|
Стр. 1
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ СССР
ПРИКАЗ
15 октября 1974 г.
N 960
ОБ УНИФИКАЦИИ
КЛИНИЧЕСКИХ ЛАБОРАТОРНЫХ МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
Внедрение в практику унифицированных методов клинических
лабораторных исследований, утвержденных приказом Министра
здравоохранения СССР N 290 от 11 апреля 1972 года, позволило
ввести более прогрессивные диагностические методы, упорядочить
работу клинико - диагностических лабораторий, повысить
производительность труда, сократить дублирование лабораторных
исследований, стало основой для разработки рациональных форм
готовых наборов реактивов.
В целях дальнейшей унификации клинических лабораторных методов
исследования в клинико - диагностических лабораториях
лечебно - профилактических учреждений страны:
I. УТВЕРЖДАЮ:
1) Перечень унифицированных методов клинических лабораторных
исследований (приложение N 1) в дополнение к приказу N 290 от
11.IV-1972 г.
2) Методические указания по применению унифицированных
клинических лабораторных методов исследований (приложение N 2).
3) Терминологию к унифицированным методам клинических
лабораторных исследований (приложение N 3).
II. ПРИКАЗЫВАЮ:
1) Министрам здравоохранения союзных и автономных республик,
заведующим краевыми, областными, городскими отделами
здравоохранения:
а) организовать, начиная с 1975 года, проведение лабораторных
исследований во всех клинико - диагностических лабораториях по
утвержденным унифицированным методам;
б) обеспечить обучение врачей и лаборантов со средним
медицинским образованием на местных базах применению
унифицированных методов лабораторной диагностики.
2) Главному управлению учебных заведений (т. Исаков Ю.Ф.)
внести изменения в учебные планы и программы циклов специализации
и усовершенствования врачей по клинической лабораторной
диагностике с учетом применения унифицированных методов
лабораторных исследований.
III. Рекомендовать врачебно - санитарному управлению МПС (т.
Лежнев Н.Д.), медицинскому управлению МГА (т. Шинкаренко И.П.) и
Центральному совету по управлению курортами профсоюзов ВЦСПС (т.
Козлов И.И.) ввести в лечебно - профилактических учреждениях,
подведомственных этим управлениям, унифицированные методы
клинических лабораторных исследований.
IV. Контроль за выполнением настоящего приказа возложить на
Главное управление лечебно - профилактической помощи (т. Сягаев
С.А.).
Министр
здравоохранения СССР
Б.ПЕТРОВСКИЙ
Приложение N 1
к приказу Министерства
здравоохранения СССР
от 15.10.1974 г. N 960
ПЕРЕЧЕНЬ
УНИФИЦИРОВАННЫХ КЛИНИЧЕСКИХ ЛАБОРАТОРНЫХ
МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
1. ОБЩЕКЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
1.1. Исследование секреторной функции желудка
1.1.1. Раздражители желудочной секреции
1.1.2. Фракционный метод извлечения желудочного содержимого с
применением тонкого зонда
1.1.3. Определение кислотности желудочного содержимого
1.1.4. Определение активности пепсина в желудочном содержимом
с использованием в качестве субстрата сухой плазмы (метод
Туголукова)
1.1.5. Определение активности пепсина в желудочном содержимом
с использованием в качестве субстрата гемоглобина (метод Ансона в
модификации Черникова)
2. ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Методы клинической гематологии
2.1.1. Определение гемоглобина крови гемиглобинцианидным
методом с применением ацетонциангидрина
2.1.2. Определение осмотической резистентности эритроцитов
2.2. Методы исследования системы свертывания крови и
фибринолиза
2.2.1. Определение времени свертывания крови
2.2.2. Определение времени рекальцификации плазмы
2.2.3. Определение толерантности плазмы к гепарину
Метод I. Определение толерантности к гепарину цитратной плазмы
Метод II. Определение толерантности к гепарину оксалатной
плазмы
2.2.4. Определение протромбинового (тромбопластинового)
времени
Метод I. Определение протромбинового времени плазмы
Метод II. Определение протромбинового времени разведенной
плазмы
Метод III. Определение протромбинового времени в капиллярной
крови
2.2.5. Определение фибриногена в плазме весовым методом
2.2.6. Определение фибриногена в плазме колориметрическим
методом
2.2.7. Определение фибриногена Б в плазме
2.2.8. Определение содержания фактора VIII в плазме,
антигемофильных препаратах
2.2.9. Определение активности фактора XIII в плазме ускоренным
методом
2.2.10. Определение фибринолитической активности методом
лизиса эуглобулинов плазмы
3. БИОХИМИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Методы исследования безбелковых азотистых компонентов
3.1.1. Определение мочевины в сыворотке крови уреазным методом
по реакции с фенол - гипохлоритом
3.1.2. Определение мочевины в сыворотке крови экспресс -
методом с применением реактивной бумаги "Уреатест"
3.2. Методы исследования углеводного обмена
3.2.1. Определение глюкозы в крови, плазме (сыворотке),
спинномозговой жидкости глюкозооксидазным методом
3.3. Методы исследования липидного обмена
3.3.1. Определение общих липидов в сыворотке крови по цветной
реакции с сульфофосфованилиновым реактивом
3.3.2. Определение триглицеридов в сыворотке крови по цветной
реакции с хромотроповой кислотой
3.3.3. Определение бета - липопротеидов в сыворотке крови
турбидиметрическим методом
3.4. Методы исследования минерального обмена
3.4.1. Определение железа в сыворотке крови по цветной реакции
с батофенантролином
3.4.2. Определение магния в сыворотке крови (плазме) по
цветной реакции с титановым желтым
3.4.3. Определение магния в сыворотке (плазме) крови и моче по
цветной реакции с магоном
3.4.4. Определение калия в биологических жидкостях методом
пламенной фотометрии
3.4.5. Определение натрия в биологических жидкостях методом
пламенной фотометрии
3.5. Методы исследования активности ферментов
3.5.1. Определение активности альфа - амилазы в сыворотке
крови, моче и дуоденальном содержимом амидопластическим методом со
стойким крахмальным субстратом (метод Каравея)
3.5.2. Определение активности лактатдегидрогеназы в сыворотке
крови по реакции с 2,4 динитрофенилгидразином (метод Севела,
Товарек)
3.5.3. Определение активности сорбитолдегидрогеназы в
сыворотке крови по реакции с резорцином (метод Севела, Товарек)
3.5.4. Определение активности трипсина в биологических
жидкостях с субстратом Nальфа-бензоил-dl-аргинин-p-нитроанилид
(метод Эрлангера в модификации Шатерникова)
3.5.5. Определение активности холинэстеразы в сыворотке крови
колориметрическим методом по гидролизу ацетилхолинхлорида
3.5.6. Определение активности холинэстеразы в сыворотке крови
экспресс-методом с применением индикаторной бумаги (метод
Герцфельда и Штрумпфа в модификации Децика и Туркевича)
3.5.7. Обнаружение активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы
эритроцитов (проба Бернштейна)
4. ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
4.1. Изоиммунология (изосерология)
4.1.1. Определение групп крови системы АВО при помощи
стандартных сывороток
4.1.2. Определение групп крови системы АВО перекрестным
способом при помощи стандартных сывороток и стандартных
эритроцитов
4.1.3. Определение резус - фактора методом агглютинации в
солевой среде в пробирках
4.1.4. Определение резус - фактора методом конглютинации с
применением желатины
4.1.5. Определение резус - фактора методом конглютинации в
сывороточной среде на чашках Петри
4.1.6. Определение резус - фактора на плоскости при комнатной
температуре с помощью сывороток, приготовленных на альбумине или
полиглюкине (экспресс - метод)
4.1.7. Исследование сыворотки крови на наличие полных
резус - антител методом агглютинации в солевой среде в пробирках
4.1.8. Исследование сыворотки крови на наличие неполных
резус - антител методом конглютинации с применением желатины
4.1.9. Исследование сыворотки крови на наличие неполных
резус - антител непрямой пробой Кумбса
4.1.10. Определение титра полных резус - антител методом
агглютинации в солевой среде в пробирках
4.1.11. Определение титра неполных резус - антител методом
конглютинации с применением желатины
4.1.12. Определение титра неполных резус - антител непрямой
пробой Кумбса
4.1.13. Прямая проба Кумбса
4.1.14. Определение титра антител прямой пробой Кумбса
4.2. Иммунодиагностика первичных гепатом и тератобластом
4.2.1. Определение альфа - фетопротеина человека реакцией
микропреципитации в агаре
4.3. Серодиагностика сифилиса
4.3.1. Реакция связывания комплемента комплексом липоидного
антигена и реагина или трепонемального антигена и антитрепонемных
антител исследуемой сывороки (реакция Вассермана, качественный
метод)
4.3.2. Реакция связывания комплемента комплексом липоидного
антигена и реагина или трепонемального антигена и антитрепонемных
антител исследуемой сыворотки (реакция Вассермана, количественный
метод)
4.3.3. Реакция связывания комплемента комплексом липоидного
антигена и реагина с использованием естественного комплемента
исследуемой сыворотки (реакция Григорьева - Раппопорта)
4.3.4. Реакция связывания комплемента комплексом липоидного
антигена и реагина с использованием естественного комплемента и
гемолизина исследуемой сыворотки (реакция Вайнштейна - Резниковой)
4.3.5. Реакция трехфазного связывания комплемента комплексом
липоидного антигена и реагина исследуемой сыворотки (реакция
Колмера, качественный метод)
4.3.6. Реакция трехфазного связывания комплемента комплексом
липоидного антигена и реагина исследуемой сыворотки (реакция
Колмера, количественный метод)
4.3.7. Осадочная реакция с образованием комплекса антигена
Кана и реагина исследуемой сыворотки (реакция Кана)
4.3.8. Осадочная реакция с образованием комплекса цитохолевого
антигена и реагина исследуемой сыворотки (реакция Закс -
Витебского)
4.3.9. Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИТ)
4.3.10. Реакция иммобилизации бледных трепонем меланжерным
методом Овчинникова
4.3.11. Микрометод реакции связывания комплемента комплексом
антигена патогенных бледных трепонем и противотрепонемных антител
4.3.12. Микрометод реакции трехфазного связывания комплемента
(реакция Колмера в 1/5 объема, качественный метод)
4.3.13. Микрометод реакции трехфазного связывания комплемента
(реакция Колмера в 1/5 объема, количественный метод)
4.3.14. Реакция иммунофлуоресценции (РИФ)
4.4. Ликвородиагностика сифилиса
4.4.1. Подсчет количества форменных элементов
4.4.2. Определение общего белка
4.4.3. Определение глобулинов высаливанием (реакция
Нонне-Апельта)
4.4.4. Определение глобулинов осаждением насыщенным раствором
карболовой кислоты (реакция Панди)
4.4.5. Коллоидная реакция с хлорным золотом (реакция Ланге)
4.4.6. Реакция связывания комплемента комплексом липоидного
антигена и реагина или трепонемального антигена и антитрепонемных
антител исследуемой спинномозговой жидкости (реакция Вассермана,
количественный метод)
4.5. Иммунодиагностика гельминтозов
4.5.1. Определение титра антител при эхинококкозе и
альвеококкозе реакцией латекс - агглютинации
Метод I. Реакция латекс - агглютинации с эхинококковым
диагностикумом
Метод II Реакция латекс - агглютинации с нативным антигеном
4.5.2. Определение титра антител при трихинеллезе реакцией
связывания комплемента на холоду
4.5.3. Определение титра антител при цистицеркозе реакцией
связывания комплемента на холоду
5. КЛИНИЧЕСКАЯ ЛАБОРАТОРНАЯ ПАРАЗИТОЛОГИЯ
5.1. Методы исследования биологического материала на наличие
простейших
5.1.1. Обнаружение простейших кишечника в фекалиях методом
нативного мазка и мазка с раствором Люголя
5.1.2. Обнаружение простейших кишечника в фекалиях с
применением консервантов
5.1.3. Обнаружение простейших кишечника в фекалиях методом
формалин - эфирного обогащения
5.1.4. Обнаружение лейшманий в мазке костного мозга
5.1.5. Обнаружение лейшманий в мазке из кожного инфильтрата
5.1.6. Обнаружение лейшманий в соскобе пораженных тканей
культуральным методом
5.2. Методы исследования биологического материала на наличие
гельминтов, их фрагментов и яиц
5.2.1. Обнаружение гельминтов в фекалиях
5.2.2. Обнаружение яиц гельминтов в фекалиях методом толстого
мазка (метод Като)
5.2.3. Обнаружение яиц гельминтов в фекалиях методом
обогащения
5.2.4. Обнаружение яиц гельминтов в фекалиях с применением
детергентов (метод Красильникова)
Метод I
Метод II
5.2.5. Обнаружение яиц гельминтов в перианально-ректальных
соскобах с применением деревянного шпателя
5.2.6. Обнаружение личинок гельминтов в фекалиях (метод
Бермана)
5.2.7. Обнаружение личинок гельминтов в фекалиях
культивированием их на фильтровальной бумаге (метод Харада и Мори)
5.2.8. Обнаружение яиц гельминтов в дуоденальном содержимом и
желчи.
Приложение N 2
к приказу Министерства
здравоохранения СССР
от 15.10.1974 г. N 960
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ПРИМЕНЕНИЮ УНИФИЦИРОВАННЫХ КЛИНИЧЕСКИХ
ЛАБОРАТОРНЫХ МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
Введение
Настоящим приказом вводятся в действие Методические указания
по применению унифицированных методов клинических лабораторных
исследований по следующим разделам: общеклинический,
гематологический, биохимический, иммунологический и клиническая
лабораторная паразитология.
Методические указания, утвержденные приказом Министра
здравоохранения СССР N 290 от 11 апреля 1972 года, настоящим
приказом не отменяются.
В дополнение к ранее утвержденным методам для ряда показателей
(глюкоза, мочевина, амилаза и др.) вводятся в действие также в
качестве унифицированных новые, более прогрессивные методы.
Клинико - диагностическая лаборатория может пользоваться любым
унифицированным методом, однако рекомендуется постепенный переход
на более прогрессивные унифицированные методы.
Общие положения, изложенные в приложении N 2 к приказу
Министра здравоохранения СССР N 290 от 11 апреля 1972 года,
сохраняют свою силу и для Методических указаний, утверждаемых
настоящим приказом.
В настоящих Методических указаниях несколько изменена
терминология с учетом решения Комиссии по унификации и контролю
качества клинических лабораторных методов исследования (см.
приложение N 3 к настоящему приказу).
Работа по унификации клинических лабораторных методов
исследования и по составлению настоящих методических указаний
проведена сотрудниками следующих учреждений:
Всесоюзный научно - методический центр по лабораторному делу
МЗ СССР: Профессор В.В.Меньшиков - научный руководитель,
Канд. биол. наук Л.Н.Делекторская,
Н.А.Сентебова,
М.Г.Москвитина,
С.П.Михайлова,
Канд. мед. наук Т.Я.Вайнштейн,
Канд. мед. наук Л.М.Пименова,
Канд. мед. наук Т.И.Лукичева,
Э.Г.Тебиева,
Д.Д.Добрянская,
при техническом содействии Т.С.Уткиной и Н.А.Садыковой;
Центральный Ордена Ленина институт гематологии и переливания
крови МЗ СССР;
Центр по изучению и стандартизации групп крови:
Профессор М.А.Умнова;
Комиссия по унификации методов исследования системы
свертывания крови секции "Системы свертывания крови и фибринолиза"
при Союзной проблемной комиссии болезней системы крови,
переливания крови и кровезаменителей МЗ СССР:
Профессор В.П.Балуда - председатель,
Докт. мед. наук Р.А.Рутберг - зам. председателя,
Профессор Г.В.Андреенко,
Докт. мед. наук К.Д.Ломазова,
Профессор Е.П.Степанян,
Профессор З.Д.Федорова;
Институт медицинской паразитологии и тропической медицины МЗ
СССР: Канд. мед. наук О.Н.Келлина,
Канд. мед. наук Л.А.Майорова,
Канд. биол. наук М.М.Соловьев;
Центральный кожно - венерологический институт МЗ СССР:
Профессор Н.М.Овчинников,
Докт. мед. наук Л.В.Сазонова,
Докт. мед. наук В.Н.Беднова;
III-я кафедра терапии ЦОЛИУ врачей:
Профессор Л.И.Идельсон;
Институт эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи АМН
СССР: Профессор Г.И.Абелев,
Канд. мед. наук А.И.Гусев,
Канд. биол. наук С.Д.Перова,
Канд. биол. наук А.К.Язова.
Работа проводилась под руководством Комиссии по унификации и
контролю качества клинических лабораторных методов исследования:
Профессор В.В.Меньшиков - председатель,
Канд. мед. наук И.С.Балаховский - зам. председателя и
Консультативного совета по лабораторному делу МЗ СССР:
Профессор В.Т.Морозова - председатель,
при содействии Всесоюзного научного общества врачей - лаборантов:
Профессор А.С.Петрова - председатель,
В рецензировании Методических указаний приняли участие
сотрудники:
Клинических кафедр I ММИ им. И.М.Сеченова;
кафедры клинической лабораторной диагностики ЦОЛИУ врачей;
Центрального научно - исследовательского института
гастроэнтерологии;
Московского областного научно - исследовательского
клинического института им. М.Ф.Владимирского;
Института кардиологии МЗ Армянской ССР;
Государственного научно - исследовательского института по
стандартизации и контролю лекарственных средств МЗ СССР;
Лаборатории гастроэнтерологии Института акушерства и
гинекологии АМН СССР;
Казахского научно - исследовательского института эпидемиологии
и микробиологии МЗ Казахской ССР;
Научно - исследовательского института медицинской
паразитологии и тропической медицины им. С.М.Кирова МЗ
Азербайджанской ССР;
Научно - исследовательского института медицинской
паразитологии и тропической медицины им. С.С.Вирсаладзе МЗ
Грузинской ССР;
Ленинградского научно - исследовательского института
гематологии и переливания крови МЗ РСФСР;
Научно - исследовательского института инфекционных болезней МЗ
УССР.
I. ОБЩЕКЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
1.1. ИССЛЕДОВАНИЕ СЕКРЕТОРНОЙ ФУНКЦИИ ЖЕЛУДКА
1.1.1. Раздражители желудочной секреции
Применяются парэнтеральные и энтеральные раздражители.
Парэнтеральные раздражители. Из парэнтеральных раздражителей
желудочной секреции рекомендуется применять гистамин, солянокислый
или фосфорнокислый.
Метод субмаксимальной стимуляции гистамином. Солянокислый
гистамин вводят подкожно из расчета 0,008 мг/кг веса пациента,
фосфорнокислый гистамин - 0,01 мг/кг веса. Секреторный эффект
гистамина проявляется через 7-10 минут, достигает максимума через
45-60 минут и продолжается 1-1,5 часа, постепенно убывая в
интенсивности.
Метод максимальной стимуляции гистамином по Кею. Солянокислый
гистамин вводят из расчета 0,024 мг/кг, фосфорнокислый гистамин -
0,04 мг/кг веса пациента. При применении максимальной стимуляции
гистамином обязательно за 30 мин. до введения раздражителя вводят
антигистаминные препараты (2 мл 2% раствора супрастина).
Энтеральные раздражители. Из энтеральных раздражителей
желудочной секреции рекомендуется применять 7% отвар сухой
капусты.
Приготовление отвара сухой капусты. 21 г сухой капусты
заливают 300 мл воды, кипятят 30-40 мин. до получения общего
объема отвара около 300 мл. Отвар фильтруют через 2 слоя марли,
разливают в прокипяченую посуду и хранят в холодильнике.
Перед употреблением отвар оттитровывают: к 10 мл отвара
прибавляют 1-2 капли фенолфталеина и титруют 0,1М раствором едкого
натра до изменения окраски (потемнения). Так как отвар до
титрования окрашен, то титруют на белом фоне, сравнивая с
первоначальной окраской отвара.
Титр отвара капусты выражают в условных единицах. Одна
титрационная единица равна 1 мл 0,1н раствора едкого натра,
пошедшему на титрование 100 мл желудочного содержимого, и
соответствует концентрации соляной кислоты, равной 1 мэкв/л. Титр
капустного отвара не должен превышать 20 единиц (20 мэкв/л). Если
титр выше, то отвар разводят кипяченой водой.
1.1.2. Фракционный метод извлечения желудочного содержимого
с применением тонкого зонда
Тонкий зонд представляет резиновую трубку, толщиной около 5
мм, диаметром просвета - 2-3 мм, длиной 1,2-1,5 м. На расстоянии
1,5-3,5 см от слегка заостренного конца имеются два отверстия,
через которые происходит аспирация желудочного содержимого. Для
ориентировки места нахождения зонда в желудке зонд имеет две
метки: одна - на расстоянии 50-55 см и другая - на расстоянии
70-75 сантиметров от заостренного конца зонда. Введение зонда до
1-й метки свидетельствует о нахождении внутреннего конца в области
дна желудка, а продвижение зонда до 2-й метки - о нахождении его в
области привратника желудка.
Тонкий зонд стерилизуют кипячением в течение 20 минут.
Метод извлечения. Пациенту натощак, после 14-часового
голодания, вводят в желудок тонкий зонд до первой метки. При
помощи шприца извлекают все содержимое. Получают "натощаковую"
порцию желудочного содержимого. Затем в течение часа, через каждые
15 минут производят забор четырех порций желудочного содержимого
("базальная секреция"). После этого вводят раздражитель.
При применении энтерального раздражителя через 25 минут
откачивают все содержимое желудка. После этого в течение часа,
через каждые 15 минут производят забор четырех порций желудочного
содержимого.
При применении парэнтерального раздражителя, сразу же в
течение часа, через каждые 15 минут производят забор четырех
порций желудочного содержимого. Это соответствует "часовому
напряжению секреции" после раздражителя. Затем зонд извлекают из
желудка.
Примечания.
1. При большом контингенте пациентов возникает необходимость в
исследовании нескольких человек одновременно. С этой целью удобно
использовать аспирационный вакуум - отсос. При применении вакуум -
отсоса извлечение желудочного содержимого происходит непрерывно,
но порции собирают раздельно, через каждые 15 минут, аналогично
вышеописанному способу: в течение часа до введения раздражителя и
в течение часа после введения раздражителя.
2. Фракционный метод извлечения желудочного содержимого
предусматривает обязательное исследование базальной секреции и
секреции после введения раздражителя. Базальная и стимулированная
секреция изучаются в течение часа. Это облегчает сопоставление
соответствующих показателей секреции, поскольку они получены за
равные промежутки времени.
3. В случае отсутствия стимулирующего эффекта на желудочную
секрецию при применении капустного отвара целесообразно повторить
зондирование с применением субмаксимальных или максимальных доз
гистамина.
1.1.3. Определение кислотности желудочного содержимого
Принцип. Желудочное содержимое титруют 0,1н раствором едкого
натра в присутствии индикаторов.
Реактивы.
1. 1% спиртовой раствор фенолфталеина. Интервал перехода
окраски в рН - 8,2-10. Стабилен при хранении при комнатной
температуре.
2. 0,5% спиртовой раствор 4-диметиламиноазобензола (метиловый
желтый, диметиловый желтый). Интервал перехода окраски в рН -
2,9-4,0. Стабилен при хранении при комнатной температуре.
3. 1% водный раствор ализаринсульфоновокислого натрия
(ализариновый красный С/S/). Интервал перехода окраски в рН -
4,3-6,3. Стабилен при хранении при комнатной температуре.
4. 0,1н раствор едкого натра.
Специальное оборудование.
Бюретки на 25 мл, 50 мл или 100 мл.
Колбы конические на 50 мл.
Ход определения. В две колбы наливают по 5 мл
профильтрованного желудочного содержимого. В первую - добавляют
1-2 капли 1% спиртового раствора фенолфталеина и 1-2 капли 0,5%
спиртового раствора диметиламиноазобензола. Во вторую - 1-2 капли
ализаринсульфоновокислого натрия. Титруют 0,1н раствором едкого
натра при постоянном помешивании.
В процессе титрования желудочное содержимое меняет окраску.
В первой порции отмечают:
1) количество щелочи, пошедшей на титрование до перехода
первоначального красного цвета в желто - розовый ("цвет семги").
Это соответствует количеству свободной соляной кислоты и
выявляется индикатором диметиламиноазобензолом.
2) общее количество щелочи, пошедшее на титрование до перехода
окраски в стойкий красный цвет. Это соответствует общей
кислотности и выявляется индикатором фенолфталеином.
Во второй порции отмечают количество щелочи, пошедшей на
титрование от перехода первоначальной желтой окраски в фиолетовую.
Это соответствует сумме всех кисло реагирующих веществ, кроме
связанной соляной кислоты, и выявляется индикатором
ализаринсульфоновокислым натрием.
В каждой порции извлеченного желудочного содержимого
определяют свободную соляную кислоту, общую кислотность и - в
случае необходимости - связанную соляную кислоту.
Расчет. Кислотность желудочного содержимого определяют по
количеству миллилитров 0,1н раствора едкого натра, пошедшему на
титрование 100 мл желудочного содержимого (условные титрационные
единицы). Так как для титрования берут 5 мл желудочного
содержимого, а расчет ведут на 100 мл, то количество потраченной
щелочи умножают на 20. Одна титрационная единица соответствует
концентрации соляной кислоты, равной 1 мэкв/л.
Пример расчета. Первая порция:
1. 1,5 мл 0,1 н NaOH (желто - розовый цвет) - 1,5х20 = 30
титр. ед. (30 мэкв/л). Свободная соляная кислота.
2. 2,6 мл 0,1 н NaOH (красный цвет) - 2,6х20 = 52 титр. ед.
(52 мэкв/л). Общая кислотность.
Вторая порция:
2,0 мл 0,1 н NaOH (фиолетовый цвет) - 2,0х20 = 40 титр. ед.
(40 мэкв/л). Все кисло реагирующие вещества, кроме связанной
соляной кислоты.
52 - 40 = 12 титр. ед. (12 мэкв/л). Связанная соляная кислота.
Для более объективной оценки кислотообразующей функции желудка
введено понятие "дебит - час". Дебит - час характеризует
количество соляной кислоты, выделившееся за час и выраженное в
миллиэквивалентах. Дебит - час соляной кислоты в миллиэквивалентах
рассчитывают по формуле:
Д = V1 х E1 х 0,001 + V2 х E2 х 0,001 + V3 х E3 х 0,001 +
где V - объем порции желудочного содержимого в миллилитрах,
E - концентрация соляной кислоты в титрационных единицах в той
же порции,
0,001 - количество миллиэквивалентов соляной кислоты в 1 мл
желудочного содержимого при концентрации ее, равной одной
титрационной единице.
Число слагаемых в формуле определяется тем, сколько порций
желудочного содержимого получено за время исследования. Если
рассчитывают "дебит - час", то число слагаемых - 4.
Поскольку величина дебит - часа зависит от часового напряжения
секреции и величины кислотности, то следует стремиться к наиболее
полному извлечению желудочного содержимого.
Нормальные величины базальной секреции.
Часовой объем желудочного сока - от 50 до 100 мл
Общая кислотность - от 40 до 60 титр. ед.
(40-60 мэкв/л)
Свободная соляная кислота - от 20 до 40 титр. ед.
(20-40 мэкв/л)
Дебит - час соляной кислоты - от 1,5 до 5,5 мэкв
Дебит - час свободной соляной кислоты - от 1,0 до 4 мэкв
Нормальные величины секреторной реакции желудка на пищевые
пробные раздражители
Часовой объем желудочного сока - от 50 до 110 мл
Общая кислотность - от 40 до 60 титр. ед.
(40-60 мэкв/л)
Свободная соляная кислота - от 20 до 40 титр. ед.
(20-40 мэкв/л)
Дебит - час соляной кислоты - от 1,5 до 6 мэкв
Дебит - час свободной соляной кислоты - от 1,0 до 4,5 мэкв
Нормальные величины секреторной реакции желудка на
субмаксимальную гистаминовую стимуляцию
Часовой объем желудочного сока - от 100 до 140 мл
Общая кислотность - от 80 до 100 титр. ед.
(80-100 мэкв/л)
Свободная соляная кислота - от 65 до 85 титр. ед.
(65-85 мэкв/л)
Дебит - час соляной кислоты - от 8 до 14 мэкв
Дебит - час свободной соляной кислоты - от 6,5 до 12 мэкв
1.1.4. Определение активности пепсина в желудочном
содержимом с использованием в качестве
субстрата сухой плазмы
(метод Туголукова)
Принцип. Сухая плазма человека расщепляется пепсином. Об
активности фермента судят по количеству субстрата, не
подвергшегося ферментативной реакции.
Реактивы.
1. 2% раствор сухой плазмы на 0,1н растворе соляной кислоты
(сухую плазму можно получить на станциях переливания крови).
2. 10% раствор трихлоруксусной кислоты.
Специальное оборудование.
Центрифужные пробирки с оттянутым и градуированным нижним
концом.
Ход определения. Опытная проба. 1 мл профильтрованного и
предварительно разведенного 1:100 дистиллированной водой
желудочного содержимого вносят в специальную центрифужную
пробирку. Добавляют 2 мл 2% раствора плазмы. Инкубируют 20 час при
37 град. С. После инкубации добавляют 2 мл 10% раствора
трихлоруксусной кислоты. Тщательно перемешивают до получения
однородной суспензии. Центрифугируют 10 мин. при 1.500 об/мин.
Измеряют величину осадка в пробирке.
Холостую пробу ставят как опытную, но используют
предварительно прокипяченое желудочное содержимое.
Расчет. Активность пепсина выражают в мг%. Расчет производят
следующим образом:
40
Показатель переваривания = (А - В) х ---- ,
субстрата (М) А
где: А - величина осадка в холостой пробе,
В - величина осадка в опытной пробе,
40 - постоянная величина, выведенная экспериментальным
путем.
Таблица
Пересчет показателей переваривания белкового субстрата
(раствора сухой плазмы)
на содержание пепсина в желудочном содержимом
------------------T-------------T----------------T---------------¬
¦ Показатель ¦ Содержание ¦ Показатель ¦ Содержание ¦
¦ переваривания ¦ пепсина ¦ переваривания ¦ пепсина ¦
¦ (М) ¦ (в мг%) ¦ (М) ¦ (в мг%) ¦
+-----------------+-------------+----------------+---------------+
¦ 1 ¦ 0,5 ¦ 20 ¦ 8,0 ¦
¦ 2 ¦ 0,8 ¦ 21,5 ¦ 9,0 ¦
¦ 3 ¦ 1,0 ¦ 22,5 ¦ 10 ¦
¦ 4 ¦ 1,5 ¦ 23 ¦ 12 ¦
¦ 5 ¦ 1,7 ¦ 24 ¦ 16 ¦
¦ 6 ¦ 2,0 ¦ 25 ¦ 20 ¦
¦ 7 ¦ 2,5 ¦ 26 ¦ 27 ¦
¦ 8 ¦ 2,7 ¦ 27 ¦ 34 ¦
¦ 9 ¦ 3,0 ¦ 28 ¦ 42 ¦
¦ 10 ¦ 3,5 ¦ 29 ¦ 50 ¦
¦ 11 ¦ 3,7 ¦ 30 ¦ 59 ¦
¦ 12 ¦ 4,0 ¦ 31 ¦ 68 ¦
¦ 13 ¦ 4,5 ¦ 32 ¦ 77 ¦
¦ 14 ¦ 4,7 ¦ 33 ¦ 86 ¦
¦ 15 ¦ 5,0 ¦ 34 ¦ 96 ¦
¦ 16 ¦ 5,5 ¦ 35 ¦ 106 ¦
¦ 17 ¦ 6,2 ¦ 36 ¦ 120 ¦
¦ 18 ¦ 6,7 ¦ 37 ¦ 150 ¦
¦ 19 ¦ 7,5 ¦ ¦ ¦
L-----------------+-------------+----------------+----------------
Нормальные величины: концентрация пепсина в содержимом
желудка,
полученном натощак - 0-21 мг%
после раздражителя - 20-40 мг%
Дебит - час пепсина в базальной секреции - 10-40 мг
Дети - час пепсина в субмаксимальной гистаминовой
стимуляции - 50-90 мг
1.1.5. Определение активности пепсина в желудочном содержимом
с использованием в качестве субстрата гемоглобина
(метод Ансона в модификации Черникова)
Принцип. Гемоглобин гидролизуется пепсином. Об активности
фермента судят по концентрации образовавшихся в процессе
ферментативной реакции продуктов гидролиза, не осаждаемых
трихлоруксусной кислотой.
Реактивы.
1. 0,1М глициновый буфер, рН - 1,5. 7,505 г глицина и 6,85 г
хлористого натрия растворяют в небольшом количестве
дистиллированной воды в мерной колбе на 1 л и доводят объем
дистиллированной водой до метки. 33 мл этого раствора смешивают с
67 мл 0,1н раствора соляной кислоты, проверяют рН. Стабилен в
течение месяца при хранении в холодильнике.
2. 0,1н раствор соляной кислоты.
3. 1% раствор гемоглобина в 0,1М глициновом буфере. Хранят в
холодильнике. Годен в течение недели.
4. 10% раствор трихлоруксусной кислоты.
5. Кристаллический пепсин.
Калибровочные растворы пепсина. Основной раствор: 7,5 мг
пепсина растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды в
мерной колбе на 1 л и доводят дистиллированной водой до метки.
Получается раствор, содержащий 7,5 мкг/мл пепсина. Рабочие
растворы готовят разведением основного раствора дистиллированной
водой в 2, 4, 8 раз и получают растворы с содержимым пепсина 3,75
мкг/мл, 1,87 мкг/мл и 0,94 мкг/мл.
Специальное оборудование.
Спектрофотометр.
Секундомер.
Колбы мерные.
Ход определения. Опытные пробы. В центрифужные пробирки
наливают 1 мл раствора гемоглобина и 1 мл разведенного в 10 или
100 раз желудочного содержимого. Инкубируют 10 мин. (точно по
секундомеру) при 37 град. С. Затем добавляют 3 мл 10% раствора
трихлоруксусной кислоты, перемешивают и оставляют стоять при
комнатной температуре на 1 час. Центрифугируют в течение 10 минут
при 1.500 об/мин. Измеряют оптическую плотность надосадочной
жидкости при длине волны 280 нм против дистиллированной воды.
Холостую пробу ставят как опытную, но трихлоруксусную кислоту
добавляют до инкубации.
Расчет ведут по калибровочному графику. Активность пепсина
выражают в мкг на 1 мл желудочного содержимого.
Построение калибровочного графика. Калибровочные пробы ставят
как опытные, но вместо желудочного содержимого добавляют по 1 мл
соответствующего раствора пепсина.
Из экстинкции калибровочных проб вычитают экстинкцию холостой
пробы. На оси ординат откладывают полученную разницу экстинкции,
на оси абсцисс - содержание пепсина в мкг/мл.
Для вычисления активности пепсина в желудочном содержимом
значения, полученные по калибровочному графику, умножают на
разведение желудочного содержимого.
Нормальные величины активности пепсина должны быть выведены на
донорах в каждой лаборатории, так как они зависят от активности
кристаллического пепсина, используемого для построения
калибровочного графика.
Литература.
1. Бокуняева Н.И., Золотницкая Р.П. В кн.: Справочник по
клиническим лабораторным методам исследования. Под ред. Е.А. Кост.
М., 1968, 29-295.
2. Методическое письмо: Исследование желудочной секреции у
гастроэнтерологических больных в поликлинических условиях.
Всесоюзный научно - исследовательский институт гастроэнтерологии
МЗ СССР, Калужская городская больница им. Красного Креста. Калуга,
1972.
3. Покровский А.А. - В кн.: Биохимические методы исследования
в клинике. М., 1969, 197.
4. Туголуков В.Н. - Современные методы функциональной
диагностики состояния слизистой оболочки желудка и их клиническое
значение. М., 1965, 108.
5. Фишзон - Рысс Ю.И. - Современные методы исследования
желудочной секреции. Л., 1972.
6. Anson M.L. - Y.Gen. Physiol., 1939, 22, 79.
2. ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. МЕТОДЫ КЛИНИЧЕСКОЙ ГЕМАТОЛОГИИ
2.1.1. Определение гемоглобина крови гемиглобинцианидным
методом с применением ацетонциангидрина<*>
--------------------------------
<*> На период соответствующего технического обеспечения
лабораторий допустимо использование ранее применявшегося метода
Сали.
Принцип. Гемоглобин при взаимодействии с железосинеродистым
калием (красная кровяная соль) окисляется в метгемоглобин
(гемиглобин), образующий с ацетонциангидрином окрашенный
цианметгемоглобин (гемиглобинцианид), интенсивность окраски
которого пропорциональна содержанию гемоглобина.
Реактивы.
1. Трансформирующий раствор:
ацетонциангидрин - 0,5 мл
калий железосинеродистый - 200 мг
(красная кровяная соль)
натрий двууглекислый
(бикарбонат натрия) - 1 г
дистиллированная вода - до 1,0 л
Стабилен при хранении в посуде из темного стекла при комнатной
температуре в течение нескольких месяцев. При появлении осадка или
обесцвечивании раствор не пригоден для употребления.
|
