Утверждаю
Заместитель Руководителя
Департамента ветеринарии
Минсельхозпрода России
В.В.СЕЛИВЕРСТОВ
4 октября 1999 г. N 13-4-2/1750
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ БИОХИМИЧЕСКОГО ПОТРЕБЛЕНИЯ КИСЛОРОДА
ПРИ САНИТАРНОЙ ОЦЕНКЕ ВОДЫ В РЫБОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ВОДОЕМАХ
1. Общие положения
1.1. Методические указания предназначены для оценки
ветеринарно-санитарного состояния рыбохозяйственных воодоемов
методом определения биохимического потребления кислорода зза пять
суток (БПК ), который позволяет установить загрязненность вводы по
5
количеству кислорода, израсходованного за пять суток на аээробное
биохимическое разложение органических веществ, содержащщихся в
исследуемой воде (при температуре 20 -С, в мг/л О ).
2
1.2. Метод БПК может быть использован в каачестве
5
дополнительного для санитарной оценки воды рыбохозяйсттвенных
водоемов. Простота метода позволяет проводить исследдование
непосредственно в хозяйстве. Особенно важны эти исследованния при
выборе водоисточника для сооружения новых хозяйств.
2. Отбор проб
2.1. Пробы воды берут в чистые стеклянные сосуды емкостью 1 -
2 л с глубины 0,25 - 0,5 м от поверхности воды и не менее 10 - 15
см от дна, не допуская взмучивания грунта. Из проруби пробы берут
на глубине 10 - 15 см от нижней поверхности льда. Для отбора
глубинных проб применяют батометры Рутнера, Францева и др. Перед
взятием проб сосуд два-три раза ополаскивают водой из исследуемого
водоема.
2.2. Из больших водоемов пробы берут в нескольких местах с
учетом гидробиологических особенностей каждого участка (заросли,
заболоченные участки, плесы и т.д.), в однотипных по
гидрохимическим показателям водоемах - в одном-двух местах на
расстоянии 3 - 4 м от берега.
2.3. Пробы для определения БПК не консервирруют. К
5
исследованию приступают не позднее чем через 5 часов с ммомента
отбора. При хранении проб при 3 - 4 -С допускается провведение
исследований через 12 часов.
2.4. К отобранной пробе прилагают сопроводительный документ, в
котором указывают наименование и местонахождение водоема, дату
отбора пробы, место (расстояние от берега, глубина);
метеорологические условия (температура воды в день отбора пробы и
за последние 10 дней, сила и направление ветра); особые
обстоятельства, которые могут повлиять на результаты исследования;
должность и фамилию лица, производившего отбор пробы.
3. Определение БПК
5
3.1. Определение БПК проводится в первоначальнойй или
5
соответственно разбавленной пробе по разности между содерржанием
кислорода до и после инкубации в течение пяти суток без ддоступа
кислорода и света.
3.2. Определение кислорода в воде можно проводить лююбым из
существующих методов - йодометрическим определением по Виинклеру
(см. Приложение 1), пирофосфатным, полярографическимм или
электрометрическим с применением автоматически действвующего
прибора "Зонд".
3.3. Содержание кислорода в первоначальной или разбаввленной
пробе должно оставаться в течение всего периода инкубации таким,
чтобы были обеспечены нормальные условия протекания аээробных
биохимических процессов. Эти условия будут соблюдены,, если
анализируемая проба перед началом определения будет наасыщена
кислородом воздуха (приблизительно до 8 - 9 мг/л О при 20 -С), и
2
если во время инкубации произойдет снижение концентрации кисслорода
на 2 мг/л или больше, но так, чтобы спустя пять сутток она
составляла не менее 2 мг/л О .
2
3.4. Пробы с предполагаемым БПК от 0 до 6 мг/л О иссследуют
5 2
без разбавления. Пробы с предполагаемым БПК выше 6 ммг/л О
5 2
необходимо разбавлять. В случае, когда предполагаемое БПК
5
неизвестно, рекомендуется делать несколько разбавлений: 1; 0,5;
0,2.
3.5. Рекомендуется следующее разбавление проб исслеедуемой
воды:
-------------T--------------T---------------------T---------------¬
¦Разбавление ¦Объем пробы в ¦Диапазон определяе- ¦ Округлеение ¦
¦ ¦1 л смеси, мл ¦мого БПК , мг/л ¦ результаатов ¦
¦ ¦ ¦ 5 ¦ ¦
+------------+--------------+---------------------+---------------+
¦1 ¦неразбавленная¦0 - 6 ¦0,1 ¦
¦ ¦проба ¦ ¦ ¦
+------------+--------------+---------------------+---------------+
¦0,5 ¦500 ¦4 - 12 ¦0,2 ¦
+------------+--------------+---------------------+---------------+
¦0,2 ¦200 ¦10 - 30 ¦0,5 ¦
+------------+--------------+---------------------+---------------+
¦0,1 ¦100 ¦20 - 60 ¦1,0 ¦
+------------+--------------+---------------------+---------------+
¦0,05 ¦50 ¦40 - 120 ¦2,0 ¦
+------------+--------------+---------------------+---------------+
¦0,02 ¦20+ ¦100 - 300 ¦5,0 ¦
+------------+--------------+---------------------+---------------+
¦0,01 ¦10+ ¦200 - 600 ¦10,0 ¦
+------------+--------------+---------------------+---------------+
¦0,005 ¦5++ ¦400 - 1200 ¦20,0 ¦
+------------+--------------+---------------------+---------------+
¦0,002 ¦2++ ¦1000 - 3000 ¦50,0 ¦
+------------+--------------+---------------------+---------------+
¦0,001 ¦1++ ¦2000 - 6000 ¦100,0 ¦
L------------+--------------+---------------------+----------------
+ - при отмеривании цилиндром необходимо провести добавочное
разбавление;
++ - при отмеривании пипеткой необходимо провести добавочное
разбавление.
3.6. Требуемое разбавление можно ориентировочно рассчитать по
результату определения окисляемости: величину окисляемости воды,
выраженную в мг/л, делят на 4 или 5. Полученный результат
показывает, во сколько раз следует разбавить исследуемую воду.
3.7. При определении БПК рН воды устанавливают в прределах
5
6,5 - 8,5.
3.8. Исследуемую воду (при 20 -С) наливают в бутыль на 2/3
объема и аэрируют путем встряхивания или продувания воздуха. Затем
с помощью сифона воду наливают в четыре склянки с притертыми
пробками. Лучше применять склянки с притертыми пробками и
шлифованными колпачками. В таком случае при постановке склянок на
пятисуточную инкубацию в колпачок наливают дистиллированную воду,
и склянки ставят вверх дном. Склянки без пришлифованных колпачков
помещают в кюветы пробкой вниз - так, чтобы пробка была под водой,
которую наливают в кюветы.
3.9. В двух склянках (параллельные пробы) кислород опрееделяют
не позднее чем через 15 минут. Его содержание должно быть
примерно 8 - 9 мг/л О .
2
3.10. Две другие склянки помещают в термостат при 20 --С или
при комнатной температуре (без доступа света) на пять суток.. Затем
в них определяют содержание кислорода. Оно должно быть нее менее
2 мг/л О .
2
3.11. Вычисляют БПК неразбавленной пробы по формуле:
5
У = А - А ,
1 2
где:
У - искомое БПК , в мг/л О ;
5 2
А - содержание растворенного в воде кислорода до инкуббации в
1
мг/л О ;
2
А - содержание растворенного в воде кислорода после инккубации
2
в течение пяти суток в мг/л О .
2
3.12. Определение БПК методом разбавления проводят прри его
5
значении больше 6 мг/л О .
2
3.13. Испытываемую воду (20 -С) смешивают с разбавляющейй водой
(20 -С) (см. Приложение 1).
3.14. Разбавленную пробу аэрируют, наливают в скляянки и
определяют содержание кислорода так же, как при определениии БПК
5
неразбавленной пробы. Для контроля определяют БПК разбаввляющей
5
воды.
3.15. Вычисляют БПК разбавленной пробы по формуле:
5
В - В
1 2
Х = ------,
Р
где:
Х - искомое БПК в мг/л О ,
5 2
В - концентрация растворенного кислорода в пробе вводы до
1
инкубации;
В - концентрация растворенного кислорода в пробе вводы на
2
пятый день инкубации;
Р - разбавление, т.е. объем пробы в 1 л смеси ппробы и
разбавляющей воды.
3.16. Для проб, исследование которых проводилось при
нескольких разбавлениях, приводят результат того определения, где
было израсходовано приблизительно 50% кислорода от первоначального
его содержания.
3.17. При записи результатов отмечают разбавление (Р) и
предварительную обработку пробы.
4. Оценка результатов
4.1. В зависимости от величины БПК все водоемы разделяюются на
5
три категории (по среднеарифметической величине всехх проб
исследования за сезон эксплуатации):
-----------------T-----------------T------------------------------¬
¦ Категория ¦ Оценка ¦ Величина БПК , мг/л О ¦
¦ ¦ ¦ 5 2 ¦
+----------------+-----------------+------------------------------+
¦Первая ¦чистые ¦до 7 ¦
+----------------+-----------------+------------------------------+
¦Вторая ¦загрязненные ¦от 7 до 14 ¦
+----------------+-----------------+------------------------------+
¦Третья ¦грязные ¦свыше 14 ¦
L----------------+-----------------+-------------------------------
4.2. Водоемы первой категории (чистые) наиболее оттвечают
ветеринарно-санитарным требованиям и могут эксплуатироватьься без
ограничений.
4.3. Допускается эксплуатация высокопродуктивных каарповых
прудов второй категории (загрязненные). В таких прудах в ттечение
сезона эксплуатации происходит колебание БПК от показзателей
5
первой категории до показателей третьей. Водоснабжение воодоемов
этой категории производится, как правило, из чистых
водоисточников.
4.4. Водоемы третьей категории (грязные) не должны
использоваться для карпового рыбоводства. Водоемы этой каттегории
необходимо выводить на летование или реконструировать ссистему
водоснабжения.
4.5. При повышении БПК до 20 мг/л О могут наступить зааморные
5 2
явления среди рыб. Поэтому необходимо принимать меры к сннижению
этого показателя путем увеличения проточности, аэрации и др.
С утверждением настоящих Методических указаний утраачивают
силу Методические указания по санитарной оценке воды, исполььзуемой
в карповом рыбоводстве, путем определения биохимичческого
потребления кислорода за пять суток (БПК ), утвержденные ГГУВ МСХ
5
СССР 5 марта 1979 года.
Приложение 1
к "Методическим указаниям
по определению биохимического
потребления кислорода
при санитарной оценке воды
в рыбохозяйственных
водоемах",
утв. 4 октября 1999 года
1. Аппараты и реактивы
Сосуды емкостью 1 - 2 л для отбора проб исследуемой воды
Приборы для определения растворенного в воде кислорода (в
зависимости от метода определения: электрохимический анализатор
кислорода "ЭГ-152-003"; анализатор АКВА-Л; переносный кислородомер
типа КМ-101)
Склянки емкостью 150 - 300 мл с притертыми пробками,
калиброванные с точностью до 0,1 мл
Устройство для аэрации (шары Ричардсона, компрессоры для
аквариумов и др.)
Пипетки на 1, 2, 5, 10 мл с подразделением через 0,1 мл
Цилиндры на 100, 250, 500 мл
Весы оптические или рычажные
Весы аналитические
Дистиллированная вода
Разбавляющая вода (готовится в день применения из
дистиллированной воды, не содержащей меди, цинка, железа, хлора,
хлорамина, органических веществ). К 1 л дистиллированной воды
прибавляют по 1 мл следующих четырех растворов, приготовленных из
расчета на 1 л дистиллированной воды из реактивов ч.д.а.:
1) фосфатно-буферный рН 7,2 (8,5 г КН РО ; 21,75 г КК НРО ;
2 4 2 4
33,4 г Na HPO х 7Н О и 1,7 г NH Cl);
2 4 2 4
2) сульфат магния (22,5 г MgSO х 7Н О);
4 2
3) хлорид кальция (27,5 безводного СаСl );
2
4) хлорид железа (0,25 г FeCl х 6Н О).
3 2
2. Реактивы для определения растворимого в воде кислорода по
методу Винклера:
раствор сульфата марганца или хлорида марганца (400 г ММnSO х
4
х 2Н О, или 480 г MnSO x 4Н О, или 364 г MnSO х Н О илии 425 г
2 4 2 4 2
МnСl х 4Н О растворяют в 1 л дистиллированной воды);
2 2
щелочной раствор йодида калия (700 г КОН или 500 г NaOH и
150 г йодида калия растворяют в 1 л дистиллированной воды);
концентрированная соляная кислота (HCl) х.ч. уд.в. 1,119 или
25% серная кислота х.ч. (H SO );
2 4
0,01 или 0,02 н раствор тиосульфата натрия (Na S O )) (1 мл
2 2 2
0,01 н раствора тиосульфата натрия эквивалентен 0,0008 мг
кислорода);
0,5 или 1%-ный раствор крахмала (0,5 или 1 г растворимого
крахмала добавляют к 100 мл дистиллированной воды и кипятят 3 - 5
минут).
3. Определение растворимого в воде кислорода по методу Винклера
Принцип метода. При прибавлении к воде, содержащей
растворенный кислород, хлористого марганца или сульфата марганца и
едкого калия или натрия образуется осадок закиси марганца, который
окисляется кислородом, растворенным в воде, в гидрат окиси
марганца. Гидрат окиси марганца окисляет в кислой воде йодид
калия, введенный ранее со щелочью, с образованием свободного йода
в количестве эквивалентном кислороду. Выделившийся йод
оттитровывают раствором тиосульфата натрия.
Порядок анализа и техника работы при определении растворенного
в воде кислорода
В склянку с притертой пробкой емкостью 150 - 300 мл наливают
исследуемую воду до горлышка так, чтобы под пробкой не осталось
пузырьков воздуха.
В склянку с исследуемой водой пипеткой с оттянутым кончиком
немедленно на дно наливают 3 мл раствора сульфата марганца и 3 мл
щелочного раствора йодистого калия.
Склянку закрывают пробкой, под которой не должно быть
пузырьков воздуха, хорошо взбалтывают и оставляют до полного
осаждения образовавшегося осадка.
После осаждения гидрата окиси марганца в ту же склянку
прибавляют 5 мл концентрированной соляной кислоты (или 25%-ной
серной кислоты), закрывают пробкой, энергично встряхивают пока не
растворится осадок гидрата окиси марганца и жидкость не
просветлеет, а от выделившегося йода не окрасится в желтый цвет.
В коническую колбу емкостью 250 мл наливают из склянки 50 или
100 мл исследуемого раствора и выделившийся йод титруют 0,01 н или
0,02 н раствором тиосульфата натрия. Титрование проводят вначале
до светло-желтого цвета, а затем прибавляют раствор крахмала и
титруют до обесцвечивания. Можно титровать весь объем склянки.
Расчет количества растворенного кислорода производят по
формуле:
0,16F х N х 1000
А = ---------------- мг О на 1 л,
V - V 2
1 2
где:
0,16 - эквивалентность 1 мл 0,02 н раствора тиосулльфата,
мг О ;
2
N - количество 0,02 н раствора тиосульфата, пошедшшего на
титрование;
F - поправка на титр 0,02 н раствора тиосульфата;
V - объем воды в склянке, мл;
1
V - объем взятых реактивов.
2
|
