  и  обработке их результатов допускают
   лиц  с  высшим  или  средним  специальным  образованием,  прошедших
   соответствующую  подготовку  и  имеющих  навыки  работы  в  области
   микробиологических исследований.
   
                          8. Условия измерений
   
       Процессы  приготовления  растворов  и подготовки проб к анализу
   проводят  в  нормальных  условиях при температуре воздуха (20 +/- 5
   -С),  атмосферном давлении 630 - 800 мм рт. ст. и влажности воздуха
   не более 80%.
   
                         9. Проведение измерения
   
                    9.1. Условия отбора проб воздуха
   
       Для  определения  продуцента  ксиланазы  воздух  аспирируют при
   помощи  аппарата  Кротова  со  скоростью  10  л/мин. на поверхность
   плотной  питательной  среды.  Время аспирации воздуха (5 - 20 мин.)
   зависит от предполагаемой концентрации клеток продуцента.
       Аппарат  Кротова  перед  каждым отбором пробы воздуха тщательно
   протирают  спиртом.  Особенно  тщательно  обрабатывают  поверхность
   подвижного   диска   и   внутреннюю   стенку  прибора,  наружную  и
   внутреннюю   стенку   крышки.   На   подвижной  диск  устанавливают
   подготовленную  чашку  Петри  со  средой, одновременно снимая с нее
   крышку.  Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой
   недопустимо.  После  отбора  пробы воздуха и остановки диска прибор
   открывают,  быстро  снимают  чашку  Петри  и  закрывают  крышкой от
   данной  чашки.  На  дне  чашки  Петри  стеклографом  отмечают точку
   контроля, время аспирации и дату отбора пробы.
   
                         9.2. Выполнение анализа
   
       Метод  предполагает учет количества типичных по морфологическим
   признакам  колоний,  выросших  на 3 - 5 сутки после посева воздуха.
   Прямой   метод   позволяет   учитывать  на  чашке  до  200  колоний
   продуцента.
       Сусло-агар   расплавляют,   остужают   до   60   -С,  добавляют
   свежеприготовленный  в  стерильной  дистиллированной  воде  раствор
   одного  из  антибиотиков  из  расчета  50  мкл  на  1 мл среды (для
   подавления  посторонней  бактериальной  микрофлоры) и нистатина (10
   мкг/мл  для  подавления  грибковой флоры), тщательно перемешивают и
   разливают  по 10 - 15 мл в стеклянные чашки Петри на горизонтальной
   поверхности.  Чашки  с  застывшей  средой  помещают  в термостат на
   сутки  при  температуре  37 -С, после чего проросшие чашки бракуют,
   стерильные чашки используют для контроля воздуха.
       При  выполнении  анализа  воздуха косвенным методом селективную
   среду   расплавляют,   остужают   до   60  -С,  добавляют  50  мг/л
   бенгальского  розового,  растворенного  в  1 мл диметилсульфоксида,
   тщательно  перемешивают  и  разливают  по  10 мл в стеклянные чашки
   Петри    на   горизонтальной   поверхности.   Бенгальский   розовый
   предназначен   для   специфического  окрашивания  целлюлозы  и  для
   ограничения разрастания колоний на чашках.
       После  отбора  проб воздуха чашки Петри помещают в термостат на
   30  -С.  Через 72 часа производят подсчет выросших типичных колоний
   продуцента.      При      необходимости     культуру     подвергают
   микроскопированию.
   
                  10. Вычисление результатов измерения
   
       Расчет  концентрации  клеток продуцента в пересчете на 1 куб. м
   воздуха производят по формуле:
   
                              N х 1000
                          Х = --------, кл./куб. м,
                                 V
   
       где:
       Х - концентрация клеток продуцента в воздухе;
       N - количество колоний продуцента, выросших на чашке;
       1000 - коэффициент пересчета на 1 куб. м воздуха;
       V   -   объем   воздуха,  л  (произведение  скорости  на  время
   аспирации).
   
                  11. Оформление результатов измерений
   
       Результаты измерений оформляют протоколом по форме.
   
                               Протокол N
           количественного микробиологического анализа штамма
         Penicillium canescens F-832 ВКПМ - продуцента ксиланазы
                  в атмосферном воздухе населенных мест
   
       Дата проведения анализа __________________________________
       Место отбора пробы _______________________________________
       Название лаборатории _____________________________________
       Юридический адрес организации ____________________________
   
                 Результаты микробиологического анализа
   
   ------------------T--------------------T-------------------------¬
   ¦Шифр или N пробы ¦    Определяемый    ¦ Концентрация, кл./куб. м¦
   ¦                 ¦   микроорганизм    ¦                         ¦
   +-----------------+--------------------+-------------------------+
   L-----------------+--------------------+--------------------------
   
       Ответственный исполнитель
       Научный руководитель
   
                            Список литературы
   
       1.   Руководство   по   контролю   загрязнения   атмосферы:  РД
   52.04.186-96. М., 1991. 693 с.
       2. ГОСТ Р 8.563-96. ГСИ "Методики выполнения измерений".
       3.   ГОСТ   17.2.4.02-81   "Охрана  природы.  Атмосфера.  Общие
   требования  к методам определения загрязняющих веществ". М.: Изд-во
   стандартов, 1981. 3 с.
   
   

Списки

Право 2010


Новости партнеров
Счетчики
 
Популярное в сети
Реклама
Курсы валют
16.08.2016
USD
64.21
EUR
71.73
CNY
9.67
JPY
0.64
GBP
82.94
TRY
21.72
PLN
16.8
Разное