Законы России
 
Навигация
Популярное в сети
Курсы валют
14.07.2017
USD
60.18
EUR
68.81
CNY
8.87
JPY
0.53
GBP
77.88
TRY
16.83
PLN
16.22
 

МЕТОД МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ИЗМЕРЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ КЛЕТОК МИКРООРГАНИЗМА TRICHODERMA LONGIBRACHIATUM TW-1 ПРОДУЦЕНТА БЕТА-ГЛЮКАНАЗЫ В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ. МУК 4.2.1070-01 (УТВ. ГЛАВНЫМ ГОСУДАРСТВЕННЫМ САНИТАРНЫМ ВРАЧОМ РФ 20.09.2001)

Текст документа с изменениями и дополнениями по состоянию на ноябрь 2007 года

Обновление

Правовой навигатор на www.LawRussia.ru

<<<< >>>>


                                                             Утверждаю
                                               Главный государственный
                                                       санитарный врач
                                                 Российской Федерации,
                                                    Первый заместитель
                                              Министра здравоохранения
                                                  Российской Федерации
                                                          Г.Г.ОНИЩЕНКО
                                                 20 сентября 2001 года
   
                                                        Дата введения:
                                                 с момента утверждения
   
            4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
   
         МЕТОД МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ИЗМЕРЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ КЛЕТОК
      МИКРООРГАНИЗМА TRICHODERMA LONGIBRACHIATUM TW-1 - ПРОДУЦЕНТА
                  БЕТА-ГЛЮКАНАЗЫ В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ
   
                          МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
                             МУК 4.2.1070-01
   
       1.  Разработаны  к.м.н.  В.И.  Бобровым  (ВНЦ  по  безопасности
   биологически активных веществ).
       2.  Утверждены  и  введены  в  действие Главным государственным
   санитарным   врачом  Российской  Федерации  -  Первым  заместителем
   Министра здравоохранения Российской Федерации 20 сентября 2001 г.
       3. Введены впервые.
   
                 1. Общие положения и область применения
   
       Настоящие    методические   указания   устанавливают   методику
   проведения      микробиологического     количественного     анализа
   концентрации  клеток  штамма  -  Trichoderma longibrachiatum TW-1 -
   продуцента  бета-глюканазы  в  воздухе  рабочей  зоны  в  диапазоне
   концентраций от 100 до 6000 клеток в 1 куб. м воздуха.
       Методические    указания    разработаны    в   соответствии   с
   требованиями  ГОСТ  12.1.005-88  "ССБТ.  Воздух рабочей зоны. Общие
   санитарно-гигиенические  требования"  и  ГОСТ  Р 8.563-96 "Методики
   выполнения измерений".
       Методические    указания   предназначены   для   применения   в
   лабораториях     предприятий,     организаций     и     учреждений,
   аккредитованных   в   установленном  порядке  на  право  проведения
   микробиологических исследований.
   
           2. Характеристика штамма-продуцента бета-глюканазы
   
       Продуцент   бета-глюканазы   Trichoderma  longibrachiatum  TW-1
   относится  к  классу несовершенных грибов. Рост характерных колоний
   определяется   на   5   -   6  сутки.  На  агаризованной  среде  СМ
   микроорганизм  образует  характерные  колонии до 15 мм в диаметре с
   гладкой   подошвой,  не  врастающие  в  агар,  с  волнистым  краем,
   пушистым  воздушным  мицелием,  который  покрыт  спорами  белого  и
   желтого  цвета. Гифы мицелия бесцветные, септированные, многократно
   ветвистые. Оптимальная температура роста 28 - 30 -С.
       Предельно  допустимая концентрация (ПДК) в воздухе рабочей зоны
   - 5000 кл./куб. м, 3 класс опасности, пометка А.
   
                          3. Пределы измерений
   
       Методика  обеспечивает  выполнение  измерений количества клеток
   продуцента  бета-глюканазы  в  воздухе  рабочей  зоны  в  диапазоне
   концентраций  от  100  до  6000  клеток  в  1  куб.  м  воздуха при
   доверительной вероятности 0,95.
   
                           4. Метод измерений
   
       Метод   измерения  концентрации  штамма-продуцента  основан  на
   аспирации  из  воздуха  микробных клеток (спор, фрагментов мицелия)
   продуцента  бета-глюканазы на поверхность плотной питательной среды
   СМ  и подсчете выросших колоний по зонам просветления, образующихся
   вокруг    каждой    колонии    штамма   как   результат   продукции
   бета-глюканазы на среде с окрашенной целлюлозой.
   
           5. Средства измерений, вспомогательные устройства,
                          реактивы и материалы
   
       При   выполнении   измерений   применяют   следующие   средства
   измерений, вспомогательные устройства и материалы.
   
          5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства,
                                материалы
   
   Прибор для бактериологического анализа
   воздуха, модель 818 (щелевой прибор Кротова)        ТУ 64-12791 77
   Термостаты электрические суховоздушные или
   водяные
   Автоклав электрический                              ГОСТ 9586-75
   Бокс, оборудованный бактерицидными лампами
   Холодильник бытовой
   Весы лабораторные аналитические типа ВЛА-200
   Микроскоп биологический с иммерсионной
   системой типа "Биолам" Л-211
   Лупа с увеличением х 10                             ГОСТ 25706-83
   Чашки Петри бактериологические плоскодонные
   стеклянные диаметром 100 мм
   Пробирки биологические вместимостью 20 и 35 мл      ГОСТ 10515-75
   Пипетки мерные на 1, 5 и 10 мл                      ГОСТ 10515-75
   Пипетки мерные на 1, 5 и 10 мл                      ГОСТ 1770-74
   Колбы конические вместимостью 250 и 500 мл          ГОСТ 1770-74
   Секундомер                                          ГОСТ 9586-75
   Барометр                                            ГОСТ 24696-79
   Марля медицинская                                   ГОСТ 9412-77
   Вата медицинская гигроскопическая                   ГОСТ 25556-81.
   
                         5.2. Реактивы, растворы
   
   Бенгальский розовый
   Диметилсульфоксид
   Спирт этиловый ректификат                           ГОСТ 5962-67
   Селективная среда для штамма-продуцента
   бета-глюканазы
   Состав среды: KH PO  - 1 г; MgSO  х 7Н О -
                   2  4            4     2
   0,5 г; (NH ) SO  - 5 г; целлюлоза порошковая в
             4 2  4
   пересчете на сухое вещество - 5 г; глюкоза -
   5 г; дрожжевой экстракт - 0,5 г; агар - 20 г;
   вода дистиллированная - до 1000 мл.
   
                       6. Требования безопасности
   
       При   выполнении   измерений   концентрации  клеток  продуцента
   бета-глюканазы в воздухе рабочей зоны соблюдают:
       -   правила  техники  безопасности  при  работе  с  химическими
   реактивами по ГОСТ 12.1.005-88;
       -  правила  электробезопасности при работе с электроустановками
   по ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцию по эксплуатации прибора;
       -   требования,   изложенные   в   руководстве   "Положение  об
   организации  работы  по  технике  безопасности в микробиологической
   промышленности" (1980);
       -    положения    "Инструкций    по   устройству,   требованиям
   безопасности  и  личной  гигиены  при  работе  в микробиологических
   лабораториях    предприятий    микробиологической   промышленности"
   (1977).
       Все  виды  работ  с реактивами проводят только в вытяжном шкафу
   при   работающей  вентиляции,  работа  с  биологическим  материалом
   осуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами.
   
                 7. Требования к квалификации операторов
   
       К  выполнению  измерений и обработке их результатов допускаются
   лица  с  высшим  или  средним  специальным  образованием, прошедшие
   соответствующую  подготовку  и  имеющие  навыки  работы  в  области
   микробиологических исследований.
   
                          8. Условия измерений
   
       Процессы  приготовления  растворов  и подготовки проб к анализу
   проводят  в  нормальных условиях при температуре воздуха (20 +/- 5)
   -С,  атмосферном  давлении 630 - 800 мм рт. ст. и влажности воздуха
   не более 80%.
   
                         9. Проведение измерений
   
                    9.1. Условия отбора проб воздуха
   
       Для  определения  продуцента  бета-глюканазы  воздух аспирируют
   при  помощи  аппарата Кротова со скоростью 10 л/мин. на поверхность
   плотной  питательной  среды.  Время аспирации воздуха (1 - 10 мин.)
   зависит  от предполагаемой концентрации клеток продуцента, а прямой
   метод позволяет учитывать на чашке до 200 колоний продуцента.
       Аппарат  Кротова  перед  каждым отбором пробы воздуха тщательно
   протирают  спиртом.  Особенно  тщательно  обрабатывают  поверхность
   подвижного   диска   и   внутреннюю   стенку  прибора,  наружную  и
   внутреннюю стенку крышки.
       На  подвижный  диск устанавливают подготовленную чашку Петри со
   средой,   одновременно  снимая  с  нее  крышку.  Прибор  закрывают.
   Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо.
       После   отбора   пробы   воздуха   и  остановки  диска,  прибор
   открывают,  быстро  снимают  чашку  Петри  и  закрывают  крышкой от
   данной  чашки.  На  дне  чашки  Петри  стеклографом  отмечают точку
   контроля, время аспирации и дату отбора пробы.
   
                         9.2. Выполнение анализа
   
       Метод  предполагает  учет количества колоний, выросших на 2 - 3
   сутки  после  посева  проб  воздуха, по зонам просветления, которые
   являются  результатом  образования  целлюлаз на срезах с окрашенной
   целлюлозой в присутствии повышенного количества глюкозы.
       Существенным  признаком  промышленных мутантов рода Trichoderma
   является  пониженная катаболическая репрессия по сравнению с дикими
   мутантами  Trichoderma.  В  то  время как у диких штаммов глюкоза в
   концентрациях   выше   0,02  г/л  практически  полностью  подавляет
   образование  целлюлаз в глубинной культуре, у промышленных мутантов
   подавление   образования   целлюлаз  начинается  при  концентрациях
   глюкозы выше 1 г/л.
       Селективную  среду расплавляют, остужают до 60 -С, добавляют 50
   мг/л     бенгальского    розового,    растворенного    в    1    мл
   диметил-сульфоксида,  тщательно перемешивают и разливают по 10 мл в
   стеклянные  чашки  Петри на горизонтальной поверхности. Бенгальский
   розовый  предназначен  для  специфического  окрашивания целлюлозы и
   для  ограничения  разрастания  колоний на чашках. Чашки с застывшей
   средой  помещают  в термостат на сутки при температуре 37 -С, после
   чего  проросшие  чашки  бракуют,  стерильные  чашки  используют для
   контроля воздуха.
       После  отбора проб воздуха чашки Петри помещают в термостат при
   28  -  30  -С  на  2  дня и затем при температуре 44 -С на 18 ч для
   образования вокруг колоний зон просветления.
       Количественный    учет   микробных   клеток   штамма-продуцента
   бета-глюканазы   проводится   методом  подсчета  зон  просветления,
   образующихся  вокруг колоний микроорганизма как результат продукции
   глюканазы на среде СМ с окрашенной целлюлозой.
   
                  10. Вычисление результатов измерений
   
       Расчет  концентрации  клеток продуцента в пересчете на 1 куб. м
   воздуха производят по формуле:
   
                            N х 1000
                        Х = --------, кл./куб. м,
                               V
   
       где:
       Х - концентрация клеток продуцента в воздухе;
       N - количество колоний продуцента, выросших на чашке;
       1000 - коэффициент пересчета на 1 куб. м воздуха;
       V   -   объем   воздуха,  л  (произведение  скорости  на  время
   аспирации).
   
                  11. Оформление результатов измерений
   
       Результаты измерений оформляют протоколом по форме:
   
                             Протокол N ___
               количественного микробиологического анализа
           штамма-продуцента Trichoderma longibrachiatum TW-1
                         в воздухе рабочей зоны
   
       Дата проведения анализа ______________________________________
       Место отбора пробы ___________________________________________
       Название лаборатории _________________________________________
       Юридический адрес организации ________________________________
   
                 Результаты микробиологического анализа
   
   -------------------T--------------------T------------------------¬
   ¦ Шифр или N пробы ¦    Определяемый    ¦Концентрация, кл./куб. м¦
   ¦                  ¦   микроорганизм    ¦                        ¦
   +------------------+--------------------+------------------------+
   L------------------+--------------------+-------------------------
   
       Ответственный исполнитель
       Научный руководитель
   
                            Список литературы
   
       1.   ГОСТ   12.1.005-88   "ССБТ.  Воздух  рабочей  зоны.  Общие
   санитарно-гигиенические требования".
       2. ГОСТ Р 8.563-96 "ГСИ. Методики выполнения измерений".
       3.  Положение  об  организации работы по технике безопасности в
   микробиологической промышленности (М., 1980, 27 с.).
       4.  Инструкции по устройству, требованиям безопасности и личной
   гигиены  при  работе  в микробиологических лабораториях предприятий
   микробиологической промышленности (М., 1977, 7 с.).
   
   

Списки

Право 2010


Новости партнеров
Счетчики
 
Популярное в сети
Реклама
Курсы валют
14.07.2017
USD
60.18
EUR
68.81
CNY
8.87
JPY
0.53
GBP
77.88
TRY
16.83
PLN
16.22
Разное